戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用

戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用第1页/共31页戊肝诊断试剂在医院及疾控的应用第2页/共31页3一、戊型肝炎相关概念及特点戊型肝炎由戊型肝炎病毒（HEV）引起，HEV是单股正链RNA病毒,属于嗜肝病毒科.约占临床散发型肝炎的15－20%，戊肝在病毒性肝炎中病死率最高，孕妇病死率可高达20%。传播途径:主要经胃肠道传播，常通过水源和食源暴发或流行,丙球蛋白免疫无效临床症状:厌食、乏力、恶心、巩膜黄染、右上腹部不适、呕吐、肝脏肿大等.其临床症状与甲肝类似。第3页/共31页4戊肝不同临床阶段的HEV感染指标临床阶段ALTRNAIgMIgG戊肝急性期++++近期隐性感染-+++戊肝恢复期--++既往感染---+第4页/共31页5HEV-IgM是良好的近期感染标志物戊肝病程中各感染指标的变化过程清楚显示，HEV-IgM抗体是一个良好的戊肝病毒近期感染指标。第5页/共31页6二.优良的诊断试剂是检测结果准确可靠的保证

优质的抗原是检测试剂的关键！第6页/共31页7关键:构象抗原现有试剂以线性表位为主的重组蛋白或合成肽作为抗原，未能模拟出HEV最主要的构象依赖性抗原表位。优质的抗原是检测试剂的关键!!!第7页/共31页82.1HEV基因ORF1主要编码与病毒RNA复制有关的非结构蛋白，ORF2为HEV的主要结构基因编码区,编码病毒衣壳蛋白，ORF3基因编码产物pORF3为磷蛋白。第8页/共31页9

试剂的关键E2抗原的发现及其特征1998年，用大肠杆菌表达HEV结构蛋白ORF2的一个片段(E2)时发现，该蛋白可以自发形成二聚体，并且二聚体蛋白对戊肝恢复期血清有极强的反应性，这一反应性随着二聚体的解聚而消失。WesternBlot(See:JMedVirol,2001,64:125-132)单体二聚体SDS第9页/共31页10E2抗原反应性：对戊肝急性期血清和多年后的恢复期血清有明显的反应，恢复期血清的反应性集中在二聚体上。急性期血清(10例)恢复期血清(8例)二聚体E2单体E2第10页/共31页112.2具有动物模型的诊断试剂(恒河猴HEV感染模型)

感染时间（周）F9HEV感染、发病与抗体发生过程第11页/共31页12感染时间（周）N2HEV感染、发病与抗体发生过程第12页/共31页13感染时间（周）F4HEV感染、发病与抗体发生过程第13页/共31页14献血员中HEV检测：E2-IgM(+)、E2-IgG(-)、GL-IgM和IgG均(-)的献血员206血清HEVRNA基因分型I型IV型IV型II型III型第14页/共31页15206血清可感染猴子第15页/共31页165278构象性表位线性表位猴HEV感染过程中各项指标消长分析第16页/共31页17三.HEVELISA试剂

与

临床急性肝炎诊断第17页/共31页183.1人们对戊型肝炎的重视逐渐增强

新的《中华人民共和国食品安全法实施条例》实施条例对食品安全法中较为原则的制度作了具体规定：食品从业者应按章检查戊型病毒型肝炎和甲型病毒性肝炎，同时取消乙肝的检测。员工入职新生入校等健康体检也取消了乙肝的检测项目。第18页/共31页19食品从业人员的健康体检新试行条例规定食品从业人员的健康体检取消了HBV的检测项目，新增了HAV-M和HEV-M两种检测项目。IgM抗体的检测目的主要是避免近期感染对食品安全的威胁。（包括显性感染和隐性感染）颁布了《戊型病毒性肝炎诊疗规范》，用以明确HEV的诊断及治疗。人们对戊型肝炎的重视逐渐增强。第19页/共31页203.2万泰HEV试剂与其他国内外厂家的试剂比较第20页/共31页213.2.1灵敏度和特异度综合评价

复旦大学公共卫生学院指标正常人群急性戊肝约登指数(%)阴性数/检测数特异度（%）阳性数/检测数灵敏度（%）WTIgM273/273100.047/4897.997.9GLIgM264/27396.735/4872.969.6GLIgG233/27385.445/4893.879.6第21页/共31页22E2IgM+-TotalGL-IgM+29029-286290Total5762119

临床非甲非乙急性肝炎中HEVIgM检出

E2IgM检出率=100%GLIgM检出率=50.8%(香港卫生署公共卫生实验中心)第22页/共31页23E2IgM与GLIgM在急性肝炎中检出符合情况GLIgME2IgM合计＋－＋7065135－29361390合计99426525

其中58例(89%)抗HAVIgM阳性(复旦大学公共卫生学院)第23页/共31页24临床阴转血清的评价

－新疆戊肝感染10年后血清抗HEV抗体检出1992年全国流调新疆和田HE暴发后3~4年HEVIgG感染率为11.79%(Genelabs)地方病通报

2002，17（3）：14第24页/共31页25两种试剂对WHO戊肝标准血清的检测比较第25页/共31页263.2.2实验室数据PCR+标本总数万泰检出SKH22份22份20份（1份阴性灰区）阳性S/C.O均8.456.89第26页/共31页27表1：两种试剂对PCR阳性的检验

万泰SKH荧光PCR套式PCR编号C.O=0.265C.O=0.253

112.7641.487

+

+142.8291.165

+

+162.9711.026

+

+172.3431.797

+

+172.3431.797

+

+271.5921.218

+

+292.0260.471

+

+333.1541.68

+

+372.8541.423

+

+403.0811.819

+

+422.8371.935

+

+522.1640.103

+

+552.9941.461

+

+592.8511.239

+

+612.9691.752

+

+632.4581.082

+

+680.8630.089

+

+722.8531.601

+

+733.221.726

+

+741.7911.098

+

+741.7911.098

+

+773.2971.816

+

+第27页/共31页283.2.3实验室数据PCR+标本总数万泰检出BGD检出16份15份（1份阴性灰）5份（3份阴性灰区）检出百分率93.8%

31.3%

第28页/共31页29标本编号万泰A值（C.O=0.266）BGDA值（C.O=0.150）PCR背景+/P31.0420.021+WX11.0950.131+WX111.9620.441+WX121.5030.387+WX131.6420.108+WX141.9390.523+WX150.1270.011+WX170.8910.026+WX180.4090.489+WX190.7480.126+WX221.0930.020+WX240.9910.076+WX301.1890.016+WX322.9870.045+WX620.8040.027+WX640.4570.192+M261.0041.084/M280.1520.009/M292.0040.439/M302.0450.897/M311.7910.347/M410.0150.012/P11.7120.311/表2：两种试剂对PCR阳性的检验第29页/共31页30HEV的诊断指标

(依据戊型病毒性肝炎诊疗规范）HEV-M