第十四章维生素类药物的分析

第十四章维生素类药物的分析第1页，共99页，2023年，2月20日，星期三

VitA、D2、D3、E、K1

等脂溶性水溶性

VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、泛酸等。分类按溶解度分第2页，共99页，2023年，2月20日，星期三-H维生素A醇-COCH3维生素A醋酸酯-COC15H31维生素A棕榈酸酯R:第一节维生素A（一）结构第3页，共99页，2023年，2月20日，星期三为一个具有共轭多烯侧链的环己烯（二）性质结构与性质一、

具有UV吸收

存在多种立体异构化合物第4页，共99页，2023年，2月20日，星期三VitA2VitA3

易发生脱氢、脱水、聚合反应第5页，共99页，2023年，2月20日，星期三鲸醇第6页，共99页，2023年，2月20日，星期三△或有金属离子存在时氧化↑共轭多烯侧链易被氧化第7页，共99页，2023年，2月20日，星期三环氧化物VitA醛VitA酸第8页，共99页，2023年，2月20日，星期三三氯化锑反应（一）条件无水无醇CHCl3鉴别试验二、第9页，共99页，2023年，2月20日，星期三蓝色紫红第10页，共99页，2023年，2月20日，星期三λmax为326nm一个吸收峰UV法（二）λmax为350～390nm三个吸收峰第11页，共99页，2023年，2月20日，星期三去水VitA（VitA3）↓VitA第12页，共99页，2023年，2月20日，星期三第13页，共99页，2023年，2月20日，星期三USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值BP杂质对照品法显色剂三氯化锑TLC法（三）第14页，共99页，2023年，2月20日，星期三立体异构体氧化降解产物合成中间体UV法（一）含量测定三、维生素A2维生素A3环氧化物维生素A醛维生素A酸第15页，共99页，2023年，2月20日，星期三三点校正法（法定方法）1.原理：（1）杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；（2）物质对光的吸收具有加和性。第16页，共99页，2023年，2月20日，星期三2.波长的选择：（1）1

VitA的max（328nm）（2）23

分别在1的两侧各选一点第17页，共99页，2023年，2月20日，星期三测定对象VitA醋酸酯第一法等波长差法=12nm第18页，共99页，2023年，2月20日，星期三第二法等吸收比法测定对象VitA醇1=325nm,2=310nm,3=334nm第19页，共99页，2023年，2月20日，星期三测定法（1）基本步骤:第一步A的选择选择依据：所选A值中杂质的干扰已基本消除第20页，共99页，2023年，2月20日，星期三注意：

C为混合样品的浓度第二步求第21页，共99页，2023年，2月20日，星期三第三步求效价换算因数由纯品计算而得：第22页，共99页，2023年，2月20日，星期三第23页，共99页，2023年，2月20日，星期三第24页，共99页，2023年，2月20日，星期三第四步：求标示量％第25页，共99页，2023年，2月20日，星期三方法：（2）

第一法维生素A醋酸酯第26页，共99页，2023年，2月20日，星期三判断是否在326～329nm之间在326～329nm之间改用第二法是否求算并与规定值比较第27页，共99页，2023年，2月20日，星期三

规定值差值第28页，共99页，2023年，2月20日，星期三

判断差值是否超过规定值的有一个以上超过无超过

计算A328（校正）

用A328计算第29页，共99页，2023年，2月20日，星期三03%－15%－3%第二法第二法第30页，共99页，2023年，2月20日，星期三讨论VA醋酸酯的吸收度校正公式是用直线方程式法（即代数法）推导而来；VA醇的吸收度校正公式是用相似三角形法（几何法或称6/7定位法）推导而来。在应用三点校正法时，除其中一点在最大吸收波长处测定外，其余两点均在最大吸收峰的两侧进行测定。在测定前务必要校正波长。测定的样品应不得少于两份。第31页，共99页，2023年，2月20日，星期三适用于维生素A醇（等吸收比法）

第一法无法消除杂质干扰时用此法[皂化法、6/7A法]（3）第二法第32页，共99页，2023年，2月20日，星期三水溶性脂溶性皂化法第33页，共99页，2023年，2月20日，星期三判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定计算是否第34页，共99页，2023年，2月20日，星期三判断A300/A325是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定计算A325(校正)第35页，共99页，2023年，2月20日，星期三03%－3%第36页，共99页，2023年，2月20日，星期三三氯化锑比色法（二）优点简便快速λmax618nm～620nm标准曲线法缺点呈色不稳定（5~10s内）水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性蓝色+3SbClVitA第37页，共99页，2023年，2月20日，星期三氨基嘧啶环－CH2－噻唑环(季铵碱)第二节维生素B1HClCl-结构与性质一、（一）1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）UV共轭双键λmax=246nm溶解性第38页，共99页，2023年，2月20日，星期三与生物碱↓→↓（三）硫色素反应（四）嘧啶环——噻唑环——（五）盐酸根呈氯化物的反应，用于鉴别。结构与性质一、第39页，共99页，2023年，2月20日，星期三ChP鉴别试验二、（一）硫色素反应第40页，共99页，2023年，2月20日，星期三第41页，共99页，2023年，2月20日，星期三硫色素＋2H第42页，共99页，2023年，2月20日，星期三VitB1H+H+H+H+（二）沉淀反应第43页，共99页，2023年，2月20日，星期三S元素反应Cl-反应（三）其他反应()21PbSNaSVitBNO3PbNaOH第44页，共99页，2023年，2月20日，星期三三、含量测定喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝）（一）非水溶液滴定法第45页，共99页，2023年，2月20日，星期三反应摩尔比为1：2第46页，共99页，2023年，2月20日，星期三UV法（二）第47页，共99页，2023年，2月20日，星期三片剂、注射剂=421（每片）相当于标示量的%=A=ECL规格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011×%100标示量平均片重×××第48页，共99页，2023年，2月20日，星期三（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlml%VEA%cm100110011×标示量稀释倍数第49页，共99页，2023年，2月20日，星期三差示分光光度法简称ΔA法取两份相等的供试液，一份加酸，另一份加碱或缓冲液或其他能够发生某种化学反应的试剂，有时也可不加任何溶液，然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差值（ΔA值）在供试溶液的一定浓度范围内，ΔA值与浓度C之间呈线性关系。优点：在不同pH介质中，或经适当化学反应后，供试物发生了特征性的光谱变化，而赋形剂或其他共存物质不受pH条件或化学试剂的影响，未引起光谱变化，从而消除了它们的干扰。第50页，共99页，2023年，2月20日，星期三差示分光光度法ΔA法使用：1、利用最大吸收波长进行药物的测定：紫外光谱对pH十分敏感时，可测得ΔA（碱-酸）或ΔA（pH7-酸）。2、利用最大吸收与最小吸收之差（即振幅）进行药物测定：某些药物共存物在某pH范围内的光谱与pH无关（即吸收度不变）。而主药有最大和最小吸收，两者差值与主药浓度成正比。

第51页，共99页，2023年，2月20日，星期三差示分光光度法ΔA法使用：3、利用干扰杂质等吸收波长进行测定：于干扰物的等吸收波长处进行测量，如测得供试物的相应吸收度，即可消除共存物的干扰。4、利用最小吸收波长(lmin)处的增色效应进行测定：某些药物在碱性和酸性溶液中于lmax或lmin处吸收重叠，但吸收值不同。但在碱性或酸性溶液中于lmax或lmin处可产生增色效应，利用此效应可测定药物浓度。

第52页，共99页，2023年，2月20日，星期三（三）硫色素荧光法原理1、荧光硫色素异丁醇铁氰化钾1VitBNaOH第53页，共99页，2023年，2月20日，星期三特点2、（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于体液分析（三）硫色素荧光法第54页，共99页，2023年，2月20日，星期三1、易溶于水2、水溶液呈酸性结构与性质一、（一）溶解性第三节维生素CL－抗坏血酸第55页，共99页，2023年，2月20日，星期三C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.57酸性（二）一元酸第56页，共99页，2023年，2月20日，星期三L(+)－抗坏血酸活性最强手性C（C4、C5）（三）光学活性**第57页，共99页，2023年，2月20日，星期三有活性有活性无活性二烯醇结构（四）还原性第58页，共99页，2023年，2月20日，星期三与碱反应（五）水解性第59页，共99页，2023年，2月20日，星期三第60页，共99页，2023年，2月20日，星期三△糖类的显色反应50℃结构与糖类相似（六）具糖的性质第61页，共99页，2023年，2月20日，星期三与氧化剂的反应（一）鉴别试验二、去氢抗坏血酸]O[VitC第62页，共99页，2023年，2月20日，星期三1、与AgNO3反应2、与2，6-二氯靛酚反应(ChP2000)氧化型玫瑰红色还原型蓝色OHˉ(ChP2000)与氧化剂的反应（一）第63页，共99页，2023年，2月20日，星期三（玫瑰色）（无色）与氧化剂的反应（一）第64页，共99页，2023年，2月20日，星期三3.其他氧化剂的反应：亚甲蓝或高锰酸钾试剂褪色

碱性酒石酸铜砖红色沉淀

磷钼酸钼蓝

与氧化剂的反应（一）第65页，共99页，2023年，2月20日，星期三糖类的反应（二）或盐酸50℃吡咯第66页，共99页，2023年，2月20日，星期三UV（三）0.01mol/LHCl第67页，共99页，2023年，2月20日，星期三三、杂质检查

1.溶液的澄清度与颜色：有色杂质分光光度法

2.铁、铜离子：原子吸收分光光度法

3、草酸的检查第68页，共99页，2023年，2月20日，星期三指示剂淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量测定四、第69页，共99页，2023年，2月20日，星期三

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6方法2、第70页，共99页，2023年，2月20日，星期三（1）酸性环境d.HCl（2）新沸冷H2O减慢VitC被O2氧化速度讨论3、（3）立即滴定赶走水中O2减少O2的干扰第71页，共99页，2023年，2月20日，星期三（4）附加剂干扰的排除片剂——滑石粉——过滤注射剂——抗氧剂——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O5第72页，共99页，2023年，2月20日，星期三CHHOOaS3aSO+H2NHON2252HONHCOS3a第73页，共99页，2023年，2月20日，星期三练习：维生素C含量测定方法如下：精密称取维生素C0.2020g，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1020mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪，消耗22.49ml。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。求维生素C的含量。第74页，共99页，2023年，2月20日，星期三2，6-二氯靛酚钠滴定法（二）USPJP原理1、酚亚胺二氯靛酚，-62VitC第75页，共99页，2023年，2月20日，星期三自身指示终点法方法2、第76页，共99页，2023年，2月20日，星期三（2）快速滴定2min内（1）酸性环境HPO3-HAc稳定VitC防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定（定量过量）（测剩余染料）讨论3、第77页，共99页，2023年，2月20日，星期三（4）缺点

需经常标定贮存≤一周不稳定干扰多

氧化力较强第78页，共99页，2023年，2月20日，星期三第四节维生素D维生素D2一、结构与性质维生素D3第79页，共99页，2023年，2月20日，星期三开环的甾体：具有甾类化合物的显色反应，可用于鉴别。手性碳原子：具有旋光性，可用于鉴别。多烯：可进行紫外检测。一、结构与性质第80页，共99页，2023年，2月20日，星期三二、鉴别试验1.显色反应醋酐--硫酸反应D2黄红紫绿D3黄红紫、蓝绿绿三氯化锑反应橙红色渐变粉红三氯化铁反应橙黄色二氯丙醇和乙酰氯反应绿色第81页，共99页，2023年，2月20日，星期三2.比旋度鉴别维生素D2维生素D3溶剂

浓度比旋度值无水乙醇无水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事项：应于容器开启30分钟内取样，在溶液配制后30分钟内测定。二、鉴别试验第82页，共99页，2023年，2月20日，星期三

3.区别反应：以96%乙醇为溶剂，加乙醇和85%硫酸，D2显红色，在570nm处有最大吸收，D3显黄色，在495nm处有最大吸收。

4.其他方法：TLC、HPLC、制备衍生物测熔点二、鉴别试验第83页，共99页，2023年，2月20日，星期三三、杂质检查维生素D2中麦角甾醇的检查：加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生浑浊或沉淀。前维生素D的光照产物第84页，共99页，2023年，2月20日，星期三四、含量测定方法中国药典（2000年版）采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。

固定相：硅胶

流动相：正己烷-正戊醇（997：3）第85页，共99页，2023年，2月20日，星期三名称R1R2相对活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***第五节维生素E第86页，共99页，2023年，2月20日，星期三结构与性质一、苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、UV2、乙酰化的酚羟基易水解]O[醌型化合物△生育酚-+orOHHVitE杂质，需检查第87页，共99页，2023年，2月20日，星期三]O[生育红（一）硝酸反应橙红色鉴别试验二、75℃15′HNO3VitE生育酚第88页，共99页，2023年，2月20日，星期三（橙红色）生育红生育酚HNO3强氧化剂鉴别二、第89页，共99页，2023年，2月20日，星期三三氯化铁－联吡啶反应（二）鉴别二、第90页，共99页，2023年，2月20日，星期三生育酚对-生育醌[O]弱氧化剂第91页，共99页，2023年，2月20日，星期三血红色第92页，共99页，2023年，2月20日，星期三=41.0～45.5λmax=284nmλmin=254nm0.01%无水乙醇中UV法（三）鉴别二、第93页，共99页，2023年，2月20日，星期三薄层板硅胶G展开剂环己烷-乙醚（4：1）显色剂硫酸（105℃5′）

VitERf

=0.7-生育酚Rf

=0.5-生育醌