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本文格式为Word版,下载可任意编辑——花青素提取工艺
黑大豆、紫薯花青素
一、提取工艺
1、黑豆:pH2.0,醇提黑豆为乙醇浓度60%,提取时间80min,提取温度50℃,料液比1:6,得率为84.21%;水提黑豆为提取时间80min,提取温度60℃,料液比1:8,得率达89.04%。反复提取5次。
2、紫薯:最正确条件:物料比为1:20,用85:15的酸化乙醇,置50℃恒温,提取60min,重复2次,提取率可达90%以上。
二、纯化
酸醇提取物真空抽滤后用旋转蒸发器旋蒸去乙醇,再用石油醚萃取3次以除去脂类,最终再真空抽滤保证提取液无颗粒杂质,得到花色苷粗提物。将经过酸化的花色苷提取物导入AmberliteTMXAD-7HP型大孔吸附树脂柱中,流速1ml/min,树脂完全吸附后用上样液50倍体积的酸化水冲洗,流速2ml/min,再用80%酸化乙醇洗脱,流速1ml/min,当柱中流出液体不透光时用烧杯接入,直至液体开始透光后中止。将此溶液旋转蒸发后装入培养皿中,冷藏于-80℃冰箱,冷冻2h后,放入冷冻枯燥机冻成干粉。以矢车菊素-3-葡糖苷为对照,经HPLC确定其纯度。
三、花色苷浓度确定
1、最大吸收波长的确定:对黑大豆、紫薯花色苷粗提液在200-600nm之间进行全波长扫描,可得到两种花色苷在可见光区的最大吸收峰,设为530nm左右。
2、标准曲线制作:取矢车菊-3-葡糖苷(cyaniding-3-glucoside,购于sigma,纯度>95%)标准品若干克,用蒸馏水配成0.123、0.108、0.086、0.069、0.049、0.035mg/ml(根据需要自行设定浓度梯度)。以蒸馏水为空白对照,在530nm波优点测定各提取物吸光度。以吸光度(A)为纵坐标,标品浓度(mg/mL)为横坐标,绘制标准曲线。得线性方程:y=6.519x一0.0449,R2=0.9989(R2尽量大于0.99)。以此线性方程我们可将吸光度值转换成花色苷浓度。
分别收集紫薯、黑豆各次浸提液,各测定其总体积。取一定量上层液体,5000rpm离心10min后,取上层清夜在530nm下测吸光度。与标准曲线比较即可得出溶液中花色苷浓度。
将适量提取液用相应浓度的pH3.5的乙醇溶液定容至适当体积,以对应的乙醇溶液作参比,于535nm处测A535nm值,其计算公式为:
式中:MF—种皮花色苷质量分数,mg/g;A535nm—吸光值;V—定容体积,mL;N—稀释倍数;98.2—花色苷在535nm处的平均消光系数;m—黑大豆种皮质量,g。
花色苷得率计算公式:
式中,n一样品的浓度;v一样品的体积;f一样品的稀释倍数;M一总花色苷含量。
四、氧化能力测定:
?抗脂质过氧化法
?总抗氧化能力(TAC)测定:FRAP法
??OH清除能力:邻菲罗啉-Cu2+-抗坏血酸(Vc)-H2O2体系??O2-清除能力:邻苯三酚-鲁米诺-碳酸盐缓冲液体系?H2O2清除能力:H2O2-鲁米诺
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