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文档简介
实验一
斐林试剂置换法测定还原糖的含量一、实验原理糖类包括多糖、双糖和单糖,其中单糖和某些双糖具有游离的羰基,称为还原糖,多糖和蔗糖无还原性。利用糖的还原性,与斐林试剂(氧化剂)中的二价铜离子还原为一价铜,进行氧化还原反应,而进行测定.非还原糖必须转化为还原糖,再进行测定。斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂,反应的终点可用次甲基蓝作指示剂,在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量,计算出样品还原糖量。4、碱式滴定管5、样品溶液:待测G液样品1:稀释20倍,1000ml/班样品2:稀释50倍,1000ml/班6、电炉
三、操作方法1、斐林试剂标定A取甲液5ml+乙液5ml,(注意:甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液,使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶)置于250ml三角瓶中,加入10ml水,并从滴定管中加入0.2%的标准G若干毫升(约23ml)。(量控制在后滴定时消耗G在0.5-1.0ml)
B电炉上加热至沸,并保持微沸2分钟,加2滴1%次甲基蓝溶液,趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2%标准G滴定至蓝色消失,有红棕色沉淀,溶液清亮为终点止。记录耗用的G量为V0,必须在1min内完成。注意:还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化,恢复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态,并且避免滴定时间过长。3、样品中还原糖测定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释),补加(V0—V1)ml水,并从滴定管中预先加入(V1-1)ml0.2%G,摇匀至电炉上加热至沸,保持2min微沸,加入2滴1%次甲基蓝,继续用G滴定至蓝色消失。记录消耗的标准G体积为V毫升。四、结果计算还原糖含量(以G计)(g/ml)
=(Vo-V)*0.002*1/10*n
式中Vo--------斐林试剂标定值,mlV---------样品糖液测定值,ml0.002-----标准GS液浓度,g/ml10--------样品糖液体积,mln---------样品稀释倍数五、注意事项本方法测定的是一类具有还原性质的糖,包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等,只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示,所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖,如乳制品中的乳糖,则可以认为还原糖=某糖。
五、分析讨论六、思考题:
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