第七讲质谱分析

第七讲质谱分析第1页，共56页，2023年，2月20日，星期三SpectrometryNOTSpectroscopySpectroscopyn.光谱学,波谱学,光谱仪Spectrometryn.质谱术，质谱计Spectrometry:SpectrometerAbbreviatedto:Massspec.orMS第2页，共56页，2023年，2月20日，星期三范围光区光谱类型跃迁类型10-4～10-2nm

-rayMossbauer谱核能级跃迁10-2～1nmX-rayX-光电子能谱核内层电子能级100～400nm

紫外光区紫外光谱核外层电子（价400～800nm可见光区可见光谱电子或非键电子)2.5～25m红外光区红外光谱分子振动-转动(4000～400cm-1)～1cm微波区微波谱分子转动能级

顺磁共振谱电子自旋能级

（磁诱导）50～500cm

射频区核磁共振谱核自旋能级(600～60MHz,无线电波区）（磁诱导）

光波与光谱的关系第3页，共56页，2023年，2月20日，星期三质谱例MSidentifiesanalytesby:ProducinggasphaseionsSeparatingtheseionsaccordingtom/zratioDetectingtheionsSensitive:Detectattomoleconcentrations第4页，共56页，2023年，2月20日，星期三1898

W.Wien

发现带正电荷的离子束在磁场中发生偏转。1910

J.J.Thompson

使用简单的电场-磁场组合装置,获得了抛物线族的质谱,证明了20Ne,22Ne两种同位素的存在。1918

A.J.Dempster

采用电子轰击技术使分子离子化。1919

F.W.Aston

制得了第一台速度聚焦质谱仪。提出每种同位素的质子和中子在结合成原子核时,具有特定的质量亏损(并非整数值)。1942

商品MS出现,用于石油精炼和橡胶工业。质谱发展史第5页，共56页，2023年，2月20日，星期三◆质谱不属波谱范围◆质谱图与电磁波的波长和分子内某种物理量的改变无关◆质谱是分子离子及碎片离子的质量与其相对强度的谱,谱图与分子结构有关◆质谱法进样量少,灵敏度高,分析速度快◆质谱是唯一可以给出分子量,确定分子式的方法,而分子式的确定对化合物的结构鉴定是至关重要的。

特点第6页，共56页，2023年，2月20日，星期三计算机数据处理系统真空系统加速区进样系统离子源质量分析器检测器

质谱计框图IonisationsourceIonseparationDetectorOutput第7页，共56页，2023年，2月20日，星期三离子源和质量分析器的压力在10–4~10–5Pa和10–5~10–6Pa。大量氧会烧坏离子源的灯丝；用作加速离子的几千伏高压会引起放电；引起额外的离子－分子反应，改变裂解模型，谱图复杂化。质谱计构造:真空系统第8页，共56页，2023年，2月20日，星期三在不破坏真空度的情况下，使样品进入离子源。气体可通过储气器进入离子源。易挥发的液体，在进样系统内汽化后进入离子源。难挥发的液体或固体样品，通过探针直接插入离子源。进样系统第9页，共56页，2023年，2月20日，星期三分子失去电子，生成带正电荷的分子离子

分子离子可进一步裂解，生成质量更小的碎片离子

M+eM+.+2eM-.小于1%M+.A+.++B+CD++.中性分子或碎片R.50-70eV离子源第10页，共56页，2023年，2月20日，星期三◆质量分析器是质谱计的核心◆不同类型的质量分析器构成不同类型的质谱计◆不同类型的质谱计其功能，应用范围，原理，

实验方法均有所不同。

质量分析器

第11页，共56页，2023年，2月20日，星期三检测记录系统质量分析器分离并加以聚焦的离子束，按m/z的大小依次通过狭缝，到达收集器。经接收放大后被记录。第12页，共56页，2023年，2月20日，星期三电子轰击电离ElectronImpactIonization,EI化学离子化ChemicalIonization,CI场电离，场解吸FieldIonizationFD,FieldDesorptionFD快原子轰击FastAtomBombardment,FAB基质辅助激光解析电离Matrix-AssistedLaserDesorptionIonization,MALDI电喷雾电离ElectrosprayIonization,ESI大气压化学电离AtmosphericPressureChemicalIonization,APCI离子化的方法第13页，共56页，2023年，2月20日，星期三++++:R1:R2:R3:R4:e+M+(M-R2)+(M-R3)+MassSpectrometer(M-R1)+电子轰击电离

ElectronImpact（EI）第14页，共56页，2023年，2月20日，星期三电子轰击电离又称为电子轰击，或电子电离。是应用最普遍，发展最成熟的电离方法。轰击电压50-70eV,有机分子的电离电位一般为7-15eV。可提供丰富的结构信息。有些化合物的分子离子不出现或很弱

电子轰击电离EI第15页，共56页，2023年，2月20日，星期三

离子室内的反应气（甲烷等；10~100Pa，样品的103~105倍），电子（100~240eV）轰击，产生离子，再与试样分离碰撞，产生准分子离子。最强峰为准分子离子；谱图简单；不适用难挥发试样；++气体分子试样分子+准分子离子电子(M+1)+;(M+17)+;(M+29)+;化学电离

（ChemicalIonization，CI）第16页，共56页，2023年，2月20日，星期三化学电离CI小分子如CH4,(CH3)2CH等。以CH4为例CH4+e→CH4+·+2e(46%)

CH3+(39%)

CH2+·(7%)初级离子:CH4+·,

CH3+,CH2+·CH4+·+CH4→CH5++CH3·(48%)CH3++CH4→C2H5++H2(41%)

CH2+·+2CH4→C3H5++2H2(6%)

······CH5+,C2H5+,C3H5+

等为稳定的次级离子。第17页，共56页，2023年，2月20日，星期三准分子离子[QM]+

M+CH5+→[MH]+

+CH4

M+C2H5+→[MH]++C2H4

M+C2H5+→[MH]++C2H6

第18页，共56页，2023年，2月20日，星期三场致电离FieldIonization

FieldDesorption（FI，FD）电压：7-10kV；d<1mm；强电场将分子中拉出一个电子；分子离子峰强；碎片离子峰少；不适合化合物结构鉴定；阳极+++++++++++++阴极d<1mm第19页，共56页，2023年，2月20日，星期三当样品蒸汽接近或接触带高正电位的金属针时，在强电场的作用下发生电离。要求样品分子处于气态，灵敏度不高，应用逐渐减少。场电离FI第20页，共56页，2023年，2月20日，星期三样品不需汽化,预先附在处理好的场离子发射体上,送入离子源,然后通以微弱电流,使样品分子从发射体上解吸下来,并扩散至高场强的场发射区,进行离子化。适用于难汽化,热不稳定的样品.如:糖类，肽类，金属有机化合物，聚合物等。场解吸FD

第21页，共56页，2023年，2月20日，星期三

惰性气体Ar或Xe的原子首先被电离并被加速，使之具有高的动能，在原子枪(atomgun)内进行电荷交换反应：

Ar+（高动能的）+Ar（热运动的）→Ar（高动能的）+Ar+（热运动的）高动能的Ar或Xe原子束再轰击样品分子使其离子化

快原子轰击

FastAtomBombardment（FAB）

第22页，共56页，2023年，2月20日，星期三FAB是目前广泛使用的软电离技术，适用于难汽化,极性强的大分子。样品用基质调节后黏附在靶物上。常用的基质有甘油，硫代甘油，3-硝基苄醇，三乙醇胺等。注意：FAB质谱图中会出现基质分子产生的相应的峰及基质分子与样品分子的结合峰。例如：3-硝基苄醇作为基质时，会出现m/z154(MH),136（MH–H2O）,289(MMH–H2O)的峰。第23页，共56页，2023年，2月20日，星期三

MALDI可使热敏感或不挥发的化合物由固相直接得到离子。待测物质的溶液与基质的溶液混合后蒸发，使分析物与基质成为晶体或半晶体，用一定波长的脉冲式激光进行照射时，基质分子能有效的吸收激光的能量，使基质分子和样品分子进入气相并得到电离。

MALDI适用于生物大分子，如肽类，核酸类化合物。可得到分子离子峰，无明显碎片峰。此电离方式特别适合于飞行时间质谱计。基质辅助激光解析电离

Matrix-AssistedLaserDesorptionIonization(MALDI)第24页，共56页，2023年，2月20日，星期三流出液在高电场下形成带电喷雾，在电场力作用下穿过气帘；气帘的作用：雾化；蒸发溶剂；阻止中性溶剂分子电喷雾电离（ESI）第25页，共56页，2023年，2月20日，星期三电喷雾电离电喷雾产生多电荷离子，相对分子质量Mr计算：选相邻峰，电荷n，n+1m1=(Mr+n)/2m2=(Mr+n+1)/(n+1)计算结果如表。不适用于非极性化合物第26页，共56页，2023年，2月20日，星期三EI与ESI第27页，共56页，2023年，2月20日，星期三质谱计的主要技术指标

质量范围：指质谱计所检测的单电荷离子的质核比范围分辨率（R）：分辨率是质谱计分开相邻两离子质量的能力。

分辨率（R）是两峰间的峰谷为峰高的10%时的测定值，即两峰各以5%的高度重叠。R=m/m

m为质谱计可分辨的相邻两峰的质量差m为可分辨的相邻两峰的平均质量第28页，共56页，2023年，2月20日，星期三Separateionsaccordingtom/zratioFivebasictypesofanalyser: 1) Magneticsector(electrostatic) 2) Quadrupole 3) Iontraps 4) Timeofflight

质量分析器

MassAnalysers第29页，共56页，2023年，2月20日，星期三MassAnalysers:

CalculationofResolution:RResolution=MassMassdifferenceR=M/DMM=M1»M2(500)DM=M2-M1(1)R=500/1=500第30页，共56页，2023年，2月20日，星期三质量分析器

磁分析器,静电分析器磁分析器-单聚焦质谱计只有一扇形磁场的质量分析器又称为磁分析器。加速后离子具有一定的动能:（），该动能是由离子在加速电场获得的电势能（zV）转化的。第31页，共56页，2023年，2月20日，星期三单聚焦磁场分析器收集器离子源BS1S2磁场R方向聚焦；相同质荷比，入射方向不同的离子会聚；分辨率不高第32页，共56页，2023年，2月20日，星期三双聚焦分析器离子源收集器磁场电场S1S2+-方向聚焦：

相同质荷比，入射方向不同的离子会聚；能量聚焦：

相同质荷比，速度(能量)不同的离子会聚；

质量相同，能量不同的离子通过电场和磁场时，均产生能量色散；两种作用大小相等，方向相反时互补实现双聚焦；第33页，共56页，2023年，2月20日，星期三③其他类型质量分析器双聚焦质谱仪体积大；色谱-质谱联用仪器的发展及仪器小型化（台式）需要；体积小的质量分析器：四极杆质量分析器飞行时间质量分析器离子阱质量分析器体积小，操作简单；分辨率中等；第34页，共56页，2023年，2月20日，星期三四极质量分析器–

四极质谱计

四极质谱结构简单，价廉，体积小，易操作，无磁滞现象，扫描速度快，适合于GC-MS,LC-MS。分辩率不高。+ElectronBeamABCSampleinIonBeam第35页，共56页，2023年，2月20日，星期三离子漂移管-飞行时间质谱计

（TimeofFlighMS,TOFMS）

TOFMS的核心部分是一个无场的离子漂移管

加速后的离子具有相同的动能

m/z小的离子，漂移运动的速度快，最先通过漂移管，到达检测器。

m/z大的离子，漂移运动的速度慢，最后通过漂移管，到达检测器。

检测通过漂移管的时间(t)及其相应的信号强度，可得到质谱图，t为或s数量级。

适合于生物大分子，灵敏度高，扫描速度快，结构简单，分辨率随m/z的增大而降低。第36页，共56页，2023年，2月20日，星期三傅立叶变换质谱计

FourierTransform–MassSpectrometer,FT-MS

傅立叶变换质谱计应该是傅立叶变换离子回旋共振质谱计，是受FT-NMR的启迪。利用不同m/z的离子，在磁场B的作用下，各自产生不同的回旋频率。若施加一射频场，使其频率等于某一m/z离子的回旋频率，则离子就会吸收能量而激发。离子从射频场吸收能量，称之离子的回旋共振。激发的离子运动速度(v)增大，运动轨道半径(r)增大，称之离子的回旋运动的激发。第37页，共56页，2023年，2月20日，星期三

如果磁场强度（B）一定，改变射频场的频率（）即可激发不同m/z的离子而得到质谱。

FT-MS的核心为分析室，分析室由三对平行的极板构成。磁力线沿z轴方向，离子的回旋运动垂直于z轴，在与x轴方向垂直的两极板上施加激发射频，在与y轴方向垂直的两极板上检测信号。

FT-MS分辨率极高，目前可得到精确度最高的精确质量。

FT-MS灵密度高，质量范围宽，速度快，性能可靠。

第38页，共56页，2023年，2月20日，星期三离子阱质量分析器特定m/z离子在阱内一定轨道上稳定旋转，改变端电极电压，不同m/z离子飞出阱到达检测器；第39页，共56页，2023年，2月20日，星期三LC-MS(离子阱)联用仪器结构示意图第40页，共56页，2023年，2月20日，星期三质谱术语

基峰:

RI100,RA

100

质荷比:

m/z,z=1,z=2;

m的计算：组成离子的各元素同位素的质子和中子之和。

精确质量:精确质量的计算基于天然丰度最大的同位素的精确原子量，如：

1H1.007825、12C12.000000、14N14.003074、16O15.994915·····精确度与质谱计的分辨率有关。

第41页，共56页，2023年，2月20日，星期三质谱图横坐标为离子的质核比，纵坐标为离子相对强度或相对丰度。乙醇的质谱图如下：第42页，共56页，2023年，2月20日，星期三分子离子:M+·,M-e→M+·

z=1时，其m/z等于天然丰度最大的同位素的原子量之和。碎片离子：广义上指除分子离子以外的所有离子。重排离子：经过重排，断裂一个以上化学键所生成的离子。母离子与子离子：任何一个离子进一步裂解为质荷比较小的离子，前者是后者的母离子或前体离子，后者是前者的子离子。质谱中的离子第43页，共56页，2023年，2月20日，星期三

奇电子离子OE+·：带单电荷的离子，如M+·,A+·,C+····在质谱解析中，奇电子离子很重要，因质荷比较小的奇电子离子是由质荷比较大的奇电子离子裂解生成的。偶电子离子EE+：带双电荷的离子，如B+,D+,E+,···

多电荷离子：如z=2的离子，存在于稳定的结构中。

准分子离子：[MH]+,[M-H]+同位素离子：非单一同位素的元素在电离过程中产生同位素离子，同位素离子构成同位素峰簇。第44页，共56页，2023年，2月20日，星期三亚稳离子

离子在离子源的运动时间106s数量级,寿命<106s的离子在离子源内进一步裂解。离子从离子源到达检测器的时间为105s数量级，离子寿命>105s，足以到达检测器。寿命106-105s的离子，从离子源出口到达检测器之前裂解并被记录的离子称亚稳离子，以m*表示.m*=m22/m1

亚稳离子的峰有不同程度的扩散，达2~3质量单位，这是因为m1+

裂解时，部分内能转化为动能。在质谱解析中，m*可提供前体离子和子离子之间的关系。第45页，共56页，2023年，2月20日，星期三分子离子或准分子离子峰

质谱中分子离子峰的识别及分子式的确定是至关重要的.分子离子峰的识别

■假定分子离子峰:高质荷比区,RI

较大的峰(注意：同位素峰)■判断其是否合理:与相邻碎片离子(m/z较小者)之间关系是否合理

Δm1231516171820丢失H·H2H2,HCH3OOHH2O

NH2

Δm=4-14,21-24,37-38·····通常认为是不合理丢失第46页，共56页，2023年，2月20日，星期三■判断其是否符合N律

不含N或含偶数N的有机分子,其分子离子峰的m/z为偶数。含奇数N的有机分子,其分子离子峰的m/z为奇数。◎使用CI电离时，可能出现M+H,MH,M+C2H5,M+C3H5…

◎使用FAB时，可出现M+H,MH,M+Na,M+K…

◎较高分子量的化合物，可能同时生成M+H,M+2H,M+3H等

第47页，共56页，2023年，2月20日，星期三分子离子峰的相对强度(RI)不同的电离方式,其分子离子的RI不等。不稳定的分子,大分子,其分子离子的RI较弱。稳定的分子,大共轭分子,其分子离子的RI较强。第48页，共56页，2023年，2月20日，星期三大约20%的分子离子峰弱或不出现.其大致规律如下:采用EI:芳香族化合物>共轭多烯>脂环化合物>低分子链烃,某些含硫化合物

羰基化合物(醛,酮,酸,酯,酰氯,酰胺)分子离子峰不出现或弱脂肪族醇类,胺类,硝基化合物等分子离子往往不出现第49页，共56页，2023年，2月20日，星期三分子离子峰不出现怎么办?改用其它离解方式,如:CI,FAB等

第50页，共56页，2023年，2月20日，星期三分子式的推导

利用低分辨质谱数据，推导分子式

同位素峰簇及其相对丰度

■对于C,H,N,O组成的化合物，其通式：CxHyNzOwRI(M+1)/RI(M)×100=1.1x+0.37y

(2H0.016,

17O0.04忽略)RI(M+2)/RI(M)×100=(1.1x）2/200+0.2w

第51页，共56页，2023年，2月20日，星期三■含硫的样品

32S:33S:34S=100:0.8:4.4RI(M+1)/RI(M)×100=1.1x+0.37y+0.8SRI(M+2)/RI(M)×100=（1.1x）2/200+0.2w+4.4S

■含Si的化合物

28Si:29Si:30Si=100:5.1:3.4

第52页，共56页，2023年，2月20日，星期三■含重同