实验水中细菌总数的测定

实验水中细菌总数的测定第1页，共13页，2023年，2月20日，星期六一、目的要求

1．学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。

2．了解水的平板菌落计数的原则。第2页，共13页，2023年，2月20日，星期六二、基本原理生活用水的水源常被生活污水、工业废水以及人畜粪便所污染。腐生性微生物对人无害，而病源性微生物则能引起传染病甚至流行病，如霍乱、伤寒、细菌性痢疾和阿米巴性痢疾以及脊髓灰质炎和传染性肝炎等病毒性疾病。第3页，共13页，2023年，2月20日，星期六二、基本原理水中的细菌总数越多，说明水中有机物的含量就越高，水体被有机物污染的程度越重。水中细菌的种属繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中的细菌的总数实际上是一种近似值。肠道中的绝大多数腐生性和致病性的细菌，可在牛肉膏蛋白胨培养基上进行生长。因此应用平板菌落计数技术来测定水样中的细菌总数基本上能代表水样中细菌的数量。第4页，共13页，2023年，2月20日，星期六水中细菌总数的测定和计算在牛肉膏蛋白胨培养基上，1ml水样，经37℃，24h培养后所生长出来的总菌数。

我国饮用水的卫生学指标：在1ml自来水中细菌总数不得超过100个。第5页，共13页，2023年，2月20日，星期六三、器材

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管等。第6页，共13页，2023年，2月20日，星期六四、操作步骤1．水样的采取（1）自来水先将自来水龙头用消毒处理，再开放水龙头使水流一定量后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。（2）池水、河水或湖水应取距水面10-15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。第7页，共13页，2023年，2月20日，星期六2．细菌总数测定（1）自来水（每个小组做两个平板）（a）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。（b）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。（c）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。第8页，共13页，2023年，2月20日，星期六（2）池水、河水或湖水等（a）取加入9ml水的灭菌试管。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10-1、10-2与10-3。稀释倍数以培养后平板的菌落数在30—300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秽水样，取10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，污秽严重的取10-2、10-3、10-4三个连续稀释度。（b）自最后三个稀释度的试管中各取1ml稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。（c）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的培养基，立即放在桌上混匀。（d）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。第9页，共13页，2023年，2月20日，星期六3．菌落计数方法（1）先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个培养皿有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的培养皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到培养皿的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全培养皿的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。第10页，共13页，2023年，2月20日，星期六（2）首先选择平均菌落数在30—300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表ⅪⅤ-1，例1）。第11页，共13页，2023年，2月20日，星期六（4）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例4）。（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见表ⅪⅤ-1，例5）。（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍