生物氧化的学习资料

生物氧化的学习资料第1页/共104页第一节生物氧化概述一、生物氧化的概念二、生物氧化的特点三、氧化还原电位与自由能四、高能化合物第2页/共104页一切生命活动都需要能量，维持生命活动的能量主要有两个来源：光能（太阳能）：光合自养生物通过光合作用将光能转变成有机物中稳定的化学能。（植物和某些藻类）化学能：异养生物或非光合组织通过生物氧化作用将有机物质（主要是各种光合作用产物）氧化分解，使存储的稳定的化学能转变成ATP中活跃的化学能，ATP直接用于需要能量的各种生命活动。第3页/共104页一、生物氧化的概念

糖、脂、蛋白质等有机物在细胞内氧化分解，最终生成CO2和水并释放能量的过程，称生物氧化或细胞氧化或细胞呼吸。参见P209第4页/共104页1、CO2的生成

2、水的生成

在脱氢酶、传递体、氧化酶组成的体系催化下生成CH3COCOOHCH3CHO+CO2丙酮酸乙醛丙酮酸脱羧酶TPP丙酮酸+CoA-SH+NAD+乙酰CoA+CO2+NADH+H+

丙酮酸脱氢酶系AH22HH受体1/2O2H2OAATP中间传递体氧化酶激活脱氢酶第5页/共104页3、能量的生成当有机物被氧化成CO2和H2O时，释放的能量怎样转化成ATP

主要是通过呼吸链

底物水平磷酸化

氧化磷酸化第6页/共104页生物氧化的一般过程TCA脂肪酸参见P209第7页/共104页二、生物氧化的特点1.生物氧化是在生物体内水环境中进行的系列酶的催化反应。2.生物氧化是一个分步进行的过程，能量通过逐步氧化释放，主要以ATP形式捕获能量，不会引起体温的突然升高，可使放出的能量得到最有效的利用。3.生物氧化中CO2的生成是有机酸脱羧生成的。

4.水是许多生物氧化反应的氧供体。通过加水脱氢作用直接参与氧化反应。氧化过程中脱下来的氢质子和电子，通常由各种载体，如NADH等传递到氧并生成水。5.生物氧化有严格的细胞定位，真核细胞在线粒体内进行，原核细胞在细胞膜上进行。参见P210第8页/共104页生物氧化和有机物在体外氧化（燃烧）的实质相同，都是脱氢、失电子或与氧结合，消耗氧气，都生成CO2和H2O，所释放的能量也相同。但二者进行的方式和历程却不同：生物氧化体外燃烧1、细胞内温和条件高温或高压、干燥条（常温、常压、中性pH、水溶液）2、一系列酶促反应无机催化剂逐步氧化放能，能量利用率高能量爆发释放3、释放的能量转化成ATP被利用转换为光和热，散失第9页/共104页三、自由能与氧化还原电位（一）自由能（G）（1878）

指在一个体系的总能量中，在恒温恒压条件下能够做功的那一部分能量。用符号G表示。自由能变化（ΔG）

AB

ΔG=GB-GA参见P203根据ΔG判定反应方向:ΔG＜0放能，反应自发进行ΔG＞0吸能，反应不能自发进行ΔG＝0反应达到平衡第10页/共104页（二）生化标准自由能变化(ΔG0)

指在标准条件下，即温度为25℃，参加反应的物质浓度为1mol/L,若有气体，则为1个大气压，pH为7时，测定的自由能变化。单位为J/mol、KJ/mol。参见P204第11页/共104页四、高能化合物糖、脂肪、蛋白质CO2+H2O+能量生物氧化ATP1、高能化合物的概念

在标准条件下(pH7,25℃,1mol/L)发生水解时，可释放出大量自由能的化合物，称为高能化合物。习惯上把“大量”定为20.92kJ/mol以上。在高能化合物分子中，释放出大量自由能时水解断裂的活泼共价键称为高能键。用表示～

但须注意：释放的能量并非集中在这个键上，而是与分子结构和水解反应有关，生化上的“高能键”，涵义不同于普通化学上的“键能”，不能把“高能键”理解为“能键高”参见P204第12页/共104页2、高能化合物的类型

按其分子结构特点及所含高能键的特征分：磷氧键型磷氮键型硫酯键型甲硫键型参见表8-1第13页/共104页

（1）磷氧键型（—O-P)(A)酰基磷酸化合物1,3-二磷酸甘油酸乙酰磷酸-42.3kJ/mol第14页/共104页氨甲酰磷酸酰基腺苷酸氨酰基腺苷酸第15页/共104页(B)焦磷酸化合物ATP（三磷酸腺苷）焦磷酸-30.5kJ/mol-33.5kJ/mol第16页/共104页(C)烯醇式磷酸化合物磷酸烯醇式丙酮酸-61.9kJ/mol第17页/共104页(2)氮磷键型磷酸肌酸磷酸精氨酸-43.1kJ/mol-32.2kJ/mol这两种高能化合物在生物体内起储存能量的作用第18页/共104页3’-磷酸腺苷-5’-磷酸硫酸酰基辅酶A(3)硫酯键型-31.4kJ/mol第19页/共104页S-腺苷甲硫氨酸(4)甲硫键型-41.8kJ/mol第20页/共104页3.最重要的高能化合物ATP(三磷酸腺苷)α键△G0′＝－14.3KJβ键△G0′＝－32.2KJγ键△G0′＝－30.5KJ>20.92KJ（5kcal）－高能磷酸键参见P206第21页/共104页ATP的特殊作用ATP在一切生物生命活动中都起着重要作用，在细胞的细胞核、细胞质和线粒体中都有ATP存在。ATP在磷酸化合物中所处的位置具有重要的意义，它在细胞的酶促磷酸基团转移中是一个“共同中间体”

ATP是生物体通用的能量货币。ATP是能量的携带者和转运者，但并不是能量的贮存者。起贮存能量作用的物质称为磷酸原，在脊推动物中是磷酸肌酸。第22页/共104页

ATP是磷酸基团转移反应的中间载体

磷酸基团往往从磷酸基团转移势能高的物质向势能低的物质转移。磷酸基团转移势能在数值上等于其水解反应的ΔG0’。ATP作为磷酸基团共同中间传递体示意图第23页/共104页第24页/共104页参见P208第25页/共104页参见P207第26页/共104页第二节电子传递链

一、电子传递链的概念二、电子传递链的组成三、电子传递链的电子传递顺序四、呼吸链的电子传递抑制剂第27页/共104页一、电子传递链的概念1.概念：

在生物氧化过程中，代谢物上脱下的氢经过一系列的按一定顺序排列的氢传递体和电子传递体的传递，最后传递给分子氧并生成水，这种氢和电子的传递体系称为电子传递链。又称呼吸链。典型的呼吸链

FADH2呼吸链NADH呼吸链参见P210第28页/共104页2、电子传递链分布原核细胞存在于质膜上真核细胞存在于线粒体的内膜上

第29页/共104页二、电子传递链的组成由NADH到O2的电子传递链主要包括：FMN、辅酶Q(CoQ)、细胞色素b、c1、c、a、a3以及一些铁硫蛋白。这些电子传递体传递电子的顺序，按照它们的还原电势大小可排成序列，它们对电子亲和力的不断增加，推动电子从NADH向O2传递。电子传递中有四个复合体参与：NADH-Q还原酶（复合体I）琥珀酸-Q还原酶（复合体Ⅱ

）细胞色素还原酶（复合体III）细胞色素氧化酶（复合体Ⅳ）第30页/共104页电子传递中的四个复合体第31页/共104页呼吸链各复合体在线粒体内膜中的位置第32页/共104页第33页/共104页（一）NADH-Q还原酶（复合体1）

由FMN+铁硫蛋白功能：先与NADH结合并将NADH上的两个高势能电子转移到FMN辅基上，使NADH氧化，并使FMN还原。NADH+H++FMNFMNH2+NAD+第34页/共104页NADH是由NAD+接受多种代谢产物脱氢得到的产物。NADH所携带的高能电子是线粒体呼吸链主要电子供体之一。1.烟酰胺脱氢酶类以NAD,NADP为辅酶

氧化还原反应发生时，变化发生在五价氮和三价氮之间

还原形底物+NAD+

氧化形底物+NADH+H+

还原形底物+NADP+

氧化形底物+NADPH+H+第35页/共104页2.黄素蛋白脱氢酶类以FMN,FAD为辅基

FMN结构中含核黄素，发挥功能的部位是异咯嗪，氧化还原反应时不稳定中间产物是FMN。。AH2+FMNA+FMNH2FADFADH2第36页/共104页3.铁硫蛋白类（Fe—S）

铁硫蛋白中辅基铁硫簇（Fe—S）含有等量铁原子和硫原子，基中铁原子可进行Fe2+Fe3++e反应传递电子表示无机硫原子第37页/共104页

铁硫聚簇有几种不同的类型，有的只含有一个铁原子［FeS］，有的只含有两个铁原子［2Fe-2S］，有的含有4个铁原子［4Fe-4S］第38页/共104页第39页/共104页4.辅酶Q（CoQ）

辅酶Q（CoQ）又称泛醌，有时简称Q。是脂溶性辅酶。在线粒体内膜中是一种均一的流动库，可以结合到膜上，也可以游离状态存在。

CoQ和FMN都是NADH-Q还原酶的辅酶。CoQ和FMN一样，都能够接受或给出一个或两个电子，因为它们都有稳定的半醌形式。第40页/共104页第41页/共104页第42页/共104页（二）琥珀酸-Q还原酶（复合体Ⅱ

）

琥珀酸脱氢酶，它是嵌在线粒体内膜的酶蛋白。也是此复合体的一部分，其辅基包括FAD和Fe-S聚簇。琥珀酸脱氢酶催化琥珀酸氧化为延胡索酸，同时其辅基FAD还原为FADH2，然后FADH2又将电子传递给Fe-S聚簇。最后电子由Fe-S聚簇传递给琥珀酸-Q还原酶的辅酶CoQ。这一步不能形成的ATP.功能：将电子从琥珀酸传递给泛醌第43页/共104页第44页/共104页（三）细胞色素还原酶（复合体Ⅲ）

细胞色素是一类含有血红素辅基的电子传递蛋白质的总称。

（有颜色）根据吸收光谱的不同将细胞色素分为a,b,c三类。第45页/共104页第46页/共104页

细胞色素还原酶血红素辅基的铁原子，在电子传递中发生可逆的Fe3+

Fe2+

的互变起传递电子的作用。一个细胞色素每次传递一个电子。功能：将电子从泛醌传递给细胞色素C第47页/共104页第48页/共104页细胞色素c

是唯一能溶于水的细胞色素。总的说来，两个QH2参与电子传递，使两个细胞色素C还原，经过全过程又产生了一个QH2分子。因此从化学反应计算是一个QH2分子的两个电子分别传递给2分子细胞色素C。这种通过辅Q的电子传递方式称为Q循环。通过上述方式使电子由携带两个电子的载体—QH2转移给携带一个电子的载体—细胞色素C。这有利于电子的有效利用。第49页/共104页（四）细胞色素氧化酶（复合体Ⅳ）10个亚基的多聚蛋白第50页/共104页

由cyt.a和a3

组成。复合物中除了含有铁卟啉外，还含有2个铜原子（CuA，CuB）。Cyta与CuA相配合，cyta3与CuB相配合，当电子传递时，细胞色素的Fe3+Fe2+间循环，同时Cu2+Cu+间循环，将电子从cytc直接传递给O2。也叫末端氧化酶。功能：将电子从细胞色素C传递给O2其中cyta3与CuB形成的活性部位将电子传递给O2.第51页/共104页第52页/共104页NADH氧化呼吸链NADH复合体I

复合体II

Q复合体Ⅲ

cytC复合体Ⅳ

O2

FADH2氧化呼吸链(琥珀酸氧化呼吸链）FADH2Q

复合体Ⅲ

cytC复合体Ⅳ

O2三、电子传递链的电子传递顺序

呼吸链的各组分在线粒体内膜上是按一定顺序排列的，在线粒体内膜上主要有两条呼吸链：第53页/共104页第54页/共104页0.04或0.10.07第55页/共104页电子传递链第56页/共104页四、呼吸链的电子传递抑制剂1、概念

能够阻断呼吸链中某部位电子传递的物质称为电子传递抑制剂。

利用专一性电子传递抑制剂选择性的阻断呼吸链中某个传递步骤，再测定链中各组分的氧化-还原状态情况，是研究电子传递中电子传递体顺序的一种重要方法。参见P216第57页/共104页2、常用的几种电子传递抑制剂及其作用部位（1）鱼藤酮、安密妥、杀粉蝶菌素：其作用是阻断电子在NADH—Q还原酶内的传递，所以阻断了电子由NADH向CoQ的传递。（2）抗霉素A：它是由链霉素分离出的抗生素，有干扰细胞色素还原酶中电子从细胞色素bH的传递作用，从而抑制电子从还原型QH2向cytC1的传递作用。（3）氰化物（CN-）、叠氮化物（N3-）、一氧化碳（CO）等：其作用是阻断电子在细胞色素氧化酶中传递，即阻断了电子由cytaa3向分子氧的传递。

第58页/共104页鱼藤酮安密妥杀粉蝶菌素抗霉素A氰化物一氧化碳硫化氢叠氮化合物呼吸链的电子传递抑制剂图示第59页/共104页第三节氧化磷酸化一、氧化磷酸化的概念二、氧化磷酸化的作用机制三、质子梯度的形成四、ATP合成机制五、氧化磷酸化的解偶联和抑制六、线粒体穿梭系统参见P216第60页/共104页一、氧化磷酸化的概念

概念

伴随电子从底物到氧的传递，ADP被磷酸化形成ATP的酶促过程即是氧化磷酸化作用。

根据生物氧化方式，可将氧化磷酸化分为底物水平磷酸化电子传递体系磷酸化。

第61页/共104页底物水平磷酸化：

ATP的形成直接由一个代谢中间产物（如磷酸烯醇式丙酮酸）上的磷酸基团转移到ADP分子上的作用。电子传递体系磷酸化：是指当电子从NADH或FADH2经过电子传递体系(呼吸链)传递给氧形成水时，同时伴有ADP磷酸化为ATP的全过程。通常所说的氧化磷酸化是指电子传递体系磷酸化。第62页/共104页二、氧化磷酸化的作用机制

1ATP产生的数量

研究氧化磷酸化最常用的方法是测定线粒体或其制剂的P/O比值和电化学实验。

P/O比值:是指每消耗一摩尔氧所消耗无机磷酸的摩尔数。根据所消耗的无机磷酸摩尔数，可间接测出ATP生成量。又可以看作是当一对电子通过呼吸链传至O2所产生的ATP分子数。实验表明：NADH呼吸链的P/O值是2.5，即每消耗一摩尔氧原子就可形成2.5摩尔ATP，FADH2呼吸链的P/O值是1.5，即消耗一摩尔氧原子可形成1.5摩尔ATP。第63页/共104页2ATP产生的部位

ATP产生的部位都是有大的电位差变化的地方，例如，NADH呼吸链生成ATP的三个部位是：E0'值在此三个部位有大的“跳动”，都在0.2伏以上。第64页/共104页第65页/共104页0.42V0.18V0.53V第66页/共104页3能量偶联假说氧化与磷酸化作用如何偶联尚不够清楚，目前主要有三个学说：化学耦联学说构象耦联学说化学渗透学说第67页/共104页(1)化学偶联假说（1953）

认为电子传递过程产生一种活泼的高能共价中间物。它随后的裂解驱动氧化磷酸化作用。至今未找到高能共价中间物。(2)构象偶联假说（1964）

认为电子沿电子传递传递使线粒体内膜蛋白质组分发生了构象变化，形成一种高能形式。这种高能形式通过ATP的合成而恢复其原来的构象。该学说可以解释ATP生成的机制。第68页/共104页(3)化学渗透学说（1961）认为电子传递释放出的自由能和ATP合成是与一种跨线粒体的质子梯度相偶联的。呼吸链存在于线粒体内膜之上，当氧化进行时，呼吸链起质子泵作用，质子被泵出线粒体内膜之外侧，造成了膜内外两侧间跨膜的化学电位差，后者被膜上ATP合成酶所利用，使ADP与Pi合成ATP。该学说未能解决H+被泵到膜外的机制和ATP生成的机制1.递H体与递e体交替排列2.递H体有H泵作用，将2H+泵出内膜，2e传给递电子体，整个过程共泵出3对H+3.线粒体膜对H+不通透，造成H+跨膜梯度4.H+通过ATP酶回流，生成ATP第69页/共104页质子的流向第70页/共104页电子的流向第71页/共104页ADP+PATP化学渗透假说示意图第72页/共104页化学渗透假说第73页/共104页化学渗透假说详细示意图第74页/共104页第75页/共104页第76页/共104页第77页/共104页三、质子梯度的形成

电子传递使复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ推动H+跨过线粒体内膜到线粒体的间隙，线粒体间隙与细胞溶胶相接触。H+跨膜流动的结果造成线粒体内膜内部基质的H+离子浓度低于间隙。线粒体基质形成负电势，而间隙形成正电势，这样产生的电化学梯度即电动势称为质子动势或质子动力势。其中蕴藏着自由能即是ATP合成的动力。第78页/共104页第79页/共104页质子转移的机制有两种假设

质子传递链的4种电子传递复合体中的3种复合体都和质子转移有密切关系。质子主动转移和电子传递产生的自由能相偶联的机制当前存在两种假说：氧化—还原回路机制质子泵机制第80页/共104页四、ATP合成机制

ATP的合成是由一个酶的复合体系完成的。这个复合体系称为ATP合酶由两个主要的单元构成。起质子通道作用的单元称为Fo单元和催化ATP合成的单元称为F1单元。因此，ATP合酶又称为FoF1—ATP酶第81页/共104页ATP合酶

在分离得到四种呼吸链复合体的同时还可得到复合体Ⅴ，即ATP合酶。该酶主要由Fo（疏水部分）和F1（亲水部分）组成。F1在线粒体内膜的基质侧形成颗粒状突起。它主要由α3β3γδε亚基组成，其功能是催化生成ATP;催化部位在β亚基中，但β亚基必须与α亚基结合才有活性。Fo镶嵌在线粒体内膜中。它由a1b2c9-12亚基组成。c亚基形成环状结构，a亚基位于环外侧，与c亚基之间形成质子通道。Fo与F1之间，其中心部位由γε亚基相连，外侧由b2和δ亚基相连，F1中的α3β3

亚基间隔排列形成六聚体，部分γ亚基插入六聚体中央。第82页/共104页ATP合酶结构示意图第83页/共104页第84页/共104页第85页/共104页第86页/共104页第87页/共104页FoF1侧视图第88页/共104页第89页/共104页第90页/共104页

由于3个β亚基与γ亚基插入部分的不同部位相互作用，使每个β形成不同构象。当H+顺浓度递度经Fo中a亚基和c亚基之间回流时，γ亚基发生旋转，3个β亚基的构象发生改变。紧密结合型（T）β亚基变成开放型（O），释放ATP；ADP和Pi与疏松型（L）β亚基相结合；与紧密型β亚基结合的ADP和Pi生成ATP.因此，ATP在紧密结合型β亚基中生成，在开放型中被释放。化学计算估计每生成1分子ATP需3个H+从线粒体内膜外侧回流进入基质中。ATP合酶的工作机制第91页/共104页ATP合酶的工作机制3个β亚基构象不同

O开放型；T紧密结合型；L疏松型第92页/共104页五、氧化磷酸化的解偶联和抑制(自学)

不同的化学因素对氧化磷酸化过程的影响不同，根据它们不同的影响方式可分为三大类：1.解偶联剂：

使电子传递与ADP磷酸化两个过程分开，失掉它们的紧密联系。它只抑制ATP的形成，不抑制电子传递过程，使电子传递产生的自由能都变成热能。因为这种试剂使电子传递失去正常的控制，亦即不能形成离子梯度。造成过分地利用氧和燃料底物而能量得不到贮