樟树籽蛋白质的提取与分析课件

樟树籽蛋白质的提取与分析08生物林开鹏指导老师：李卫林目录前言材料与方法结果与讨论结论前言1樟树籽简介

1）外形

樟树籽,又名樟梨、香樟大木姜子、樟子等。成熟的樟树籽呈扁球形,直径大约5～9mm,每千粒重大约是200g,果皮肉质薄,能散发出芬芳的清香2）药理作用樟树籽有驱风散寒、行气止痛之功效。癸酸(C10)已应用于医药行业合成鱼腥草素等消炎药,主要含有癸酸(C10)的樟树籽脂肪油已被试制成碳酸甘油脂,用于治疗脂肪代谢紊乱病症,并能降血脂及胆固醇。实验提取方法1）称样

取10g样品装入滤纸斗中，把滤纸斗的开口处折起来封死；防止样品泄出滤纸斗。调整滤纸斗的高度，使其放在抽提管中时略低于虹吸管的上弯头处2）虹吸向提取管中倒入石油醚，使其液面达到第一次液面的一半，冷凝管与自来水管相连轻轻打开自来水（冷凝用），将索氏提取仪整个装置放入恒温水浴锅中加热提取（水温80℃左右）提取时间2～2h，约虹吸10次以上3）回收取下平底烧瓶，将提取管的下端口插入回收瓶中，倾斜装置，提取管中的石油醚会虹吸而流入回收瓶中，达到回收的目的。再装上平底烧瓶，继续放入恒温水浴锅中加热直至冷凝管下端无石油醚滴下，表明平底烧瓶中的石油醚已经蒸干。注意：必须蒸干后才能放入干燥箱烘干，否则会引起火灾。取下平底烧瓶，回收提取管中的石油醚4）称量粗脂质量将平底烧瓶放入120℃的电热鼓风干燥箱中烘15min，取出冷却后称重（须戴手套，以免烫伤）。再将平底烧瓶用洗涤剂洗净，于120℃的电热鼓风干燥箱中烘干（约15min），取出冷却后称重，两者的质量之差就是粗脂的质量。

5）蛋白质的溶解将上述去脂烘干的样品置于烧杯中，加入ph为7.2的磷酸盐缓冲夜100ml浸提2h蛋白质的分离方法1将浸提液均匀倒入两个离心管使两管质量相同，对称放入离心机中，调整离心机4000转5分钟，将上清液倾入烧杯，加晶体NaCl少许（加速沉淀并使沉淀完全），待溶解后再加入95%的乙醇100ml混匀。观察有无沉淀析出2将所得溶液离心，获得沉淀，用1%NaCl溶液溶解定容于250ml容量瓶中，备用。蛋白质的定性

1茚三酮反应取1支试管加入蛋白质溶液1毫升，再加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色在一小块滤纸上滴一滴0.5％的甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴上一滴0.1％的茚三酮乙醇溶液在微火旁烘干显色，观察2黄色反应

取一试管，置所提取的蛋白质溶液10滴及浓硝酸3~4滴，加热，冷却后再10%NaOH溶液5滴，观察颜色变化,

紫外光吸收法测定蛋白质浓度

在紫外分光光度计上，将未知的蛋白质溶液小心盛于石英比色皿中，以生理盐水为对照，测得280nm和260nm两种波长的吸光度（A280nm及A260nm）。将A280nm及A260nm波长处测得的吸光度按下列公式计算蛋白质浓度。

C=1.45A280nm－0.74A260nm式中C：蛋白质质量浓度（mg/ml）；A280nm：蛋白质溶液在280nm处测得的吸光度；A260nm：蛋白质溶液在260nm处测得的吸光SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法—蛋白质的分子量测定实验试剂配制灌制分离胶电泳制备样品和上样.灌制浓缩胶考马斯亮蓝染色结果与讨论

前处理

粉碎后用烘箱对樟树籽进行干燥时，粉末热时湿度较大冷时结冻成固态，可以体现樟树籽中油脂含量较高，

称量樟树籽10.002g索氏抽提得到蛋白和淀粉的混合物重7.623g，计算油脂的含量粗脂的含量（%）=2.377／10.002*100%=23.765%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法经过电泳操作得到出产品的图谱，分离胶的浓度为7.5%，浓缩胶的浓度为5%。图1电泳图谱（7.5%分离胶，5%浓缩胶）图2电泳图谱（10%分离胶，5%浓缩胶）电泳结论

从图中可以看出，当分离胶的浓度采用7.5%时，分离效果比较差，而且泳道中蛋白样品有拖尾现象，因此调整分离胶的浓度。 从图2可看出，样品1和样品2中蛋白质组分得到较好的分离，出现比较明显的条带，中间所加标准品的量太少，没有显示出条带。从这次的实验结果可知，樟树籽中蛋白质的分子量大约在30～200kdal之间。结论通过实验可以得到以下结论：

通过对樟树籽脱脂，然后采用稀盐溶液所得产品通过茚三酮反应证明是蛋白质，采用醇溶法提取的产品也用该方法证明是