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本文格式为Word版，下载可任意编辑——生化试验思考题总结Shaonanlee黑暗舞者DID

生化试验思考题总结

1.蛋白质定量测量的方法有哪些？简要说明其原理。

答：a.紫外吸收，在280nm处有最大吸收峰。

b.定氮法，利用蛋白质中氮元素含量为16%固定比例来测定。

c.分光光度计法，利用OD值和蛋白质浓度成正比的原理。显色剂为考蓝。d.双缩脲法。也是利用显色反应。e.Folin酚法。

2.假使凝胶过滤层析分开的蛋白质样品中含有多种蛋白质，在各蛋白质分子量已知的状况下，如何判断哪一种蛋白质时所想要的？

答：现在假设有三种蛋白质abc，分子质量a>b>c。

那么，a最先流出，在体积V1处有一个洗脱体积，对应的a的溶液浓度在V1处也最高，就会有一个OD值的峰值。bc同理。由不同的OD峰值，对应不同的洗脱体积，就可以筛选出想要的蛋白质。假使想要b，那么在第二个吸收峰的时候，找到相应的洗脱体积，然后在其附近的所接到的溶液进行选取。就会得到想要的蛋白质。

3.假使盐析后的样品不经脱盐处理便上样电泳，对其结果有何影响？

答：假使没有去除清蛋白里面的盐分，则会使电泳速度下降。原因在于溶液离子强度太大，蛋白质表面的电荷减少，所以导致电泳速度下降，甚至无法泳动。

4.对电泳所得的结果如何进行定量分析？

答：将电泳完毕的样品（凝胶），按条带宽度的分布剪下，分别把每个小块样品

用NaOH溶液漂洗，再将漂洗过的溶液进行OD值的测量。

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5.使SDS具有高分辩率的三个因素是什么？

答：浓缩效应。电荷效应。分子筛效应。

6.试验所得的各点数据中，哪些易出现较大的误差？

答：有两个点。第一个，在三十秒的点，反应速度太快，时间假使把握不准，简单

出现误差。另一个，在3min的点，反应速度很慢，斜率小，则倒数大，所以时间把握不好，也简单出现大误差。

7.假使把碱性磷酸酶对底物的亲和力提高十倍，试验方案该如何修改？

答：把底物和酶的浓度都降低。

8.请举出三种提取质粒的方法，并简要说明其中一种方法的原理。

答：碱裂解（要求原理，书上有）；一步法（见书上46，47页有关TELT试剂的内容）

；SDS法；煮沸法。

9.分析质粒DNA切割不完全的原因。

答：a.质粒因素：碱裂解时间太长，无法复性；乙醇挥发不完全，影响酶的活性。

b.酶的因素：酶的浓度太高或者太低。或者酶的活性降低。

c.酶切体系：温度不是最适温度；时间不够长；缓冲溶液的问题。

10.分析酶切后没有观测到目的DNA的原因。

答：a.重组失败。

b.酶切失败。

c.目的基因量太少。

11.从哪些方面可预防PCR出现假阳性结果？

答：假阳性就是出现了不该出现的条带。

a.防止污染，

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