脓汁和粪便标本中病原菌的检测

斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把。器材准备精选课件脓汁和粪便标本中病原菌的检测

实验流程(6次课12学时）①培养基的制备②细菌的分离培养③细菌的纯培养④细菌的形态学检查⑤细菌的生化试验等⑥细菌的血清学试验、结果分析→实验论文撰写精选课件医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（五） 细菌的糖发酵试验 抗菌素敏感性试验 血浆凝固酶试验 半固体接种法精选课件糖发酵试验

SugarFermentationTest不同细菌具有不同的糖分解酶，分解各种糖的代谢产物也各不相同，有的产酸，有的产酸又产气，据此，可以鉴别各种细菌。糖发酵管:葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖等。指示剂：溴甲酚紫，PH≥6.8为紫色，≤5.2为黄色。原理：多糖→单糖→酸性产物→pH↓→指示剂呈酸性变色。

↘若有气体→气泡。结果:培养基变黄色无气泡“+”，培养基变黄色有气泡“⊕”，培养基不变色“-”。应用:观察细菌对糖的分解情况,常用于肠道杆菌鉴定。精选课件甲→紫黑→①葡萄糖乙→紫黑→②乳糖丙→粉红→③葡萄糖丁→粉红→④乳糖37℃24小时细菌的糖发酵试验①用砂轮在糖发酵管液面上方2～3cm处，切割一道切痕。②两手握住发酵管切痕的两端，切痕线向外，两个大拇指抵住切痕的背面，用力将管子向里一扳，利用弯和拉的合力，将管子折断。管口烧灼灭菌。

③接种针针尖斜面取菌，伸入培养基内，在管壁上，上下研磨接种。退出接种针，烧灼灭菌。④管口朝向相同，放置在平皿内。精选课件小组分工甲→紫黑菌苔Atropurpureus→①葡萄糖Glucose乙→紫黑菌苔Atropurpureus→②乳糖Lactose丙→粉红菌苔Pink→③葡萄糖Glucose丁、戊→粉红菌苔Pink→④乳糖Lactose甲乙

4丙丁甲乙

3丙丁甲乙

2丙丁甲乙

1丙丁甲乙

5丙丁甲乙

8丙丁甲乙

7丙丁甲乙

6丙丁甲乙

10丙丁甲乙

9丙丁

讲台左右精选课件抗菌素敏感性试验

AntibioticSusceptibilityTestFlemingandPenicillin磺胺1907年发现，1935年临床应用。青霉素1928年发现，1941年临床应用。我国住院病人抗菌素使用率达70%，新生儿病房抗菌素使用率达100%。为了避免抗菌药物使用的盲目性，防止因不合理用药，导致耐药性细菌的增多、菌群失调等问题的发生，用药前（时），做药物敏感性试验。※卫生部发布，2012年8月1日起实施的《抗菌药物临床应用管理办法》，规定特殊使用级抗菌药物不得在门诊使用。半年之后，医院抗菌素使用率普降一半。精选课件纸片扩散法DiscAgarDiffusionMethod将含有定量抗菌素的纸片，平贴在已经接种了试验细菌的平板上。纸片中的抗菌素吸收培养基的水分，溶解后不断向周围扩散，形成递减的梯度浓度。敏感细菌在纸片周围的生长受到抑制，而形成没有细菌生长的抑菌圈。依抑菌圈的大小、有无判断敏感性。敏感（Sensitive）：试验细菌所引起的感染，可以用常用剂量的某种抗菌药物治愈。耐药（Resistant）：试验细菌引起的感染，不能用该种抗菌药物治愈。☆试验菌用量以对照琼脂平板表面生长的菌落呈密集或半密集为宜。精选课件方法步骤甲→金黄菌液乙→白色菌液丙→紫黑菌液丁→粉红菌液实验分工安全警告：①～④步骤的操作必须逐个完成，手上不得同时握持菌液管和平板，以免菌液倒出来，造成污染。①先取菌液3～6ul②沿平板直径拉一条细菌接种线。③再取菌液1次④旋转平板90度角，拉另一条接种线，使两条细菌接种线呈“十字形”。⑤然后在平板上半部，作连续来回密集划线，每次划二分之一平板。

⑥旋转平板90度角，二次密集划线。⑦旋转平板90度角，三次密集划线。⑧旋转平板90度角，四次密集划线。精选课件设计三点，呈等边三角距离，点距离平板边缘约15mm。作标记：青霉素、先锋霉素Ⅴ、庆大霉素。镊子火焰消毒，夹取相应的药物纸片，平贴在已设定的位置上，按压，镊子火焰消毒。37℃18～24小时培养，观察结果。庆15mm青先①设三点,呈等边三角距离。②点距离平板边缘约15mm。③作标记：青、先、庆④镊子尖嘴朝下，夹取相应药物纸片的边缘，平贴在已设定的位置上，轻轻按压纸片。精选课件凝固酶试验CoagulaseTest致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变为不溶性纤维蛋白,附着于菌体表面,形成凝块。取二滴兔血浆(rabbitplasma)置于洁净的玻片上。分别用接种环取白色和金黄色菌苔(约2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合成直径8～10mm的一层薄菌膜

，立即观察结果。菌液出现明显凝块者为阳性，否则为阴性。※白色菌苔容易涂抹均匀，金黄色菌苔凝固涂抹不开。※来回侧倾载玻片，让菌液流动起来，结果更明显。研磨成直径8～10mm的一层薄菌膜。精选课件半固体穿刺接种法

StabSemisolidMethod具有鞭毛能够真正运动的细菌，在半固体培基中,能冲破低浓度琼脂的阻力，自接种部位向周围移动扩散生长，使培养基呈根须状或云雾状混浊状态。无鞭毛不能运动的细菌，只能沿着穿刺线生长繁殖，穿刺线边缘清晰，周围培养基清澈透明。电镜半固体精选课件37℃18～24小时①接种针斜面取菌，从半固体中心,垂直刺入，到达培养基底部5分之4处，再循原来的路线,退出接种针。半固体穿刺接种法：甲→紫黑,乙→紫黑；丙→粉红,丁→粉红。标记:组号,颜色。②管口、接种针经火焰烧灼灭菌。精选课件生物安全警告本次实验（糖发酵试验、药敏试验、血浆凝固酶试验和半固体接种）操作，可能产生几百个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。精选课件细菌的糖发酵试验P16

甲→紫黑→①葡萄糖乙→紫黑→②乳糖丙→粉红→③葡萄糖丁→粉红→④乳糖细菌的药敏试验P20

甲→金黄菌液→平板+青、链、庆纸片乙→白色菌液→平板+青、链、庆纸片丙→紫黑菌液→平板+青、链、庆纸片丁→粉红菌液→平板+青、链、庆纸片血浆凝固酶试验P17

兔血浆15ul+金黄色,白色半固体接种法P11

甲→紫黑，乙→紫黑，丙→粉红，丁→粉红。精选课件思考题细菌生化反应在感染性疾病诊断中有何重要意义?为什么要在发酵管液面上方大约2～3cm处切割？培养时，微量糖发酵管管口不能朝上，为什么？抗菌素敏感性实验有何实际意义?血浆凝固酶试验观察完毕，应将载玻片立即放入消毒缸内，为什么?半固体穿刺接种时，为什么要强调“原路返回”?为保证实验结果的可靠性，你认为上述试验应还设立哪些对照?精选课件糖发酵管管底一侧稍微垫高！微量发酵管管口朝下，37℃培养18～24小时。精选课件①试管用毛刷，上下、旋转刷洗内壁和管底。②字迹用湿纱布，粘去污粉擦拭。③管口朝向相同，流水冲洗10次。④洗干净