南方医科大学微生物试验报告模板

本文格式为Word版，下载可任意编辑——南方医科大学微生物试验报告模板

2023年南方医科大学医学微生物学试验报告

日期2023年5月22号

题目试验者年级专业指导老师脓汁和粪便标本中病原菌的检测成绩：马浩楠3140020007参与者名字：马浩楠丁超王尧鑫桂文茁2023级医学影像专业罗军

一、试验目的

1、把握培养基制备的原则和一般方法。2、把握病原菌的分开与培养方法。

3、把握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。

4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。5、把握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。

6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，把握纸片扩散法。7、把握玻片凝集试验的原理、方法、结果观测与判断。

二、试验器材

1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml刻度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯

2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝平板2个，接种环，酒精灯

3、斜面4支、细菌分开培养物（上次试验平板）

4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，染色瓶，染色架

5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把

6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。

三、方法与步骤

1、培养基的制备：培养基称量干粉培养基(g)11.4水量(ml)煮沸(次）分装(ml)备注3瓶，500ml瓶，平板14支×3，中试管，斜面20支×2，小试管，肉汤14支×3，小试管，高层营养琼脂300营养琼脂2.77035营养肉汤1.36013半固体琼脂

1.76034（1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，参与300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。

（2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，参与75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。

（3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，参与50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。

（4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，参与60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。

2、细菌的分开培养平板划线分开法

甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色）乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色）丙一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）丁一粪便标本一伊红美蓝平板(紫色）步骤：①接种环烧灼灭菌。②取标本3～6ul。③平板采光，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。④接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条。⑤烧掉接种环上多余的标本。⑥转动平板，通过第一区5～7次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划其次区。⑦转动平板，接种环通过其次区1次，划第三区。⑧转动平板，接种环通过第三区1次，划第四区。⑨划第五区。3、细菌的纯培养斜面接种分工

甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面丁→EMB平板→粉红菌落→1支斜面方法：接种环→套住菌落→轻刮取菌→接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉→条细菌接种线→再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线→细菌涂布接种在斜面培养基的表面→斜面正面上2/3作标记：组号、颜色→收集平板-灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置）→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。4、细菌的形态学检查涂片→枯燥→固定→染色(1)涂片→枯燥→固定

甲→黄色，紫黑。乙→白色，粉红。丙→黄色，紫黑。丁→白色，粉红。

方法：涂片：①接种环取盐水3ulX2滴，水滴间距小于2cm;②取菌苔少许（1mm小菌落半个）与盐水混勻，涂成大于lcm2;③涂毕→环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破碎，接种环烧灼灭菌。→枯燥→固定：手持载玻片→端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2?3秒钟。(2)革兰染色

涂片→枯燥→固定→结晶紫→初染1分钟→水洗→卢戈碘液→媒染1分钟→水洗→95%乙醇→脱色约20秒钟—7尺洗—稀释品红—复染1分钟—水洗—吸干，

镜检。

油镜使用方法：10X物镜—看清标本—滴加香柏油—100X油镜—浸泡油中→模糊物象→细调理调焦，观测物像→记录结果→关闭电源→擦镜纸拭去香柏油—擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3)混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。5、液体培养基接种（肉汤接种）甲→金黄色，乙→白色，丙→紫黑，丁→粉红。

方法：（1)接种环斜面取菌，在靠近液面的管壁上，上下研磨接种；（2)在管壁上，将接种环内的菌膜拍破。退出接种环，烧灼灭菌；（3)标记：组号，颜色6、细菌的生化试验等

（1）细菌的糖发酵试验：

①在紫黑色的斜面培养基取适量菌落接种在含有葡萄糖的发酵管中，并做好标记

②在紫黑色的斜面培养基取适量菌落接种在含有乳糖的发酵管中，并做好标记

③在粉红色的斜面培养基取适量菌落接种在含有葡萄糖的发酵管中，并做好标记

④在粉红色的斜面培养基取适量菌落接种在含有乳糖的发酵管中，并做好标记

步骤：①用砂轮在糖发酵管液面上方2～3cm处，切割一道切痕。②两手握住发酵管将管子折断。管口烧灼灭菌。③接种针斜面取菌，伸入培养基内，在管壁上，上下研磨接种。退出接种针，烧灼灭菌。④管口朝向一致，放置在平皿内。（2）抗菌素敏感性试验纸片扩散法

甲→黄色菌液乙→白色菌液丙→紫黑菌液丁→粉红菌液

方法：①先取→环菌液；②沿平板直径拉一条细菌接种线；③再取一环菌液；④旋转平板90度角，拉另一条接种线，使两条细菌接种线呈“十字形〞；⑤然后在平板上半部，作连续来回密集划线，每次划二分之一平板；⑥旋转平板90度角，二次密集划线；⑦旋转平板90度角，三次密集划线；⑧旋转平板90度角，四次密集划线；⑨设三点，呈等边三角距离；⑩点距离平板边缘约15mm;?作标记：青、先、庆；?镊子尖嘴朝下，夹取相应药物纸片的边缘，平贴在已设定的位置上，轻轻按压纸片。

（3）血浆凝固酶试验

步骤：①取二滴兔血浆置于清白的玻片上。②分别用接种环取白色和金黄色菌苔(约2～3个菌落的菌量)与血浆研磨混合成直径8～10mm的一层薄菌膜。③马上观测结果。

（4）半固体穿刺接种法

①用接种针取紫黑色菌落垂直刺入半固体培养基，再按原路返回，并做好标记②用接种针取粉红色菌落垂直刺入半固体培养基，再按原路返回，并做好标记

步骤：①接种针斜面取菌，从半固体中心,垂直刺入，到达培养基底部5分之4处，再循原来的路线,退出接种针。②管口、接种针经火焰烧灼灭菌③37℃下培养18~24小时。

7、细菌的血清学试验、结果分析玻片凝集试验

①取清白的载玻片一张，将磨面近端设为对照区，滴加生理盐水15ul。远端设为试验区，滴加福氏志贺菌