疟疾的病原学诊断技术

授课内容1.厚、薄血膜血片制作方法。2.疟原虫的生活史及其各发育阶段的基本特点。3.间日疟、恶性疟各期疟原虫的形态与镜检技术现在是1页\一共有82页\编辑于星期三血膜的制作用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血膜分载玻片涂制。发热病人血片标本片现在是2页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜的制作薄血膜

：取一小滴血（约1～1.5微升的血量），将血滴置于载玻片中部，将推玻片的边缘紧贴载玻片血滴前，使血液沿推玻片边缘散开约2cm宽时，使推玻片与平置的载玻片形成25～350夹角，平稳、均匀由右向左推片，形成舌型、头体尾分明的薄血膜（约宽长）。影响因素：速度快慢、血滴大小、推片与载玻片夹角大小等影响血膜的厚薄、大小。要求：制成的薄血膜外观：厚薄均匀，无划痕，无起伏，边缘整齐光滑舌状血膜；在镜下看RBC平铺互相接触而不重叠。薄血膜位置：薄血膜位于载玻片左1/2处。现在是3页\一共有82页\编辑于星期三厚血片制作厚血膜

：

用推玻片的一角，从取血部位刮取约4微升左右血量，使血滴与平置的载玻片接触，接着用推玻片角由里向外一个方向旋转2~4圈，涂成直径0.8~1cm大小、圆形厚血膜。厚血膜要求：外观：圆形厚薄均匀，无划痕。镜下观察其厚度，以每油镜视野5-10个WBC为宜。过厚易于脱落，过薄达不到检出率要求。厚血膜位置：位于玻片右半部分左1/2处现在是4页\一共有82页\编辑于星期三血膜编号血膜制成后，立即在玻片面上写上受检者的个人编号，以防差错；待薄血膜干后玻片头可粘贴患者信息，亦可用铅笔在薄血膜头写上血片种类的代号，依次顺序插入标本盒内。现在是5页\一共有82页\编辑于星期三制片时机掌握（取血时间）采血时间：

现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。疟疾典型的临床表现：分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出汗期和间歇期五期。现在是6页\一共有82页\编辑于星期三

采血时间：

P.v——发作后10小时内采血，各期（R、T、S、G）疟原虫均可查见。

P.f——发作时采血可查到R；发作后10天左右采血可查见G。现在是7页\一共有82页\编辑于星期三间日疟（取血时间）在前驱期（相当于肝内期疟原虫发育）因原虫密度太低，镜检多为阴性。发热期：外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂殖体；发冷寒战期（相当于红内期，成熟裂殖体涨破红细胞期），镜检多为裂殖体和环状体。出汗期：因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小时，间歇期：外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认，为诊断的有利时机。发作36-48h，可检出裂殖体。发作1-2次后，配子体出现较多。现在是8页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟（取血时间）恶性疟：较理想的取血时间是在发作后至20h内。初发患者退热后常查不到原虫。末梢血中检出恶性疟配子体，是在末梢血出现环状体之后的10天左右。现在是9页\一共有82页\编辑于星期三制作血膜的注意事项

1.玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。现在是10页\一共有82页\编辑于星期三制作血膜的注意事项

2.

刚涂制的血膜要平放在标本盒内，厚血膜未干前勿使标本盒倾斜，以免血膜倾向一侧，造成血膜厚薄不均，厚处不一溶血和着色而影响检查结果；晾干血膜时应注意防尘、防止苍蝇、蟑螂等昆虫吮吸血膜，干后应及时装入标本盒并盖严，新的木制标本盒需敞开放置一段时间，让木醇挥发后才能使用，以免厚血膜红蛋白被其固定，不能溶血或染色效果不佳。现在是11页\一共有82页\编辑于星期三制作血膜的注意事项

3.

血膜让其自然干燥，切忌用太阳晒或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天标本尽可能24~48小时内固定染色；冬天也不能超过72小时。放置时间越久，厚血膜越不易脱血，染色效果也差。若不能及时染色，膜血膜宜先用甲醇固定（1~3分钟）然后用过滤清水对厚血膜溶血，晾干固定后装入盒内盖严，待以后染色。现在是12页\一共有82页\编辑于星期三厚薄血膜的优缺点及适用范围薄血膜：用血量少1-1.5ul，疟原虫的形态完整，便于疟原虫虫种的鉴定。为保证检测的敏感性，常耗时较多，不适用于大规模调查，常出现漏诊。厚血膜：用血量较多4-5ul，疟原虫胞浆和核有一定程度的固缩，较难识别；但须查范围小，节省时间，阳性检出率较高。

现在是13页\一共有82页\编辑于星期三血片的镜检原则1.镜检疟原虫，必须对正常厚薄血膜中各种血细胞的形态、结构和染色性质能够识别。2.镜检疟原虫，首先要会看薄血膜，在基本上掌握薄血膜中疟原虫形态后，才镜检厚血膜。3.镜检疟原虫一般只查厚血膜，薄血膜仅作为原虫分类时参考和血片编号之用。4.镜检疟原虫必须用油镜头配合5X低倍目镜镜检，当发现疑难问题时可调换10X目镜进行观察。5.检查时应从厚血膜的上缘开始，使血膜从上而下，自左至右，由右至左，一行接一行，一个视野稍叠一个视野顺序地查完整个血膜。现在是14页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜中常见的血液细胞中性粒细胞嗜酸性粒细胞单核细胞淋巴细胞红细胞血小板现在是15页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫的生活史及其各发育阶段的基本特点现在是16页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫生活史人疟原虫完成其生活史需要人和按蚊两个宿主。1.在按蚊体内进行有性繁殖，按蚊是疟原虫的终末宿主。2.在人体内进行无性增殖，人是疟原虫的中间宿主。现在是17页\一共有82页\编辑于星期三传播媒介中华按蚊现在是18页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫生活史

含成熟疟原虫子孢子按蚊叮咬人子孢子随唾液进入人体血液约30分钟侵入肝细胞裂体增殖成熟裂殖体（含数以万计裂殖子）肝细胞破裂裂殖子侵入红细胞（开始红细胞内期发育）发育小滋养体（环状体）摄食营养、发育大滋养体核分裂、发育未成熟裂殖体核进一步分裂裂殖体（成熟）被寄生红细胞破裂裂殖子释放入血流一部分被巨噬细胞吞噬。一部分再侵入红细胞，开始新的一轮发育。一部分裂殖子在红细胞内不再进行裂体增殖，而发育成雌、雄配子体。在蚊体内进行有性生殖。

现在是19页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫生活史示意图现在是20页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫生活史示意图

（红内各期原虫形态）现在是21页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫生活史示意现在是22页\一共有82页\编辑于星期三由生活史看出疟原虫对人体的主要致病阶段：是红细胞内期的裂体增殖期；主要是指红细胞内期的无性体——小滋养体到成熟裂殖体，而不是红细胞内期的无性体——配子体；具有流行病学意义的疟疾传染源：是外周血内有配子体的现症病人和带虫者。可见早期诊断治疗的重要性。复发由肝内期迟发型子孢子引起。

现在是23页\一共有82页\编辑于星期三人类疟原虫的

基本特征现在是24页\一共有82页\编辑于星期三人体疟原虫的基本结构人体疟原虫的基本构造：胞核、胞质和包膜现在是25页\一共有82页\编辑于星期三疟原虫的结构与镜检

疟原虫形态检查三要素：胞核、胞质和疟色素1、胞核：即细胞核或染色质粒。在正常情况下核呈鲜红色，呈圆形或不规则的颗粒状。核的结构致密，只有在个别发育阶段较为疏松。

2、胞质；被染成蔚蓝色或深蓝色，随着虫体发育长大，细胞浆逐渐增多。

3、疟色素；颜色和颗粒的形状，因疟原虫种类而异。现在是26页\一共有82页\编辑于星期三感染人的疟原虫有四种:

恶性疟原虫P.falciparum

间日疟原虫P.vivax三日疟原虫P.malariae

卵形疟原虫P.ovale

现在是27页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟P.falciparum

●

分布热带、亚热带，是非洲的重要疾病●

我国流行区域为云南省和海南省●四种疟原虫中致病力最强，无免疫力者感染后出现急性症状,不及时治疗可危及生命现在是28页\一共有82页\编辑于星期三间日疟P.vivax

●间日疟原虫分布于我国大部分地区，主要是中部地区。●病程良性,有复发。●遍布全球温带地区及大片热带地区。在热带非洲，特别是西非则很少见。现在是29页\一共有82页\编辑于星期三三日疟P.malariae

遍及热带和亚热带地区，特别是东、西非洲，圭亚那及印度部分地区，呈片状、块状分布三日疟在我国非常少见，只在南方广西有过散在报告无复发卵形疟

P.ovale又称蛋形疟原虫,主要分布非洲。太平洋地区、缅甸、东南亚有散在报告在我国已基本消灭症状与间日疟相似,有复发现在是30页\一共有82页\编辑于星期三红细胞通常涨大薛氏点明显成熟环状体粗大滋养体胞浆有阿米巴样伪足血片中可见各期的原虫形态成熟裂殖体约含12-24个裂殖子

间日疟（P.vivax）鉴定要点现在是31页\一共有82页\编辑于星期三红细胞不涨大环状体钎细,一个红细胞内可有几个环状体,环状体内可有2个核

环状体可贴在红细胞边缘

血片中没有其他发育期滋养体配子体呈新月形或腊肠形成熟裂殖体约含6-32个裂殖子可出现茂氏点恶性疟（P.falciparum）鉴定要点现在是32页\一共有82页\编辑于星期三红细胞不涨大或略小环状体可呈方形胞浆不活跃呈带状形成熟滋养体呈菊花状,内含6-12个裂殖子

核可能出现在环状体边缘

三日疟（P.malariae）诊断要点现在是33页\一共有82页\编辑于星期三卵形疟（P.ovale）诊断要点红细胞涨大

常见慧星状(也称齿轮状)环粗大薛氏点明显

成熟滋养体类似三日疟原虫但更粗大成熟裂殖体约含4-12个裂殖子

现在是34页\一共有82页\编辑于星期三种周围血中发育阶段红细胞形态疟原虫形态大小点彩胞浆疟色素裂殖子数恶性疟原虫环状体配子体正常常见茂氏点环状体钎细，常见２个核粗黑，配子体中明显6-32

平均=10-24间日疟原虫各期滋养体裂殖体和配子体涨大,可达正常的1.5-2倍薛氏点可出现阿米巴样滋养体，浅蓝色，活泼金棕色不明显12-24平均=16卵形疟原虫各期滋养体裂殖体涨大,可达正常的

1.25-1.5倍薛氏点可出现卵圆形滋养体，蓝色较深，核较大深棕色明显4-12平均=8三日疟原虫各期滋养体裂殖体和配子体正常西门氏点少见圆形，蓝色深，核紧缩，滋养体带状深棕色，粗明显6-12

平均=8

呈菊花状现在是35页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜中P.v的形态环状体(P.v.R)

约占寄生红细胞的1/3，很少见到一个红细胞寄生2个环状体和一个环状体有2个核。现在是36页\一共有82页\编辑于星期三大滋养体(P.v.T)经8～10小时，虫体增大，胞质增多，伸出伪足。出现黄褐色的疟色素。红细胞胀大，变形，颜色变淡，并出现数量较多，淡红色的小点，称薛氏小点现在是37页\一共有82页\编辑于星期三成熟裂殖体（P.v.S）红细胞：胀大，褪色，可见薛氏小点。大小：个体较大。胞浆和核：裂殖子12~24个平均16个，排列不规则，核红色，胞浆浅兰色。色素：黄褐色常集于疟原虫的一边。现在是38页\一共有82页\编辑于星期三间日疟原虫雄配子体(P.v.G)

间日疟原虫雌配子体(P.v.G)虫体较小，占满胀大的红细胞胞质浅蓝核大疏松，淡红色，多位于虫体的中央。疟色素分散虫体较大，占满胀大的红细胞胞质致密，色深蓝核小致密，深红色，多位于虫体一侧疟色素分散

现在是39页\一共有82页\编辑于星期三间日疟大滋养体(T)与配子体(G)的区别

TG虫体：较小较大胞浆：边缘不规则可见空泡边缘规则无空泡

核：

较小、不规则较大有不染色带色素：

较少、分布不匀，色素分布均匀TG现在是40页\一共有82页\编辑于星期三P.V与P.f鉴别报告1、当血膜中发现环状体时，且数量较多，环纤细，此时应注意观察全血膜有无间日疟的其他期原虫，如无可判定为恶性疟。

2、当血膜中发现间日疟原虫时，此时应注意观察全血膜有无恶性疟的配子体，如无可判为间日疟，如有可判为此两型疟原虫混合感染。

3、当全血膜中出现少数环状体时，且形态不典型，则最好间隔数小时后再取血检查，如此时无间日疟则可判为定恶性疟。现在是41页\一共有82页\编辑于星期三镜检（1）一般只查厚片，薄片仅作为疟原虫分类参考和编号用。（2）可先以油镜头配合5X低倍目镜镜检，有疑问时可调换10X目镜进行观察。（3）检查时应从厚血膜的上缘开始，按下图示意的顺序方向，视野稍叠视野地查完整个血膜。现在是42页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜疟原虫形态间日疟环状体感染的红细胞：胀大不明显，基本正常。虫体大小：较大，约为红细胞直径1/3。胞浆：环状，浅蓝色。核：红色，一个，偶有二个。疟色素：无。现在是43页\一共有82页\编辑于星期三间日疟间日疟环状体（薄血膜）间日疟滋养体（薄血膜）现在是44页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜间日疟大滋养体形态感染的红细胞：胀大褪色，出现形状大小相等、分布均匀、数目较多、鲜红色的薛氏小点。虫体大小：较大。胞浆：不规则，浅蓝色，出现阿米巴伪足，有空泡。核：红色，一个。疟色素：有，细小杆状，黄褐色，分布不均匀。现在是45页\一共有82页\编辑于星期三间日疟大滋养体

虫体不规则，较大；阿米巴样空泡明显；疟色素细小，黄褐色。现在是46页\一共有82页\编辑于星期三红细胞：胀大，褪色，可有薛氏小点。胞浆：较不规则，空泡小或消失，浅蓝色。核：红色，分裂为二个以上。色素：黄褐色，分布不均匀。间日疟未成熟裂殖体现在是47页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜疟原虫形态间日疟未成熟裂殖体

现在是48页\一共有82页\编辑于星期三间日疟成熟裂殖体红细胞：胀大，褪色，可见薛氏小点。大小：个体较大。胞浆：裂殖子12~24个，通常为16~18个，排列不规则，胞浆浅蓝色。核；核红色。疟色素：黄褐色，常集于疟原虫的一边。现在是49页\一共有82页\编辑于星期三间日疟雄（小）配子体形态形状大小：圆形，虫体较大。胞浆：浅蓝色。核：一个，较大，疏松，位于中央，浅红色，周围有明显不着色带。疟色素：黄褐色，散在分布。现在是50页\一共有82页\编辑于星期三

间日疟雌（大）配子体形态形状大小：圆形或椭圆形，较大。胞浆：深蓝色。核：一个，较小，深红色，常偏于一边，核周可见明显不染色带。疟色素：黄褐色，均匀散在，数目较多。现在是51页\一共有82页\编辑于星期三间日疟原虫雌配子体

现在是52页\一共有82页\编辑于星期三间日疟原虫雄配子体现在是53页\一共有82页\编辑于星期三间日疟原虫恶性疟原虫厚血膜集中视野现在是54页\一共有82页\编辑于星期三各

期

疟原虫

形态比较现在是55页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜中恶性疟各期疟原虫的形态结构特点现在是56页\一共有82页\编辑于星期三薄血膜疟原虫形态

恶性疟环状体感染的红细胞：大小正常,颜色较深。虫体大小：较小，约为红细胞直径1/5-1/6。胞浆：蓝色，环状纤细,有时位于红细胞的边缘。常见多个原虫同寄生于一红细胞的现象。核：红色一个,常有二个。疟色素：无。现在是57页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟原虫--环状体环纤细,约为RBC直径的1/6，RBC不胀大核1个，但2个常见，红细胞常含2个以上原虫现在是58页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟大滋养体受感染红细胞：大小正常，颜色较深，可出现较粗、大小不一、分布不匀、数目较少红色茂氏小点。虫体大小：较小。胞浆：蓝色，圆形，坚实，体积小。核：一个，红色。疟色素：较细的黑褐色颗粒，常集成块。

现在是59页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟大滋养体现在是60页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟未成熟裂殖体红细胞：大小正常，颜色较深，可有茂氏小点。大小：较小。胞浆：规则，圆形或卵圆形，蓝色。核：分裂为二个以上，红色。疟色素：黄褐色颗粒，常集成黑褐色团块。现在是61页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟成熟裂殖体红细胞：大小正常，颜色较深，可见茂氏小点。大小：虫体较小。胞浆和核：裂殖子8~32个，通常为8~18个，排列不规则，核红色，胞浆蓝色。色素：黑褐色，集中于中央或一侧。现在是62页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟成熟裂殖体

裂殖子8～32个，通常8～18个，排列不规则疟色素集中成团块状虫体占红细胞体积的2/3至3/4现在是63页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟雌（大）配子体形态形状：新月形，两端稍尖。胞浆：深蓝色。核：一个，较小，致密，深红色，位于中央，核周可见透明不染色带。疟色素：黑褐色，密布于核的周围。现在是64页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟雄（小）配子体形态形状：腊肠形，两端钝圆。胞浆：浅蓝色或淡紫红色。核：一个，较大，疏松，位于中央，浅红色，核周可见不染色带。疟色素：黑褐色，松散分布于核周围。现在是65页\一共有82页\编辑于星期三（未）成熟雌配子体

与成熟大滋养体

的形态鉴别虫体大小:几乎充满被寄生的红细胞核:一个，较大且致密，周围有一圈空白的不染色带胞浆:边缘清楚，不含空泡疟色素:颗粒较多较粗，均匀散在虫体大小:不超过被寄生红细胞的3/4核:一个，延长呈带状，周围无明显的不染色带胞浆:边缘不整齐，多有空泡疟色素:颗粒较少较细，分布不均匀现在是66页\一共有82页\编辑于星期三厚血膜中疟原虫的形态

厚血膜由于用血量较多，涂制的血膜小，红细胞重叠且干燥慢，致使虫体皱缩，空泡消失，胞浆变形，各期疟原虫的体积都略微缩小，其中只有大、小滋养体的形态有较大改变，而裂殖体和配子体的形态则无明显变化。INTITUTEOFTROPICALDISEAASESHAINAN现在是67页\一共有82页\编辑于星期三厚血膜环状体体形态

环状体：胞浆呈环状或向核的一侧或两侧收缩，使环的中间断裂，或围绕核。间日疟原虫的环较大，常呈分号“；”和感叹号“！”状；恶性疟原虫的环纤细，常呈冒号“：”、飞鸟“⌒.⌒”、V状和断环状。间日疟小滋养体恶性疟小滋养体现在是68页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟原虫厚血膜现在是69页\一共有82页\编辑于星期三厚血膜间日疟大滋养体形态

间日疟大滋养体呈阿米巴样运动，胞浆常断裂几块或缩成圆形，核和疟色素均被包在胞浆之中，着色深，只隐约可见红色的核和黄绿色的疟色素。胞浆可皱缩断裂成几个块状，大小不一，似互不连接。核位于胞浆之中或外边。疟色素分布不均匀。有些仅见胞浆和疟色素而核看不清楚。大滋养体现在是70页\一共有82页\编辑于星期三厚血膜恶性疟

大滋养体形态

恶性疟原虫大滋养体与薄血膜形态相似，常呈圆形，体小结实，疟色素细小，金黄色，结成块状后，呈黑褐色。现在是71页\一共有82页\编辑于星期三厚血膜间日疟配子体形态间日疟原虫的配子体呈圆形或卵圆形，除虫体略缩小且着色深外，均与薄血膜相似。雄配子体核大，疏松，圆形或呈星状，胞浆较少，着色淡，疟色素颗粒大，数量较多，散在分布。雌配子体与圆形成熟的大滋养体相似，但配子体疟色素颗粒粗大，多而散在分布。大配子体小配子体现在是72页\一共有82页\编辑于星期三厚血膜恶性疟配子体形态

配子体呈新月形或腊肠形，如血膜干燥较慢，则可缩成圆形，核居中，疟色素围在核周，外围一圈胞浆。此外，还可见配子体的胞浆部分或全部消失，只留下核和疟色素，或核和胞浆均消失，只留下一些疟色素。大配子体小配子体现在是73页\一共有82页\编辑于星期三红细胞通常胀大

薛氏点明显成熟环状体粗大滋养体有阿米巴样伪足可见不同发育期的原虫

间日疟（P.vivax）鉴定要点现在是74页\一共有82页\编辑于星期三环状体钎细,红细胞不涨大一个红细胞内可有几个环状体环状体内可有2个核

环状体可贴在红细胞边缘

血片中没有其他发育期滋养体配子体呈新月形或腊肠形可出现茂氏点恶性疟（P.falciparum）鉴定要点现在是75页\一共有82页\编辑于星期三间日疟原虫形态现在是76页\一共有82页\编辑于星期三恶性疟原虫形态现在是77页\一共有82页\编辑于星期三两种疟原虫薄血膜形态鉴别(吉氏染色)

间日疟原虫

被寄生红细胞 大小形状 胀大 颜色 褪色 斑点 薛氏点出现稍晚，红色，细小数多 小滋养体 大小 较大，约占红细胞直径的1/3 核 1个 胞浆 较薄 色素 无 大滋养体 大小 较大 核 多见1个 胞浆 阿米巴样，常含空泡 色素 黄褐色，细小，杆状，散在分布未成熟裂殖体 大小 较大 核 2个以上 胞浆 圆形或不规则，空泡消失 色素 黄褐色，分布不匀 成熟裂殖体 大小 大于正常红细胞 裂殖子 12～24个，常为16～18个，排列不规则，较大 色素 黄褐色，常聚集一侧雌配子体 大小形状 大于正常红细胞，圆形 核1个，较小，深红色，位于一侧 胞浆 深蓝色