DB15 445-2008科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程

ICS65.120备案号：23330-2008 DB15内蒙古自治区地方标准DB15/445—2008科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程TechnicalGuidelinefbrCertificationofLespedezahedysaroides(Pall.)Kitag.cv.Keerqin2008-08-20发布 2008-10-01实施内蒙古自治区质量技术监督局发布DB15DB15/445—2008,Vf, —I—刖言本标准的第2、第4章为强制性的，其余为推荐性的。本标准由中国农业科学院草原研究所和中国农业大学提出，中国农业科学院草原研究所负责解释。本标准由中国农业科学院草原研究所、中国农业大学和内蒙古林西县草原工作站负责起草。本标准主要起草人：孙启忠、韩建国、王赟文、玉柱、赵淑芬、乔玉梅。DB15DB15/445—2008#科尔沁尖叶胡枝子认定技术规程1范围本标准给出了科尔沁尖叶胡枝子的品种名和来源，规定了植物学认定、幼苗认定、物候期认定和DNA认定方法。本标准适用于科尔沁尖叶胡枝子的认定。2品种名2.1中文名科尔沁尖叶胡枝子2.2学名Lespedezahedysaroides（Pall.）Kitag.cv.Keerqin3品种来源科尔沁尖叶胡枝子是由中国农业科学院草原研究所、中国农业大学和内蒙古林西县草原工作站等单位，采用一次混合选择法，从内蒙古林西县野生尖叶胡枝子（Lespedezahedysaroides（Pall.）Kitag.）群体中选出优良单株，经过多年人工栽培驯化而成。2006年12月经全国草品种审定委员会审定登记为栽培品种（品种登记号：325）。品种原产地内蒙古林西县，原种由中国农业科学院草原研究所保存。4植物学认定4.1株型多年生草本状半灌木，直立，株型呈帚状，成熟株高85cm〜100cm。4.2根系直根系，为畫套聚积型，主要分布在20cm±层内。4.3枝条1年生枝条基部粗0.5mm以下。2距及2商生以上主枝基部粗1.3mm〜3.5mm,分枝为2〜7个；主枝中下部侧枝较多，为15〜58个*,*度25cm〜48cm,与主枝呈25。〜35。夹角。4.4叶片羽状3出复叶，个别植株羽状4〜5出复叶，托叶刺芒状，叶片条状长圆形，小而密，开花前叶色呈黄绿色，花后稍暗。顶生小叶较大，椭圆状或长矩圆状披针形，长20mm〜25mm,宽6mm〜7mm。叶脉伸出呈短刺尖，主叶脉凹陷。4.5花序总状花序腋生，长于叶片，每花序3〜5小花，小花较小，部分小花直接生于叶腋处。总花梗和小花梗较短。花冠蝶形白色，旗瓣中央和龙骨瓣顶端为紫色。萼浅杯状，披针形，顶端渐尖，较萼筒长。4.6果实荚果包于萼内，倒卵形或椭圆形，先端有宿存花柱，腹缝线略长于背缝线，伏生白柔毛,内含种子1粒。种子椭圆形或卵形，黄色、紫色或具紫色、淡紫色斑纹，千粒重1.57g〜1.84g。5幼苗认定子叶出土后呈长椭圆形、绿色、肉质，生长缓慢；真叶4〜5片后生长加快，叶片黄绿色。当年基部不分枝，主枝上分生侧枝较多，株高30cm〜40cm。6物候期认定在原产地5月下旬播种，6月初出苗，20d左右苗齐，6月下旬至7月上旬进入分枝期,8月上旬现蕾，中下旬少量开花，8月下旬至9月上旬有少量植株结实，9月中旬少数种子成熟。翌年，5月初开始萌动、下旬返青，6月中下旬开始现蕾，7月下旬至8月上旬为开花期，8月下旬至9月初为结实期，9月中下旬种子成熟。生育期115d〜120d。7DNA认定7.1实验仪器PCR扩增仪；电泳仪；紫外分光光度计；多通道分子成像系统。7.2取样与保存在开花期分单株采集嫩叶，样品置于液氮中，于实验室-20°C保存。DNA提取用DNA提取试剂盒提取总DNA,0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。ISSR反应体系及程序7.4.1ISSR反应体系总体积20pL,含有约40ng基因组DNA,0.2gmol/L引物，10nL2XTaqPCRMasterMix[0.1U卩/LTaqPolymerase,500|iMdNTPeach,20mMTris-HCl（pH8.3）,100mMKC1,3mMMgC丄切，用而玦。补充体积至20pL。6.4.2PCR扩增程序94°C充分变性5min,然后诳行35命擊讦：94°C变性30s,50°C或52°C（根据引物而定）退火45s,72°C延伸1.5min,最后72°C延伸7min，丄°C终止反应（表1）。PCR产物在0.8%琼脂糖凝胶上电泳分离，核酸染料染色显带，多通道分子成像系统成像并观察。DB15/445—2008表1所用的ISSR引物序列和退火温度引物序歹U退火温度/cUBC-812(GA)8A50UBC-809(AG)8G52UBC-811(GA)8C52UBC-825(AC)8T52UBC-827(AC)8