粗蛋白质测定

粗蛋白质测定第1页/共19页（2）加入催化剂：硫酸钾6g，硫酸铜0.4g。A、在普通天平上称硫酸钾6gB、在普通天平上称硫酸铜0.4gC、已称好样本和催化剂的消化管注：蔗糖可在普通天平上称重(0.5g)第2页/共19页（3）加入浓硫酸12ml,于420℃下在消煮炉上消化，直至呈透明的蓝绿色，再继续加热至少0.5h。消化过程颜色变化：黑色→黑褐色→红褐色→黄绿色→蓝绿色（终点颜色）第3页/共19页消煮过程会产生大量二氧化硫，需在通风橱内进行消煮

第4页/共19页2、氨的蒸馏（1）、半微量蒸馏法蒸汽发生器反应室↖图示：半微量水蒸汽蒸馏仪蒸气发生器反应室冷凝管第5页/共19页（2）、常量蒸馏法（下面是国产半自动定氮仪的蒸馏过程）A、放入消化管B、加入过量的碱，使消化液变黑；此时锥形瓶中的硼酸为暗红色。C、硼酸吸收氨后变蓝绿色D、使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min。第6页/共19页（3）蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按氨的蒸馏步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.19±0.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。第7页/共19页3、滴定

蒸馏后的吸收液立即用盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。A、终点颜色过红B、未滴定盐酸前的颜色C、终点颜色较好第8页/共19页三、空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按二操作步骤进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2ml。消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3ml。第9页/共19页四、测定结果的计算1、半微量蒸馏法粗蛋白质（%）= ——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；

——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；

c ——盐酸标准溶液浓度，mol/L m ——试样质量，g；

V ——试样分解液总体积，mL；

——试样分解液蒸馏用体积，mL；2、常量蒸馏法粗蛋白质（%）=

第10页/共19页五、2300型自动定氮仪的操作方法1、试样的消煮（与半自动定氮仪相同）2、氨的蒸馏和滴定由定氮仪自动完成。第11页/共19页一、准备工作1、检查各试剂桶的试剂是否适量，打开冷凝水龙头。2、安放空消化管到仪器上，关上安全门，打开电源开关，待仪器自检（此时不能操作任何按键）完毕，进入手动操作菜单。分析程序键设置程序键手动按键打印按键按手动键后，仪器进入手动操作菜单。第12页/共19页3、选择添加吸收液菜单项，确认（回车）3~5次，观察排除的吸收液颜色稳定。

4、检查滴定系统，如有气泡，选择滴定菜单项，排气泡；如无气泡，选择蒸馏菜单项，确认，2~4min后，停止蒸馏（预热）排气泡添加吸收液第13页/共19页5、按分析程序键进入分析工作菜单（必要时修改设置程序后再进入分析菜单）。

6、选择合适的分析程序，选择BLANK结果输出，做空白测定。

7、测定取得连续3个稳定的空白值。

8、转到结果菜单单项，选择合适的测定结果输出（注：一般可先做回收率测定）分析程序设置程序选择空白测定做回收率测定第14页/共19页二、测定工作

1、开始样品的测定程序，在仪器上选定分析程序，并输入样品质量。

例如：选粗蛋白质，并输入样品质量例如：选KJELDAHL1程序第15页/共19页2、消化好的样品，放在消化管架上。待仪器处于准备测样状态（READY），把消化好的样品消化管装上仪器，关上安全门，仪器自动进行蒸馏滴定。

3、等待3~4min后，仪器分析完毕，显示“READY”，打开安全门。第16页/共19页4、取出分析完的消化管，放回消化管架。5、输入样品质量（最好在上一个样品蒸馏过程中输入,以节省测定时间）装上新消化管，重复2~4步操作，待全部样品分析完毕，准备关机。6、设定清洗程序，取空消化管上机，关上安全门。7、清洗几分钟后，取出消化管，关断电源，做日常清洁保养。8、使用该仪器时必须注意：（1）每次开机后，必须把管道中的气泡排除完毕后，才能进行样品测定，否则可能造成测定结果不准确，甚至测定失败。（2）关安全门之前，必须确认样品质量已输入面板上，消化管顶部与蒸馏头密封，不漏气。（3）碱桶、吸收液桶、蒸馏水桶要保持有一定量的液体（最少约1/5桶），否则应及时补充。（4）本仪器是贵重仪器，未经本实验室老师培训，不得擅自开机。第17页/共19页滴定缸↙六、讨论1、消煮时应注意的问