布鲁克核磁培训电子版

核磁应用培训笔记一、一维H谱实验操作流程1New，name：样品名称；PROCNOSolvent：不代表锁场的溶剂，只影响最后打印谱图参数中溶剂项的显示；ExpenrimentDirs：标准实验，不代表脉冲系列；User下，可以建立自己的标准实验；H谱的标准实验名称是：proton2、getprosol：把相关的脉冲参数保存在Acqupars表中:Acqupars→PL13LockLOCK剂名称直接锁场；锁场的目的？4、atma：topshim5、NS输入数值6、rga7、zazerogoNotice：调谐：做同一样品的不同谱图时需要重新做一次调谐。topshim+空格+tunea同一溶剂的样品，建议在同一时段做谱，有利于匀场。样品③溶液高度太低。8、部分参数的设置edaased①PULPROG：脉冲系列名称，zg30:30度角激发，zg：90度角激发；②AQ-mod：采样模式③TD：采样点数④NS:采样次数⑤DS:空扫：真正开始采样前先采集的次数，做一维谱时可设为0，二维谱空扫的次数设置非常重要。⑥TD0，真正采样次数，NS*TD0，TD010，NS1024，1024*10⑦SWSWAQ⑧O1P，O1，ppmHZ最右边：谱宽/2+O1P和脉冲系列有关的参数①DE值，采样结束后等待衰减的时间。做杂核时需要更改。②D1：弛豫延迟，做定量H谱时需要更改P1；PL1（dB9、谱图处理Procpars：窗口函数①efp：指数函数，em、ft、pk②gfp：高窗函数：gm、ft、pk③apk：PHC,PHC1，Notice：LBLBLB0efpLBGBGFP定标plot如何创建模板？C:\Bruker\Topspin\Plot\Layouts,先另取名字创建模板，再将模板文件夹下的默认模板删除，如H创建的模板改为默认模板的名字。二、如何做H谱的定量？与标准一维氢谱相比，需要做一下变换1、将脉冲系列zg30改为zg，2、找内标，两个峰挨的很近且基线分离，一般很难找到合适的内标物。3、调整O1P,使得O1P在两个峰之间4、NS要足够大，为了保证较好的信噪比，定量最起码要做半个小时以上。5、D1>5T1,D15T1，T1，D1C13CPD1、getprosol2、atma3sw4、rga5、zg6、trtr4，427、efp：apk8、ppf：对碳谱的全谱进行标峰。9、Mi+数字+PPF：表示强度低于该数值的不标峰。10、goGO11、和脉冲相关的参数CPDPRG2，通常情况下用Waltz16，90杂核时需要更改。Notice：看到碳谱有裂分，首先要考虑是否有同分异构体，再考虑更改CPDPRG2，选择带bi的参数。四、碳谱定量实验（1CBIG，new→ok2、将zgig30改为zgig3、DS:0五、DEPT（45°、90°、135°）1、New→C13DEPT90→OK2、getprosol3(1NS，1/4.(2)PulseprogNS4(3)DS=8，NS=4，SW:谱宽，O1P.4、rga：zgNotice：DEPT45，只出现季碳；DEPT135：CHHALTSRcopySRDEPTDEPTC六、如何将多种谱图打印在同一张图上？方法一：1、先将全谱图调出并标好化学位移。2、选择1D+1D+1Dxwp打印模板3、在data中，点击ADD，选择实验数据现在的位置，将需要的数据拖入，点击Apply，确定。方法二：1、随意拖入一张谱图，输入plot2、全选中，并删除原有谱图3、在DATA里面选谱图，APPLY→OK;4、在右侧选择多个谱图叠加的图标，三条重叠的折线；5、在空白处拖动鼠标，出现第一张谱图6Edit，steaked，输入谱图张数。Spectra：0*5,05此方法的缺点是不能单独修改每一张谱图。七、一些补充注意事项1、BBf，探头。2、新安装仪器可以做的核有H、C、P、F、N,可以直接选择标准实验，直接调用标准模板。P31CPD,全去偶，zgpg30；P31：zg。LOCK之后可以直接输入一系列命令，点击ENTER直接完成。3（1）有无脉宽和功率（2）有无标准实验；4、P的化学位移的标定：外标法。（查找网上文献P0SRSRP标准品：85%磷酸溶液。不锁场、不匀场，直接调谐、prosol。不锁场实验1BSMSlock（2sweep（即将1（2）ON-OFFOFF（3）atma；rg；zg；八、对于没有标准实验、没有脉宽和功率的杂核如何入手做？以B11为例。1、首先查询该杂核的旋磁比、天然丰度，对于天然丰度太低的要求浓度高些，或者很难做出来。Help→NMRGuid→eNMREncyclopedia→NMRApplication→NMRpenddicTable→点击要做的元素查看旋磁比和天然丰度。2CC13IGok。3、更改参数Acqpar（都是C13C）→输入edspF1C13B11,F2→Default→Save→再次回到Acqupars扫描次数SW(+-200D（经验值2S，0（D1atma，手动调谐，第一次做核时必）→Tuningatma；rga；rgazgapksrefclose（O1P）→edmac（宏命令）+空格+名称（随意命名。校准背景信号，第一段（absf1absf2+空格+absf（absf1+absf2+absfNotice：BL4、如何创建标准实验模板？wpar→userparwritenew→→OK→close→new→10%NaPtC13IG90）九、部分二维实验温馨提示：二维谱实验最重要的就是控温。（一、实验一1、NewCOSYGPMFSW：用梯度场进行相关路径的选择。其中GP粒波的好处：可以从对角峰上看到单峰的性质，简化对角峰，易于解析。2、lock3、atma；topshim；getprosol，调谐的目的是为了接收线圈的频率与中心频率保持一致，提高灵敏度。DS16Pulseprog：查看脉冲系列。TD,F2256（设高一点可以提高分辨率与采样相关的参数：TD、NS、DS、SW、O1PNS、DSased，4、rga；zg5、谱图处理xfbxf，b调进一维谱①选中一维谱，右击，选择displayAs2Dprojection。②选F1+F2点等高线调整图标（一个没有底边的三角弧形，中间几条平行线穿过）进Levelincrement1.2-1.3Numberoflevel（等高线数32；Fill→Apply→OKclev+32校准（即定标）放大谱图进行定标。proj，选择UPdatarows/colsfromdisplay→ok→calculatepositiveprojection→峰都去除噪音）（二、实验二1SWSP②TD(F2=2048，F1≥256)③SW,O1P;④D9：自旋锁定时间，默认值为0.08S，即混合时间（设短的话可能会无法调整相位）2、lock3、atma；topshim；getprosol；4、谱图处理xfb调等高线01校准（三）实验三1、New→NOESYPHSW→适用于大分子2、①NS：8*N；DS:16*N;②D8混合时间，空间＜5à，峰的强度与距离的六次方成正比。对于大分子，D8=0.1～0.3S；对于小分子：D8=0.6～0.8。Notice：分子量越大，弛豫时间越短，分子量越小，弛豫时间越长，温度越高弛豫时间越短。3、lock4、getprosol5、atma；topshim；rga；zg（四）实验四1、new，标准实验选择ROESYPHSW,PH：通过相位循环可以减掉一些峰。2、具体实验步骤与前面的实验步骤大致相同，通过查看与脉冲系列相关的参数对参数进行设置。接着LOCK,getprosol；atma；topshim；rga；zg3SetEnableautomaticcommandspooling钩。可以针对一个样品的自动排列做多个实验。（五）实验五：J-Resolved1、new→cosy45sw（先借用）2、Pulprog：jresqf（消除化学位移，保留耦合常数）3、NS:4*N；DS：16；4F2（化学位移；F1（耦合常数）SW=20，SWH=50HZ，O1PF2，F15、getprosol6、lock7、atma；topshim；rga；zg；（六）实验六H-C相关的二维谱1New，选择标准实验：HSQCETGPSISP,ET梯度；SISP2、输入命令eda，进行采样参数设置：NS=1*N,DS≥16,TD,SW(F2H宽，F1CasedCNST2：HZ,C直接耦合常数的平均值。②GPZ2，C:20.1%，N15，8.1%，若有些杂核没有显gradratio3、lock4、getprosol；atma；topshim5、rga；zg（七）实验七1、New→HMBCGPND，ND表示在采样时间内不进行去耦。2（1）NS=2，DS=16,O1P=?,SW=?可以适当地减小，当看不到交叉峰时，可能该值设大了，也可能是因为二面3、lock4、atma；topshim；rga；zgNotice：HMBC谱图中可能存在HSQC的残余峰。（八）HMBCHSQC1、new→HMBCGPND,Ttitle：J-FilterHMBC2、更改脉冲系列及参数Pulprog→HMBCGPL2ndqfeda，更改采样参数，NS=2*N,DS=16，QF，TD(F1，F2)，O1P输入命令ased，更改与脉冲系列相关的参数，CNST6:120HZ;CNST7180HZ,HSQCCNST13，百分比根据右侧提示填写。3、getprosol4、lock5、atma；topshim；rga；zg十、完整的二维谱图处理过程1、输入xfb，谱图变换；2、调入一维谱，选择F1+F2，→ok3、clev32，修改等高线。4、校正相位（NOESY、ROESY、TOCSY、HSQC需要校正相位，其他的不需要）点相位校正图标，选几个点，ADD，先校正红线所在的位置。5、定标：先定好一维谱，读出化学位移，再点击定标图标，找出中心位置进行定标。6T1，左边没有信号的投影。Proj→edit→update→ok→sub27F1，edp→procpars→founer→ME_mod→LPfr（LP32。此处理的缺点是可能产生鬼峰。十一、核磁的维护（一）硬件维护1、机柜里面的滤网一般一年清洗一次2、建议每周重启电脑一次3、打开机柜需要带放静电手环4、每次严格开关机，关机开机后要做一次CF。5、90度脉冲校准正常情况下半年做一次，对新仪器可能需要三个月做一次。6、field的校准，正常情况下半年一次，对于新仪器三个月做一次。（二）磁体及软件维护1、1H90度脉冲的校准,标样：0.1%EBinCDCL3new，PROTON，title：1H90callockgetprosol；atma；topshim更改参数edazg30→zg；NS=1，DS=0;O1P=2.6PPM(在乙基的四重峰中央)。asedD1=20S,RG=16;P1=10.60来（脉冲作用时间）2；PLW1PL1P1P1个谱看看。rga；zgefp；apk，处理谱图，并找到四重峰，使当前窗口只出现四重峰。dpl，定义打印区间。procpars，PH_modPK）输入命令POPT，脉冲的功率为脉宽的优化模式。勾选第三个选项即performautomaticbaseline(PARAMETERP1OPTMUM3*10.60；ENDVAL4*10.60+4；INC2，36、38Staroptimlze→Save→ok→180skipcurrentoptim…停止实验。TITLEAcquars360490prosolpulse→Save→selectallrelevant→ok→输入密码→ok→yes→ok→yes→ok，2、C1390ASTM（P48）new→PROCNO1)→C13CPD(标准实验名称)getprosol→lock→atma；topshimedazgpg30O1P=67O2P=3.5asedRG=32D1（S）=20；P1先记录下原始数值如8.8，先赋予小点的值如2uszgCH90H90Noticeprosol390new→pulsecal90closepulsecalclose4、3D匀场，标样：90%水+10%重水。new，HlockH0+DO2 2atma；topshimgui（Y）3D→After：ZX-Y-XZ-YZ-Z（Before）→Star→close。H，lock→getprosol；atma；topshimwsh→filename→write→closeNoticeDMSOTMS星峰③看溶剂本身的峰信号，越窄越好。5、lockfield的校准方法一：锁场锁氘信号，标样用10%的EBinCDCl3进样lockCDCl3BSMSlock\level→field→field（6704.3）→点ON-OFF脱锁→输入命令lopo，enter进行锁场参数的优化→选溶剂，点ok6704.3（锁场后的值。值可以使其变得对称，从交叉点出来的第一个峰都是向上的。stanby，edlock，方法二：什么溶剂都锁不上的情况下使用该方法H0+DO2 2sweepON-OFF修改采样参数，建立一个Hatma；rga；zg；efp；apk4.7procparsPH_modpk；gs，BSMSlock\levelfiled4.74.7Standby，输入命edlock，点折线图标，保存。GSstopCDCl3

样品做校准。十二、一维选择性激发实验1、实验一：针对分的比较开的峰新建一个实验，做一个一维谱。点击积分符号，在自己想要的信号上，对其进行积分。“Saveasveg”右击保存图标，保存。buttonnmrselect…setGrROESY→OK→；②cancelcancel。NS=8%N，DS=4*Nrga；zgef→相位校正，一般会出现三种信号：相关信号、吸收型信号、色散信号2、实验二：针对重叠比较严重的多重峰。CSSF:chemicalshift化学位移，selectivefilter。进样，采集一个一维谱找到重叠峰，拷贝其中的一个化学位移：所关心的峰的中间位置。O1P更改脉冲系列（pulprogselcssfzs.2→okNS=2*N,DS=16，TD0=8~16，部分参数根据右侧提示修改。CNST2=4(此值取决于峰的重叠程度)rga；zg3、实验三i，I更改脉冲系列，将selcssfzs.2→selecssfdizs.2（2zs；dicosy）D9（混合时间、NS、DS、TD0rga；zgtocsynoesyroesyhmbc角峰，只有交叉峰。十三、溶剂峰的压制1、只压制一个峰做一个一维谱，找到要压制的峰，复制化学位移。new→标准实验名称为：WATERSUP,NOESYGPPR1d→ok：低功率、长时间的功率，关键设置参数D1PL9。对NS、DSPL9=60dB（该值越大，实际功率越大；D1=2s(时谱宽要足够大。getprosol；2、压制两个峰edc→标准实验名称：LC1D12→OKO1P:1（谱图的中间）O2P：压制峰2的中间位置的化学位移值。getprosol（4）NS=8*N,DS=4,PL9=60（5）rga；zg3、如何压制多个峰？new→LC1DCWPS(标准实验名称)NS、DS、SWgetprosolL30N)xaua（自动采集一个一维谱N4、水峰的压制（与压制一个峰的步骤是一样的）new→WATERSUB→NOESGPPR1dO1PNS、DS、D1、PL9getprosollockatma；topshim；RGA→RG，RGrga；zg→fp→all→apkO1rga；zg（多次循环，直到水峰的压制达到好的状态5、实验五（1）edc（new）→NOESYPR1D(标准实验名称)（2）D8=0.1S;NSDS(O1(O1P=4.7)D11=30ms=0.03sD1=2S;PL9=50~60Db(不宜给太大的值)getprosollockatma；topshim；rga；zgINOESYGPPR1d（加梯度场实验Notice：加梯度场对锁场相位要求比较高。十四、Topspin软件介绍1re、rep、rel、repl+2、rel：打开最后一个实验名称下的实验号。Repl：实验号下面的某一处理号。3expl：2.13.04、命令.all5、E命令，选择要看的区域6ef；apk；ppf（标峰（输入一系列命令符）→excute→close。Notice：LB增宽因子指数窗函数。7、批处理积分（intser批处理积分命令）先对第一张谱图进行积分并保存intser选择第几个实验→nextoptions（calibrate：选定某一个位置；Normalizesumofintegrals归一化法）→第几个峰→定义几个→ok，归一化值加和多少，可以自己增。8、增加一个处理号（wrpCorldram9、去卷积（去卷积的峰保留在999的处理号上面）Analysis→Deconvolution→ok→options（用什么函数）（uselorentzianshape）→选择区域（阈值）→ok10、进入topspin用户名和密码的设置Set→options→admmistration→locktopspinuserinterface11、电子签名：Electromicsignaturecreationesign12、audit13、更改layout的三种途径①输入命令layout②contrl+P③处理参数中的Automation→layout14、模板保存的路径，C:\Bruker\Topspin3.0\plot\layouts15、stack1d多个谱图叠加16、parplot参数修改17、输入命令almanao打印化学位移18、利用NMRGuide自学：NMRGuide→输入关键词→搜索19、Help→manuals→1D\2Dstep-by-stepbasic十五、T1、T21、1HT1（做二维时也需要控温）H（New→getprosol→lock→atma；topshim；NS=1;DS=0；rga；zg→efp；apk12↓Iexpno1，O1P12↓zg30t1ir（实际是假二维）→点（目的是将其改为二维OK→到脉冲参数里面看采样参数：NS=8*N（此参数设置是实验的关键）,DS=4，FnMODEundefined→TD（f1：变10f265536S（FF1LIST，找到VDLIST,VDLIST,edit（VDLISTVDLIST→rga；zg数据处理更改处理参数（procpars）SI{F1的一定是偶数，如16，其中SI(F1)＞TD(F1);SI(F2)＞TD(F2);f2）→相位调节图标，将十字线放在最下方，点鼠标右键选只需选一个点）→点RproparsF2PH_modPK→Analysis“T1/T2”图标，进入右侧FIDspectrum，弹出下一个对话slicenumber=1ok→点第二个图标peaksranges：弹出对话框，选manualintegration，弹出另一对话框，点ok分→积分后点击“带A的保存”图标，选第三个选项Exportregionstorelaxationmoduleandret→①fitingfuntionuxnmrt1②listfilename：vdlist③检查以上三项无误后输入ok，plotT1/T2，拉动左键。2、1HT2（自选回波）H（New→getprosol→lock→atma；topshim；NS=1;DS=0；rga；zg→efp；apkIexpno1，O1P都不变。12↓cpmg，将一维模式改为二维模式。NS、DS、FnmodeNS=8*N,DS=16,TD(F2=65536，F1=10)，Fnmode:Nodefined，SW（6）在LISTVIDLIST（）D2O

来计算，是关键，单个循环时间=2D+P180→保存。2O回到采样参数中，查看和脉冲系列相关的参数，D2O

稍微大于50*P2（注意单位换算D1T1D1>5T1，本T2②NSDS③TDS1④VVLIST的设定，最后一个循环次数由D2O

2O决定。rga；zg谱图处理（T1）更改处理参数（procpars）SI{F1的一定是偶数，如16，其中SI(F1)＞TD(F1);SI(F2)＞TD(F2);f2）→相位调节图标，将十字线放在最下方，点鼠标右键选只需选一个点）→点RproparsF2PH_modPK→Analysis“T1/T2”图标，进入右侧FIDspectrum，弹出下一个对话slicenumber=1ok→点第二个图标peaksranges：弹出对话框，选manualintegration，弹出另一对话框，点ok分→积分后点击“带A的保存”图标，选第三个选项Exportregionstorelaxationmoduleandret→①fitingfuntionuxnmrt1②listfilename：vclist③检查以上三项无误后输入ok，plotT1/T2，拉动左键。Notice：此时得到的T2不是真正意义上的T2，而是循环次数，因此T2实际值计算公式为：如本例中得到的值为 68.365，则T2的实际值（2D

+P2）=68.37*（2*0.00105+20.80*10-6S）=151ms，注2O 2O意单位换算，P180即为P2。CT1tlirpg十六、如何设置命令的自动排列？setEnableautomaticcommandsppoling→okset→morepreferences→statusbarprefrences→change勾选需要显示的栏目→Apply→ok→Acquisitionbaron/off态栏，关掉后再打开。十七、如何建立宏命令的图标？输入edmacedmac+空格+宏命令名称→输入①efp②apk③.All④AbSN⑤ppf→点file工具栏保存→关闭在菜单栏（目标栏）点右键，选择AdduserdefinedbuttonAdd/modifyabuttonwithtextlabel(Add/modifyabuttonwithananicon（图标）Abs:自动积分；AbSn十八、H-Pnew→AcetoneC13去偶）EDSP,13C31P→Default→Save→Close。getprosol（4）更改采样参数①sw（f1）=400；②ns=2*n，DS=16；③NUC1，f1改为31P;④O1P,O2P=-50;更改与脉冲系列相关的参数：①CNST13：8.0000(BC,关键参数)②凡是带梯度的实验，异核相关相关要设好核的梯度场，输入gradratio（改核后再修改）→弹出对话框，显示三个数值，依次填入梯度场中的参数设置中。lock：acetoneatma；topshim；rga；zgxfbdev32sref，回车，close，close。定标Notice：Nucleus1nuclOFF十九、变温实验50℃（若气流量太小，会导致样品管底部温度与上部温）能锁场即可。207%左右。用高纯氦吹十分钟左右，再迅速将铜管插入液氮杜瓦瓶中。②夏天的时候需要把气流量开大些。edte（温度控制，probu