尿液化学检验专家讲座

尿液化学检验

上海交通大学医学院从属第三人民医院检验科陈华云Chemicalexaminationofurine尿液化学检验第1页2.pH试纸法:1.试带法:模块有甲基红(pH4.6-6.2),溴麝香草酚蓝(pH6.0-7.6).变色范围：黄5.0-绿7.0-蓝9.0，仪器或肉眼判读各种混合指示剂(棕红色-深黑色),与标准色板比较。（一）测定原理一、尿酸碱度测定（urineacidity）尿液化学检验第2页3.指示剂法:5.pH计法:4.滴定法:0.4g/L溴麝香草酚蓝→滴于尿液→黄-酸性,绿-中性,蓝-碱性.受黄疸尿及血尿影响.pH电极.准确度较高,需仪器,烦琐,少用.标准NaOH滴定,测总酸度.复杂,少用（一）测定原理一、尿酸碱度测定（urineacidity）尿液化学检验第3页（二）尿酸度测定方法学评价方法评价试带法√配套应用于尿液分析仪，是当前满足临床对尿pH检验需要最广泛应用一个筛检方法pH试纸法操作简便，采取pH精密试纸可提升检测灵敏度，但试纸易吸潮而失效指示剂法溴麝香草酚蓝变色范围为pH6.0～7.6，当尿pH偏离此范围时，检测结果不准确；黄疸尿、血尿将直接影响结果判读滴定法可测定尿酸度总量。临床上用于尿酸度动态监测，但操作复杂pH计结果准确可靠,需特殊仪器，操作繁琐。可用于肾小管性酸中毒定位诊疗、分型、判别诊疗时尿pH准确测定尿液化学检验第4页标本新鲜;操作规范;试带保留;试剂配制标准;pH计校准.（三）质量确保一、尿酸碱度测定（urineacidity）尿液化学检验第5页正常饮食晨尿pH：5.5～6.5，平均6.0;随机尿pH：4.6～8.0；可滴定酸度：20～40mmol/24h尿（四）参考值一、尿酸碱度测定（urineacidity）尿液化学检验第6页(1)生理改变:①食物影响：蛋白类→酸性;果蔬类→碱性.碱潮:餐后胃酸↑,肾泌H+↓,Cl-重吸收↑→尿pH一过性↑.②生理活动：运动,饥饿,出汗,应急,夜间入睡呼吸变慢→体内酸性代谢产物↑→pH↓.（五）临床意义一、尿酸碱度测定（urineacidity）尿液化学检验第7页(2)病理改变:①酸性尿：酸中毒,高热,慢性肾炎,白血病,糖尿病酮症酸中毒,低钾血症,痛风②碱性尿：碱中毒,呕吐,尿路感染,Ⅱ型肾小管性酸中毒,原发性醛固酮增多症

一、尿酸碱度测定（urineacidity）（五）临床意义尿液化学检验第8页（3）药品影响：①NaHCO3,K2CO3,枸橼酸钠→碱化尿液→预防酸性结晶(尿酸及胱氨酸)形成;促进酸性药品排泄.②氯化钙(铵、钾)、稀盐酸→酸化尿液→预防碱性结晶(磷/碳/草酸钙)形成;促进碱性药品排泄;预防细菌生长.③溶血时口服NaHCO3碱化尿液→促进溶解及排泄Hb.一、尿酸碱度测定（urineacidity）（五）临床意义尿液化学检验第9页表5-6常见影响尿液pH原因影响原因尿酸性尿碱性食物肉类、高蛋白及混合食物（含硫、磷）蔬菜、水果（含钾、钠）生理活动猛烈运动、应激、饥饿、出汗用餐后碱潮药品氯化铵、氯化钾、氯化钙、稀盐酸等小苏打、碳酸钾、碳酸镁、枸橼酸钠、酵母、利尿剂等肾功效肾小球滤过增加而肾小管保碱能力正常肾小球滤过功效正常而肾小管保碱能力丧失尿液化学检验第10页表5-6常见影响尿液pH原因影响原因尿酸性尿碱性疾病①酸中毒、发烧、慢性肾小球肾炎。②代谢性疾病：如糖尿病、痛风、低血钾性碱中毒（肾小管分泌H＋增强，尿酸度增高）。③其它：如白血病、呼吸性酸中毒（因CO2潴留）。④尿酸盐或胱氨酸尿结石①碱中毒：如呼吸性碱中毒，丢失CO2过多。②严重呕吐（胃酸丢失过多）。③尿路感染：如膀胱炎、肾盂肾炎、变形杆菌性尿路感染（细菌分解尿素产生氨）。④肾小管性酸中毒：肾小球虽滤过正常，但远曲小管形成氨和H＋交换功效受损，肾小管泌H＋、排H＋及H＋-Na＋交换能力减低，机体显著酸中毒，尿pH呈相对偏碱性。⑤草酸盐或磷酸盐或碳酸盐尿结石其它尿液含酸性磷酸盐尿内混入多量脓、血、细菌尿液化学检验第11页二、尿液蛋白质检验

健康人尿液中蛋白含量极少，定性为阴性。尿液中蛋白质含量＞150mg/24h或尿中蛋白质浓度＞100mg/L蛋白定性为阳性，即

proteinuria.

1.蛋白尿(proteinuria,PRO)※(一)概述尿液化学检验第12页二、尿液蛋白质检验2.蛋白尿形成原因(1)肾小球滤过膜破坏或电荷屏障改变(2)肾小管重吸收障碍(3)溢出性(4)肾组织性(一)概述尿液化学检验第13页【原理】

指示剂蛋白质误差原理※溴酚蓝─→阴离子(1)干化学试带法【评价】

肉眼和仪器；对清蛋白灵敏(70-100mg/L)，与Hb/Mb/BJP基本不反应；简便快速，易标准化，应用普遍。健康普查、肾病筛查。pH3.2＋pro+→复合物(淡黄→绿色→兰色)(二)尿蛋白定性检验1.测定原理与评价尿液化学检验第14页表5-7试带法检测干扰原因及评价干扰原因评价标本原因尿pH＞9，可假阳性；尿pH＜3，可假阴性。最适尿pH5～6，故必要时可先调标本pH值。尿液新鲜。食物原因尿酸碱度与摄入食物有系，检验前1天应防止单一摄入过多肉类或蔬菜、水果，进食应均衡药品原因假阳性：服奎宁、奎宁丁、嘧啶等或尿中含聚乙烯、吡咯酮、洗必泰、磷酸盐、季胺盐消毒剂等，尿呈强碱（pH≥9.0）。假阴性：大剂量滴注青霉素或用庆大霉素、磺胺、含碘造影剂操作过程假阳性：试带浸渍时间过长，反应颜色变深。假阴性：试带浸渍时间过短反应不完全或浸渍时间过长膜块中试剂流失(二)尿蛋白定性检验尿液化学检验第15页【评价】

(2)磺基水杨酸法【原理】pro++磺基水杨酸根-→不溶性蛋白沉淀简便快速，灵敏度高0.05-0.1g/L；与清/球/本周蛋白反应；假阳性。干化学法参考方法，NCCLS推荐

确证试验。H+(二)尿蛋白定性检验1.测定原理与评价1尿2-3ml+试剂0.1ml，马上混匀，1min内观察结果.尿液化学检验第16页(2)磺基水杨酸法【干扰原因】

(二)尿蛋白定性检验1.测定原理与评价干扰因素假阳性①高浓度尿酸、尿酸盐、草酸盐②碘造影剂、大剂量青霉素③混入生殖系统分泌物假阴性pH>9或<3尿液化学检验第17页阴性(－)：不浑浊微量(±)：轻微浑浊，PRO约0.1-0.15g/L弱阳性(＋)：显著白雾状，PRO约0.2-0.5g/L阳性(2＋)：浑浊，显著颗粒，PRO约0.6-2.0g/L强阳性(3＋)：大量絮片沉淀，浑浊，PRO约2-5g/L最强阳性(4＋)：凝块，大量絮片沉淀，PRO＞5g/L(3)加热乙酸法【原理】加热→PRO变性凝固，加酸→pH靠近PRO等电点;溶解碱性盐类结晶.【评价】(二)尿蛋白定性检验特异性高，干扰少，灵敏度0.15g/L；与全部蛋白发生沉淀反应。经典准确、定性确证试验.※1.测定原理与评价尿液化学检验第18页(3)加热乙酸法【干扰原因】(二)尿蛋白定性检验※1.测定原理与评价干扰因素假阳性①混入生殖系统分泌物假阴性①pH>9或<3②无盐或低盐饮食者，测定前加入少许盐溶液定性：阴性2.参考值尿液化学检验第19页

干化学测定尿蛋白原理R-CHNH2COOHH+R-CHNH3+COOH+指示剂显色指示剂蛋白误差原理pH3.6(二)尿蛋白定性检验尿液化学检验第20页(1)检测前：患者正常饮食;(2)检测中：※

①室内质控；阳性及阴性对照。

②试带法：按规程操作，浸渍时间适宜；阴凉干燥；使用期。③加热乙酸法：盐类→浑浊→假阳性；遵照加热-加酸-再加热；5%乙酸为尿液1/10.④加热乙酸法和磺基水杨酸法：调尿液pH为5-6

3.质量确保(二)尿蛋白定性检验(3)检测后：汇报审核;结果与临床不符，分析原因尿液化学检验第21页(1)加热乙酸法：

①加酸要适当;②无盐或低盐饮食，先加1～2滴饱和NaCL;③PRO极少时，加酸后出现沉淀。(2)磺基水杨酸法：

①尿液浑浊，应先离心或过滤;

②强碱性尿加5%乙酸数滴;

③碘造影剂、青霉素及尿酸或尿酸盐→假阳性。(3)干化学法：①尿液新鲜②超大剂量青霉素→假阴性。3.质量控制(二)尿蛋白定性检验尿液化学检验第22页(1)沉淀法【原理】

pro+生物碱→沉淀物【评价】(三)

尿蛋白定量检验费时、准确性差，已淘汰H+1.测定方法与评价尿液化学检验第23页【评价】

(2)双缩脲比色法【原理】

钨酸沉淀蛋白质，双缩脲法定量。蛋白质定量经典方法。(三)尿蛋白定量检验1.测定方法与评价尿液化学检验第24页【原理】

(3)染料结正当【评价】

后两种灵敏高，简便快速，呈色稳定，干扰少，但易污染。第一个烦琐，沉淀不完全-影响结果。（1）丽春红S法：三氯乙酸和丽春红S+pro→离心沉淀→溶于碱比色（2）考马斯亮蓝法：G-250(红)+pro→兰色→595nm比色（3）邻苯三酚红钼酸络正当:邻苯三酚红+钼酸→红色化合物+PROH+H+(三)尿蛋白定量检验1.测定方法与评价蓝色（600nm比色）尿液化学检验第25页【原理】单克隆抗体技术(4)免疫法【评价】

定量：≤0.15g/24h＜0.1g/L灵敏度和特异性更高，临床普遍应用【原理】SDS、琼脂糖电泳(5)电泳法【评价】

灵敏度和特异性更高(三)尿蛋白定量检验1.测定方法与评价2.参考值尿液化学检验第26页(三)尿蛋白定量检验定量：≤0.15g/24h＜0.1g/L2.参考值尿液化学检验第27页(1)结合灵敏度和线性范围选择方法；

(2)离心取上清

(3)冷藏保留(4)更换试剂重做标准曲线3.质量控制(三)尿蛋白定量检验尿液化学检验第28页(1)生理性蛋白尿

功效性(2)病理性蛋白尿肾后性肾性肾小球性:肾小管性:混合性:溢出性:肾前性体位性偶然性:血、脓、粘液Albβ2、α1-MAlb、β2-MHb,Mb,BJPTH糖蛋白＜+；≤0.5g/24h；青少年++～+++，卧床后(-)；青少年(三)尿蛋白定量检验※4.临床意义组织性:尿液化学检验第29页蛋白尿选择性肾小球滤过膜损伤程度及尿中蛋白组分不一样:选择性蛋白尿：非选择性蛋白尿：MW4～9万,Alb,Tf;AT,前Alb.3+～4+;>3.5g/24h;肾病综合症.MW＞9万,Ig(G,A,M),C3；Alb,T-H.1+～4+;0.5～3.0g/24h.连续→肾衰；原/继发肾小球疾病.(三)尿蛋白定量检验尿液化学检验第30页肾小球性：肾小球肾炎+～++，极少＞+++；肾小管性：±～+，极少＞++.混合性性：肾病综合征≥+++.组织性：±～+，极少＞++.(三)尿蛋白定量检验尿液化学检验第31页三、尿液葡萄糖检验正常人尿内含糖量极少，0.56～5.0mmol/24h，定性试验阴性。※糖尿(glucosuria,GLU)血糖＞8.88mmol/L，＞肾糖阈值，或近端肾小管重吸收功效障碍时尿糖↑，定性试验阳性尿液.尿液化学检验第32页(1)试带法【原理】※葡萄糖+H2O

葡萄糖氧化酶

葡萄糖酸内酯+H2O2

H2O2+色素原

过氧化物酶

有色物质+H2O（glucoseoxidase-peroxidasemethod）【评价】特异性强,灵敏度高(1.67～2.78mmol/L→弱阳性),简便快速,自动分析.1.测定方法与评价(一)尿糖定性检验尿液化学检验第33页(1)干化学试带法【干扰原因】葡萄糖氧化酶试带法1.测定方法与评价(一)尿糖定性检验标本原因假阳性：容器残留强氧化剂.假阴性：标本放置过久,高SG尿,尿酮体>0.4g/L.药品原因假阴性：VitC、左旋多巴.尿液化学检验第34页(2)班氏法(Benedict法)【原理】

Cu2+→Cu+

兰色

黄色至砖红色.【评价】缺乏特异性,灵敏度低(8.33mmol/L→弱阳性)-CHO△,OH－1.测定方法与评价班氏试剂1ml,煮沸不变色+尿2滴→煮沸1-2min→冷却后观察.(一)尿糖定性检验尿液化学检验第35页(2)班氏法(Benedict法)【干扰原因】1.测定方法与评价(一)尿糖定性检验标本原因假阳性：还原性糖假阴性：①大量铵盐，预先加碱煮沸去氨后再检验；②PRO＞0.5g/L,加热乙酸法去蛋白取滤液检验;药品原因假阳性：VitC,青/链霉素,头孢菌素,异烟肼,水杨酸盐,氨苄西林尿液化学检验第36页(3)薄层层析法(thin-layerchromatography,TLC)【评价】判别、确证尿糖种类特异、灵敏方法；操作烦琐，极少应用。(一)尿糖定性检验1.测定方法与评价【原理】吸附剂作固定相；有机溶剂作流动相；两相间作相对移动。各组分→流动相→固定相→重复吸附-解析-亲和作用→展开→分离。比移值（Rf）=斑点距离/溶剂距离尿液化学检验第37页假阳性多尿液化学检验第38页(1)检验前：(2)检测中：①容器清洁，不含氧化性物质；一次性尿杯.②消除VitC干扰：尿液煮沸几分钟.(3)检测后：①汇报审核,结果不符查找原因;②与临床沟通.2.质量控制(一)尿糖定性检验①室内质控.②试带法注意反应时间和温度;阴凉干燥,保质期.班式法恪守操作规程,注意判读时间.定性：阴性3.参考值尿液化学检验第39页(1)检验前质量控制(2)试带法：①试带避光干燥保留；②VitC,高SG尿,酮尿,左旋多巴→假阴性;③尿液污染过氧化物或次氯酸盐→假阳性.(3)班氏法：①VitC,青/链霉素,头孢菌素水杨酸盐,氨苄西林→假阳性；②大量铵盐，预先加碱煮沸去氨后再检验；③PRO＞0.5g/L,加热乙酸法去蛋白取滤液检验;④大量尿酸盐→绿色浑浊→灰蓝色;

2.质量控制(一)尿糖定性检验尿液化学检验第40页【测定方法】葡萄糖氧化酶法,己糖激酶法(二)尿糖定量检验【评价】测血糖方法。药品和尿液中自然物质对己糖激酶法几乎无干扰；对葡萄糖氧化酶法有不一样程度干扰。2.参考值：0.56～5.0mmol/L1.测定方法与评价尿液化学检验第41页非葡萄糖尿葡萄糖尿血糖增高性糖尿血糖正常性糖尿-肾性糖尿病-代谢性内分泌性糖尿饮食性糖尿应激性糖尿饥饿-糖耐量糖尿糖尿乳糖尿：半乳糖尿果糖尿肝功障碍哺乳期※

(三)临床意义暂时性尿液化学检验第42页(胰岛素分泌不足)饥饿-糖耐量糖尿：见于晚期食道肿瘤、低营养状态和妊娠剧吐者做糖耐量试验。尿液化学检验第43页表5-10内分泌性糖尿常见原因及检验结果疾病原因检验结果甲状腺功效亢进甲状腺素分泌过多，食欲亢进、肠壁血流加速，葡萄糖吸收率增加餐后血糖增高，餐后尿糖阳性空腹血糖、餐后2h血糖正常垂体前叶功效亢进生长激素分泌过多,反抗胰岛素作用血糖增高,尿糖阳性嗜铬细胞瘤肾上腺素、去甲肾上腺素大量分泌，肝糖原降解为葡萄糖加速血糖增高,尿糖阳性Cushing综合征糖皮质激素大量分泌,糖原异生作用旺盛,葡萄糖磷酸激酶和反抗胰岛素作用受抑制血糖增高,尿糖阳性尿液化学检验第44页表5-11血糖正常性糖尿常见原因及检验结果疾病原因检验结果家族性糖尿先天性近曲小管对糖重吸收功效缺损（<5.51mmol/L或1g/L）见于Fanconi综合症.空腹血糖、糖耐量试验正常；空腹尿糖阳性新生儿糖尿肾小管对葡萄糖重吸收功效不完善空腹血糖、糖耐量试验正常；尿糖阳性妊娠或哺乳期细胞外液容量增高，肾滤过率增高而近曲小管重吸收能力受抑制，肾糖阈减低空腹血糖、糖耐量试验正常；尿糖阳性后天取得性肾性糖尿：慢性肾盂肾炎、药品中毒、肾病综合症尿液化学检验第45页血糖起源与去路单糖转化尿液化学检验第46页四、尿液酮体定性检验β-羟丁酸78%乙酰乙酸20%丙酮2%脑心脏肌肉1.酮体(ketonebodies,KET)尿酮体定性为阳性，即ketonuria.正常血浆含量2～4mg/L正常24h尿含量:乙酰乙酸＜25mg,

β-羟丁酸＜9mg,丙酮＜3mg尿液化学检验第47页(2)乙酰乙酸测定法(Gerhardt法)※

2.检测原理四、尿液酮体定性检验+亚硝基铁氰化钠→紫色化合物丙酮乙酰乙酸OH－(1)亚硝基铁氰化钠法乙酰乙酸+氯化高铁→乙酰乙酸铁

(赭/酒红色)

尿液化学检验第48页表5-12基于亚硝基铁氰化钠尿酮体检测方法方法类别检测过程试带法含甘氨酸、碱缓冲剂、亚硝基铁氰化钠。在碱性条件下，后者与尿乙酰乙酸、丙酮起紫色反应。朗格法尿中先加固体亚硝基铁氰化钠后,后加少许冰乙酸,反复振荡使其溶解、混匀，再沿管壁渐渐加入氢氧化铵液，尿中丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠反应，在与氨接触面上形成紫色环。Rothera法尿中加50%乙酸溶液,再加200g/L亚硝基铁氰化钠溶液,混匀,沿管壁渐渐加入浓氢氧化铵溶液,尿中丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠反应，尿液表面出现紫色环改良Rothera法又称酮体粉法，将亚硝基铁氰化钠、硫酸铵、无水碳酸钠混合研磨成粉。在碱性条件下，丙酮或乙酰乙酸与亚硝基铁氰化钠和硫酸铵作用，生成紫色化合物。片剂法含甘氨酸（与丙酮反应）和其它物质，可检测尿液、血清、血浆或全血酮体。于片剂上加尿1滴,片剂呈色在要求时间内与标准色板进行比色。尿液化学检验第49页3.方法学评价四、尿液酮体定性检验片剂法本法对乙酰乙酸灵敏度50～100mg/L，丙酮为200～250mg/L

Rothera法本法对乙酰乙酸灵敏度10～50mg/L，丙酮为100～250mg/L

Gerhardt法本法对乙酰乙酸灵敏度250～700mg/L尿液化学检验第50页表5-13尿酮体不一样检测方法灵敏度比较化学成份朗格法Rothera法改良Roth-era法片剂法试带法Gerhardt法乙酰乙酸（mg/L）5010～508050～l0050～l00250～700丙酮（mg/L）200100～2501000200～250400～700不反应β-羟丁酸（mg/L）不反应不反应不反应不反应不反应不反应3.方法学评价【灵敏度】四、尿液酮体定性检验尿液化学检验第51页【干扰原因】假阳性较多肌酐、肌酸，高色素尿，酞、苯丙酮、左旋多巴代谢物假阴性标本搜集和保留不妥；亚硝基铁氰化钠对温度、热度或光线很灵敏；试带受潮失活。3.方法学评价四、尿液酮体定性检验尿液化学检验第52页(1)检测前：标本新鲜,及时检测；密闭冷藏/冷冻(2)检测中：①阴阳对照；②加入少许冰乙酸预防肌酐、肌酸过多引发假阳性③试带阴凉干燥，保质期。4.质量确保四、尿液酮体定性检验(3)检测后：①注意方法灵敏度.

②不一样病程酮体成份影响.尿液化学检验第53页(1)早期诊疗：糖尿病酮症酸中毒昏迷四、尿液酮体定性检验※

5.临床意义酮体阳性见于:判别:①低血糖、心脑血管病酸中毒、高血糖渗透性糖尿病昏迷→酮体不增高.②糖尿病酮症者肾功效严重障碍而肾阈值↑→尿酮体↓-消失.②糖尿病酮症酸中毒缓解时,β-羟丁酸→乙酰乙酸,分析结果时必须亲密结合临床.(2)治疗监测:①糖尿病酮症酸中毒早期主要为β-羟丁酸;测定血β-羟丁酸有利于早期诊疗.※

5.临床意义酮体阳性见于:四、尿液酮体定性检验※

5.临床意义酮体阳性见于:尿液化学检验第54页四、尿液酮体定性检验※

5.临床意义酮体阳性见于:(5)药品影响：降糖药抑制细胞呼吸作用(3)非糖尿病性酮症：感染、严重呕吐腹泻、长久饥饿、禁食、子痫(4)中毒:氯仿、乙醚、磷中毒尿液化学检验第55页五、尿液胆红素(BIL)定性检验1.胆红素代谢Y蛋白胆红素-Y蛋白胆红素胆红素葡萄糖酸酯(结合胆红素)UDP-GuUDP20%尿液化学检验第56页尿液化学检验第57页(2)

氧化法(1)试带法（重氮法）胆红素+二氯苯胺重氮盐-→紫红色偶氮化合物强酸胆红素+氯化钡→沉淀+三氯化铁→胆青/绿/黄素

(蓝/黄绿色)H+2.检测原理※五、尿液胆红素定性检验①Harrison法②Smith碘环法胆红素+碘→胆绿素(绿色)（接触面）尿液化学检验第58页(1)试带法：简单，分析仪，定性筛检2,4-二氯苯胺试带灵敏度5-10mg/L二氯重氮氟化硼酸盐试带灵敏度2-5mg/L3.方法学评价五、尿液胆红素定性检验【干扰原因】假阳性大量氯丙嗪治疗，尿含有盐酸苯偶氮吡啶代谢产物假阴性标本保留不妥，BIL遇光分解；高VitC和亚硝酸盐抑制偶氮反应尿液化学检验第59页②Harrison法:烦琐,灵敏度高(0.9umol/L)/0.5mg/L3.方法学评价五、尿液胆红素定性检验(2)

氧化法:①Smith碘环法:简便,灵敏度低(17.1umol/L)，少用【干扰原因】假阳性水杨酸、阿司匹林、牛黄→紫红色→干扰Harrison法.假阴性标本保留不妥（未避光）尿液化学检验第60页(1)检测前：标本新鲜,棕色瓶避光保留.(2)检测中：

①试带避光干燥；规范，高低质控，定检。

②Harrison法:加入FeCl3后未见足够钡盐沉淀,可加适量硫酸铵。

五、尿液胆红素定性检验4.质量控制※5.参考值(3)检测后：试带法定性，可疑用Harrison法验证阴性尿液化学检验第61页

(1)肝细胞性黄疸(2)梗阻性黄疸hepatocellularjaundiceobstructjaundice(3)溶血性黄疸hemolyticjaundice(+)(++)(-)五、尿液胆红素定性检验6.临床意义黄疸诊疗与判别诊疗尿液化学检验第62页六、尿胆原和尿胆素定性检验※(1)改良Ehrlich法(湿化学法)

(2)干化学试带法尿胆原+对二甲氨基苯甲醛→樱红色化合物

①Ehrlich醛反应※②尿胆原+重氮化合物→红色化合物1.尿胆原(URO)测定方法H+Urobilinogen,URO/UBG＋＋＋

马上呈深红色＋＋

放置10min呈樱红色＋

放置10min呈微红色－

放置10分钟后不显色尿液化学检验第63页2.尿胆素(urobilin)测定方法无胆红素尿液+碘液尿胆原尿胆素Zn2++

复合物(绿色荧光)六、尿胆原和尿胆素定性检验※

Schleisinger法:氧化尿液化学检验第64页

(1)试带法：改良Ehrlich法：简单快速，分析仪，定性或定量；不一样试带灵敏度不一样（1-4mg/L）。偶氮反应试带不受胆红素影响，对尿胆原特异。(2)尿胆素最低检出量为0.05mg/L。3.方法学评价六、尿胆原和尿胆素定性检验尿液化学检验第65页干扰原因评价标本原因标本久置，尿胆原氧化为尿胆素。药品原因假阳性：吩噻嗪类、氯丙嗪类、磺胺类、普鲁卡因假阴性：大量VitC、长久服用广谱抗生素。内源性物质假阳性：卟胆原、吲哚、胆红素→红色。

【干扰原因】Ehrlich醛反应偶氮法：尿甲醛>2g/L,亚硝酸盐>0.05g/L→灵敏度↓尿液化学检验第66页(1)检测前：标本新鲜,避光保留；口服NaHCO3碱化尿液,午餐后2-4h尿标本。(2)检测中:口服NaHCO3碱化尿液,先用乙酸调整为弱酸性.试带法:规范,高低室内质控,定检.阴凉干燥,密闭避光,使用期.※4.质量控制六、尿胆原和尿胆素定性检验(3)检测后：正确评价尿三胆;尿胆原阴性可疑→尿胆素定性验证.尿液化学检验第67页尿胆原：阴性或弱阳性；

1:20稀释阴性.尿胆素：阴性(1)判别黄疸种类.尿二胆正常溶血性黄疸肝细胞性黄疸阻塞性黄疸尿胆红素––+++尿胆原少许↑↑(++)↑(+)↓(-)(2)反应肝细胞损伤敏感指标.(3)长久便秘易使尿胆原阳性程度增加.六、尿胆原和尿胆素定性检验5.参考值6.临床意义尿液化学检验第68页表5-15不一样类型黄疸判别诊疗标本指标正常人溶血性黄疸肝细胞性黄疸梗阻性黄疸血清总胆红素正常增高增高增高

未结合胆红素正常增高增高正常/增高

结合胆红素正常增高/正常增高增高尿液颜色浅黄深黄深黄深黄

尿胆原1:20阴性强阳性阳性阴性

尿胆素阴性阳性阳性阴性

胆红素阴性阴性阳性阳性粪便颜色黄褐深色黄褐/变浅变浅/白陶土色

粪胆素正常增高减低/正常减低/消失尿液化学检验第69页尿液中Hb起源：①血管内溶血②尿路出血七、尿血红蛋白定性检验正常人血浆中游离Hb微量(50mg/L),与结合珠蛋白形成Hb-Hp复合物，在单核-巨噬细胞系统代谢，故尿中Hb极微。定性：阴性验证尿液潜在出血试验:隐血试验(occultbloodtest)1.概述尿液化学检验第70页(1)试带法(2)湿化学法(3)免疫法：单克隆抗体法利用胶体金标识抗人Hb单克隆抗体检测。2.测定方法原理相同※七、尿血红蛋白定性检验H2O2

───→亚铁血红素O邻甲苯胺─→邻甲偶氮苯(蓝色)尿液化学检验第71页HbY1-Hb-Y2Y1=胶体金标识抗人Hb单克隆抗体Y2=抗人Hb单克隆抗体Y3=羊抗鼠IgG抗体胶体金单克隆抗体法:尿液化学检验第72页(1)试带法：(2)湿化学法：(3)免疫法：试剂稳定性差,特异性较低,假阳性多.0.3-0.6mg/L简便快速,灵敏度高(0.15-0.3mg/L),影响多,筛检.简便,灵敏度高(0.2mg/L),特异性强，验证3.方法学评价七、尿血红蛋白定性检验尿液化学检验第73页3.方法学评价七、尿血红蛋白定性检验方法干扰原因试带法假阳性：热不稳定酶、氧化剂污染、尿路感染假阴性：大量VitC、甲醛、亚硝酸盐，还原剂化学法假阳性：热不稳定酶及过氧化物酶，铁剂、硝酸、铜锌、碘化物免疫法不受鸡牛猪羊兔Hb(500ug/ml)、辣根过氧化物酶(200ug/ml)干扰.【干扰原因】尿液化学检验第74页阴性(1)检测前：标本新鲜,煮沸2分→破坏WBC过氧化物酶和其它对热不稳定酶.(2)检测中：高低室内质控，阳性对照；3%H2O2或试带验证所用试剂使用期和可靠性。※4.质量控制5.参考值七、尿血红蛋白定性检验(3)检测后：审核，沟通，验证。尿液化学检验第75页(2)辅助诊疗泌尿系统疾病.(1)辅助诊疗肾前性溶血性疾病.各种血管内溶血性疾病:PNH,血型不合输血,AIHA,行军性Hb尿;各种病毒感染、疟疾;大面积烧伤、体外循环、术后所致RBC大量破坏.隐匿性肾炎尿中少许RBC破坏→隐血试验(＋);镜检时RBC少.6.临床意义七、尿血红蛋白定性检验尿液化学检验第76页八、亚硝酸盐(NIT)硝酸盐亚硝酸盐(nitrate)(nitrite)硝酸盐还原酶G—杆菌对氨基苯磺(砷)酸重氮盐＋a-萘胺偶氮化合物(红色)1.检测原理：亚硝酸盐还原法尿液化学检验第77页(1)亚硝酸盐检出率3个影响原因：①尿中G-杆菌要有硝酸盐还原酶;②尿潴留时间＞4h;③尿中有硝酸盐.八、亚硝酸盐(NIT)2.方法学评价(2)灵敏度：0.3-0.6mg/L(3)干扰原因尿液化学检验第78页表5-16亚硝酸盐检测干扰原因及评价因素评价标本高比重尿使试验灵敏度降低；假阳性：陈旧尿、偶氮剂污染尿食物尿中硝酸盐主要起源于正常饮食、体内蛋白质代谢、或由氨内源性合成。不能正常饮食患者，体内缺乏硝酸盐，即使有细菌感染，也可出现阴性致病菌常见致病菌：大肠杆菌属（致病率最高）、Klebs杆菌属、变形杆菌属、葡萄球菌属、假单胞菌属等。阳性：大肠埃希菌感染符合率约为80%。阴性：肠球菌属、粪链球菌属感染药物假阳性：非那吡啶假阴性：利尿剂、硝基呋喃、大量维生素C；尿停留膀胱内时间晨尿标本很好，尿在膀胱内停留时间长，细菌有充分作用时间，不然，试验呈假阴性尿液化学检验第79页(1)检测前：晨尿，尽快检测。八、亚硝酸盐(NIT)※3.质量控制(2)检测中：高低室内质控,定时阳性标本验证;试带干燥避光，使用期。(3)检测后：审核,结合LEU、镜检分析。阴性4.参考值尿液化学检验第80页快速筛检尿路感染NIT阳性:泌尿系统有细菌感染.(排除假阳性)NIT阴性:不能排除泌尿系统有细菌感染.八、亚硝酸盐(NIT)※5.临床意义NIT＋试带LEU＋镜检→准确诊疗.确证试验：尿细菌培养阳性尿液化学检验第81页九、白细胞(WBC,LEU)(leukocyte)1.检测原理：酯酶(esterase)法吲哚酚酯吲哚酚+有机酸粒细胞酯酶

+重氮盐↓重氮色素（紫红色缩合物）尿液化学检验第82页九、白细胞(WBC,LEU)2.方法学评价(1)灵敏度10～25个/ul或5～15个/HPF.特异性强：中性粒细胞.(2)【干扰原因】假阳性污染阴道分泌物、甲醛；高浓度BIL、非那吡啶、呋喃坦啶.假阴性WBC<10～25/μl,PRO＞5g/L,GLU≥30g/L;大量青霉素、先锋霉素Ⅳ、庆大霉素；VitC?尿pH<4.4时草酸过多尿液化学检验第83页九、白细胞(WBC,LEU)※3.质量控制(1)检测前：标本新鲜,久置后WBC破坏→试带法与镜检结果差异过大。(2)检测中：规范操作和质控。(3)检测后：审核,结合NIT、LEU、镜检分析，提升尿路感染诊疗可靠性。阴性4.参考值尿液化学检验第84页LEU阳性:泌尿系统感染.(排除假阳性)※5.临床意义LEU阳性＋镜检阴性→？

九、白细胞(WBC,LEU)诊疗泌尿系统感染。LUE阴性:镜检为淋巴细胞或单核细胞。见于肾移植排斥反应、泌尿系结核。中性粒细胞溶解，见于肾脏病人。尿液化学检验第85页十、维生素C(VitC或ASG)1.反应原理：甲基绿＋磷钼酸＋噻嗪化合物

＋VitC

钼蓝(蓝色→紫色)检测VitC用于提醒尿液OB、BIL、GLU、NIT及LEU检测结果是否准确，预防出现假阴性结果。(1)还原法(2)吲哚酚法尿液化学检验第86页2.方法学评价(1)灵敏度：50-100mg/L.特异性：只检测还原性抗坏血酸.(2)