植物根系活力的测定

本文格式为Word版，下载可任意编辑——植物根系活力的测定

植物根系活力的测定

试验5植物根系活力的测定（TTC法）

植物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长状况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本试验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。

一、原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲（TTF），如下式：

生成的三苯甲（TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因参与琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到加强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。

二、试验材料、试剂与仪器设备

（一）试验材料

水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

（二）试剂

1.乙酸乙酯（分析纯）。

2.次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。

3.1％TTC溶液：确凿称取TTC1.0g，溶于少量水中，定容到100mL。用时稀释至需要的浓度。

4.磷酸缓冲液（1/15mol/L，pH7.0）。

5.1mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL，边搅拌边参与盛有500mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000mL。

6.0.4mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72g，溶于水中，定容至100mL即成。

（三）仪器设备

小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5mL1支、10mL1支、5mL3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1mg），电子顶载天平（感量0.1g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。

三、试验步骤

1.定性测定

（1）配制反应液把1％TTC溶液、0.4mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。

植物根系活力的测定

（2）把根细心洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3h，以观测着色状况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，说明该处有脱氢酶存在。

2.定量测定

（1）TTC标准曲线的制作取0.4％TTC溶液0.2mL放入大试管中，加9.8mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则马上产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF80μg。分别取此溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL置10mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF20μg、40μg、80μg、120μg、160μg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

（2）称取根尖样品0.5g，放入小烧杯中，参与0.4％TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～2h，此后马上参与1mol/L硫酸2mL，以中止反应。（与此同时做一空白试验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。

（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最终加乙酸乙酯使总量为10mL，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。

四、结果计算

根系活力

=

式中：C——四氮唑还原量，μg。[mgTTF/（g