药物分析第四章-前处理-柳

一、定量分析样品前处理方法

Pretreatmentofsampleusedinquantitativeanalysis概述定量分析样品前处理方法第一页，共21页。泛影酸碘番酸磺溴酞钠三氯叔丁醇碘苯酯第二页，共21页。含金属有机药物酒石酸锑钾富马酸亚铁卡巴胂金属有机药物第三页，共21页。定量分析样品前处理方法＊不经有机破坏的分析方法直接测定法经水解后测定法直接回流后测定法硫酸水解后测定法经氧化还原后测定法碱性还原后测定法酸性还原后测定法利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量第四页，共21页。＊经有机破坏的分析方法湿法破坏

HNO3-HClO4HNO3-H2SO4H2SO4-MSO4干法破坏氧瓶燃烧法第五页，共21页。空心A.燃烧瓶B.铂丝网C.D.盛固体样品滤纸及其折叠法E.F.G.称取液体样品方法7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm滤纸滤纸AGFEDCB氧瓶燃烧装置及称样方法第六页，共21页。氧瓶燃烧法样品吸收液

测定方法含氟有机药物H2O

pH4.3HAc-NaAc

Buffer茜素氟蓝

分光光度法含氯有机药物NaOH溶液

银量法汞量法

分光法含溴有机药物H2O2-NaOH液

或NaOH液-

银量法分光法

硫酸肼饱和液含碘有机药物NaOH液-银量法碘量法硫酸肼饱和液

汞量法分光法第七页，共21页。碘苯酯含量测定

取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOHT.S.2ml与H2O10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10ml，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约3~5min，以除去剩余的溴蒸气，加KI2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液(0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代钠液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2C19H29IO2分子量为416.34第八页，共21页。二、药品质量标准分析方法验证指导原则药品质量标准分析方法验证药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则药物稳定性试验指导原则缓释、控释制剂指导原则微囊、微球与脂质体制剂指导原则细菌内毒素检查法应用指导原则第九页，共21页。

第三节药品质量标准分析方法验证

目的：

证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求

效能指标：评价分析方法的尺度

效能指标包括:

精密度,准确度,检测限,定量限,选择性,线性与范围,耐用性第十页，共21页。(1)准确度（accuracy）：测量值与真实值接近的程度表示:回收率测定方法：回收试验加样回收试验第十一页，共21页。(2)精密度（precision）：定义:同一样品多次测量值之间相互接近的程度表示：标准偏差(s),相对标准偏差(RSD)重复性:同一实验室,同一人多次测定的精密度中间精密度:同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度

重现性:不同实验室，不同人测定的精密度第十二页，共21页。

(3)专属性（specificity）指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性)。第十三页，共21页。(4)检测限（limitofdetection，LOD）：药物能被检出的最低浓度(µg/ml)测定:信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限（1imitofquantitation，LOQ）：药物能被定量测出的最低浓度(µg/ml)测定:信噪比法(S:N=10:1)第十四页，共21页。(6)线性与范围（linearityandrange）：待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围线性关系：Y=a+bx（r=0.9999)线性程度：相关系数(7)耐用性（robustness）:测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等第十五页，共21页。检验项目和验证内容项目内容鉴别杂质测定含量测定及溶出量测定定量限度准确度＋＋精密度－＋重复性＋＋中间精密度＋①＋①专属性②＋＋＋＋检测限－③＋－定量限＋－线性＋＋范围＋＋耐用性＋＋＋①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充③视具体情况予以验证第十六页，共21页。第四节、生物样品分析的基本步骤1.药物从蛋白结合或缀合物中释出⑴蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀⑵盐酸水解⑶酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH7.0~11.0使肽键降解)第十七页，共21页。第十八页，共21页。样品固相净化

及反相高效液相色谱法

测定血浆中茶碱

血浆样品0.5ml+0.8ml内标液(0.01mg/ml咖啡因)+2ml甲醇

上清液加于2g

Al2O3柱，用甲醇洗脱

收集洗脱液

用空气流挥干

残渣以50.0µl流动相溶解上清液10µl进样伍朝筼等药学学报,1989,24(10):769~773旋涡振荡0.5´离心15´(3000r/min)离心6´17000r/min第十九页，共21页。血浆样品净化后空白血浆净化前空白血浆ColumnZorbaxC185µm2.5cm4.6mm254nmPrecolumnYWG-ODS9-11µm54.6mmMobilePhase:甲醇-醋酸钠(0.05mol/LpH3.0)50׃5012840min茶碱咖啡因12840min12840min第二十页，共21页。50100150200252015105茶碱(µg/ml)(min)