DB32T 3628-2019木霉固态菌种生产技术规程

江苏省市场监督管理局发布ICS65.080B13江苏省地DB32方标准DBT3628—2019TechnicalregulationforproductionofsolidTrichodermasppspawn前言GBT1.1—2009给出的规则起草。单位：南京农业大学。4生产场地要求木霉固态菌种生产技术规程存运输要求等技术环节。范性引用文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT包装储运图示标志GB环境空气质量标准GB8地表水环境质量标准GB87农用微生物菌剂NY/T883农用微生物菌剂生产技术规程定义。microbialinoculant含。4.1生产基地选择温保湿性能良好，同时具备通风性能。4.2生产环境GB中II类标准要求。V4.3生产车间4.3.1原料库4.3.2接种室4.3.3培养室4.3.4检验室生产流程5.1技术环节技术环节。具体工艺流程见附录A。5.2菌种要求5.2.1原种的母种，对原种有如下要求：——原种应有菌种鉴定报告。企业编号、来源信息等。2.2菌种保管5.5接种.2.3菌种质量控制况，该菌种不能作为生产用菌种，应该按照标准NY/T883执行。5.3液体发酵增殖体发酵增殖，按照NY/T883执行。具体的培养基见附录B。污染，可以作为菌种继续使用；如果菌丝细小并呈不规则分布或者有杂菌污染，应按标准NY/T883处5.4固体培养基制备.4.1培养基要求发酵培养基要求接种后木霉菌丝体生长旺盛，在保证有一定的生物量(菌丝体)的前提下兼顾分生，宜采用农作物秸秆及农用氨基酸作为主要原料。.4.2制备过程5.4.2.1秸秆前处理成0.3cm~0.4cm长的片段。5.4.2.2氨基酸添加往上述秸秆中添加氨基酸稀释液，氨基酸稀释液的添加量为每100g晒干后的秸秆加入100~200mL的氨基酸稀释液(氨基酸原液总氨基酸含量≥10%)，调节起始pH为3.0~4.0，物料的含水率应该严格控制在50%~60%之间，陈化4h~6h后备用。5.4.3灭菌5.4.3.1高压蒸汽灭菌要求固体发酵培养基物料灭菌温度为121℃~130℃，灭菌时间为1.0h~2.0h；或者采用100℃灭菌2h~5.4.3.2灭菌效果检测将1g固体发酵产物加入到9mL无菌水中，充分混匀后制成悬液，吸取1mL悬液加入到装有已灭菌的9mL营养肉汤的试管中，并做至少三个生物学重复，将试管置于37℃恒温培养箱中避光培养，24h。培养室。将发酵好的木霉菌丝体按5%的接种量(v/w，鲜重)接种到固体发酵培养基料中并充分拌匀，.6发酵控制.6.1培养温度固体发酵的温度应该严格控制在(28±2)℃，根据不同木霉发酵特性和生长代谢特征，适当调整.6.2物料含水率应该控制在20%~40%之间。.6.3空气湿度固体发酵过程中，空气湿度宜严格控制在70%~75%之间。5.7发酵终点判断.7.1物理性状观法评价固体发酵物料的颜色、形态和气味。.7.2孢子定量5.7.2.1稀释涂布稀释法进行样品稀释，吸取最后的稀释液0.1mL于木霉选择性培养基上(见附录B)，并用涂布棒将菌5.7.2.2培养在28℃恒温培养箱中避光培养2d~3d，注意观察菌落的生长情况。5.7.2.3计数检测有效活菌数检测.2的方法检测发酵产物中的有效活菌数。杂菌率检测杂菌率的检测按照GB20287执行，木霉固体发酵产物的杂菌数应≤1.0×104个/克。其他项目检测固体发酵物的细度、有害元素含量(Hg、Pb、Cd、Cr、As)、pH(5.5~7.5)、大肠杆菌数、蛔档案包装及贮存运输要求.1包装.2贮存、农药等一同贮存。8.3运输过程中应注意防潮、防晒、防破裂。退化原种纯化污染按规定处理检测不合格检测不合格按规定处理退化原种纯化污染按规定处理检测不合格检测不合格按规定处理(规范性附录)菌种生产技术规程示意图发酵原种原种复壮菌种纯度检测及其功能分析发酵过程的优化与控制液体菌种检测合格固体发酵过程中发酵参数的优化与控制主含水率、发酵时间等固体菌种包装质量检验检测合格(规范性附录)其配方g琼脂25g，水1000mL，pH调整为5.0。mLpH为5.0。H干后用粉碎机将其粉碎成0.3cm~0.4cm长的片段；往上述秸秆中添加氨基酸稀释液，氨基酸稀释液的添加量为每100g晒干后的秸秆加入100mL~200mL的氨基酸稀释液(相当于100g晒干后的秸秆中加入10mL~20mL的氨基酸水解液原液，氨基酸原液中总氨基酸的含量≥10%)，调节起始pH为3.0~4.0，初始含水率严格控制在50%~60%