红细胞免疫实验所选择

红细胞免疫实验所选择的

一些测定指标

本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!相关器材和抗体需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎fantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!一、红细胞免疫概述：二、Ｅ花环率（红细胞的免疫吸附）测定三、唾液酸（ＳＡ）测定四、封闭度的测定五、流动性的测定六、带3蛋白(band3)测定本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!红细胞免疫概述

近年来随着免疫学研究的逐步深入，人们已认识到红细胞（ＲＢＣ）不仅具有呼吸功能，而且像白细胞一样具有免疫功能。现发现红细胞具有识别、粘附、浓缩、杀伤抗原，清除免疫复合物(IC)的能力，参与机体的免疫调控，并有完整的自我调控系统。而且在人体的血液系统中，红细胞比白细胞数量多、代谢快，所以在抗肿瘤免疫反应中，红细胞应该发挥着重要调控作用，形成抗肿瘤免疫调控网络，开辟综合治疗肿瘤的一条新的思路和机制。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!

而对于红细胞免疫检测的方法，从1982年开始，基本建立了红细胞C3b受体和免疫复合物花环实验、单克隆抗体Coombs试验、红细胞SPA花环试验、酵母多糖血凝法、调节因子活性测定及肿瘤血凝法等10余种经典的免疫监测方法。随着对红细胞免疫的进一步深入研究，国内外又建立了测定红细胞C3b受体活体发光法，红细胞膜促白细胞吞噬作用的化学发光法免疫金银染色法，肿瘤细胞血凝法和酶法及直向肿瘤红细胞花环试验等10余种新的方法。这些方法的建立大大促进了红细胞免疫的基础理论和临床研究的进展。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!Ｅ花环率（红细胞的免疫吸附）红细胞膜表面上有糖蛋白受体，因此RBC通过受体可免疫粘附各种肿瘤细胞，而且通过过氧化物酶等作用，对癌细胞具有效应细胞作用，可阻止癌细胞血行转移，并与肿瘤病人的病情疗效，转移密切相关.而红细胞之所以能够黏附各种肿瘤细胞，主要是因为红细胞膜上有一些受体。如血循环中95%的C3b受体(CR)存在于经红细胞表面，因此红细胞CR是红细胞免疫粘附作用的关键部位，并在运送和清除IC方面起着重要作用。判断红细胞免疫功能的主要指标为CR和IC.本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验所需要的药品及仪器:新鲜豚鼠或者人的新鲜血液;0.25%戊二醛,瑞士染色剂,载玻片,盖玻片,高倍显微镜本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!测定方法：昆明种小鼠接种瘤株，接种次日开始给药，连续7天，于停药第二天处死，取血，离心、洗涤制成红细胞悬液（1×108/ml）待用。小鼠肝癌H22细胞接种于昆明种小鼠腹腔连续传代，实验时无菌抽取7天龄腹腔肿瘤细胞以Hankis液洗涤2遍，制成肿瘤细胞悬液（1×106/ml）。取此悬液0.1ml加等体积豚鼠（或人）新鲜血液，37°C水浴1小时，洗涤离心2次，弃上清液，成为血清致敏癌细胞，加0.05ml红细胞悬液,37°C水浴30分钟，加0.25%戊二醛固定、涂片、瑞氏染色.本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!肿瘤细胞兰色，红细胞红色，一个肿瘤细胞结合3个以上红细胞为肿瘤红细胞花环。计算花环率。需要注意的问题：1小鼠取血前最好禁食不禁水12h，才能取出较多的血。2人的新鲜血液一定要保持新鲜，才能成为血清致敏癌细胞。3瑞士染色剂最好在一个月以前就配置好，最好是保存三个月以上。4查Ｅ花环时一定要查准。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!唾液酸（ＳＡ）

唾液酸（SA）是广泛存在于各种生物组织中的，构成细胞表面复合糖质的组成部分,是细胞膜上糖链末端的残基，是膜上负电荷的来源，对保持细胞的正常生理活动和功能十分重要，唾液酸增多影响细胞膜表面电荷特性，膜的物质转运过程。有关资料表明，SA具有明显的抗识别作用，许多癌化后的细胞，其表面富含唾液酸粘蛋白。

本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!有研究表明，唾液酸转移酶与肿瘤转移密切相关。细胞膜表面唾液酸含量与肿瘤的恶性程度有关，发现随着肿瘤的生长，红细胞膜上的唾液酸含量增加。红细胞中的唾液酸主要存在红细胞膜上，唾液酸含量增多，可影响红细胞膜（RBC）表面电荷磁性，膜的转运物质过程、抗原决定簇的暴露、免疫应答细胞活性、膜表面受体功能等因素。

本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!一些抗癌药物可抑制唾液酸转移酶活性，减少细胞表面唾液酸含量，显著降低肺癌转移的结节散，使小鼠的生存时间延长。在大鼠试验中，它们能抑制大肠癌的肝转移。其作用机制不是直接作用于癌细胞，而是通过抑制唾液酸转移酶，诱导细胞表面糖链结构改变，从而影响癌细胞与正常细胞的相互作用。综上所述，抑制唾液酸转移酶，降低癌细胞表面唾液酸含量，是某些抗转移药物的主要机制之一。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!实验所需要的药品及仪器:蛋白酶水解抑制剂对甲苯磺酰胺（PMSF）（Sigma公司）；考马斯亮蓝CBBG250；蛋白标准品；唾液酸标准品（浓度）；5-甲基苯二酚。仪器:离心机；低温高速离心机（BECKMANAvantiTM68centrifuge）；电热恒温水浴锅；751分光光度计本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!

测定方法：取全血离心,3000转/分，10分钟，1:3生理盐水洗涤2次，1:1悬浮在生理盐水中制成红细胞悬液;加入5p8.4磷酸缓冲溶液(1:30)4℃1小时溶血使成为红细胞溶血液.然后4℃下离心,12000g，40分钟，弃上清液，5p8.4磷酸缓冲液洗涤3次，最后悬浮在一定量5p8.4磷酸缓冲液中。制成为影泡悬浮液。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!膜蛋白定量使用试剂盒：按要求处理完后混匀，静止10分钟，于595nm波长处，空白管调零后，测各管吸光度。蛋白含量（mg/ml）=（测定管OD值/标准管OD值）×标准管浓度（mg/ml）根据原始蛋白浓度值，将样品最终稀释至1mg/ml，放置低温冰箱备用。SA测定也按照试剂盒要求操作,然后混匀，100℃水浴15分钟，流水冷却后，3000转/分，离心10分钟，取上清，于560nm波长处，空白管调零读取各管吸光度。数据处理用SPSS11.0软件处理。各组数据以±s表示，样本比较采用方差检验。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!需要获注意袖的问荡题：1本实惑验的匙重点吃在于擦溶血易步骤养，一断定要街用生球理盐打水充君分将厕红细旗胞洗辟干净拒，再电用低轧渗溶长液破刮膜。齿且最展好过缩慧夜。2本实悬验要议在低步温离温心机菌下进碰行。轰一定约要注男意始踢终保闲持4℃左右摸的温近度3本实炮验过剥程中任的蛋报白定脑量一牲定要泛作准象，才燃有可衫能进冒行下撕面的怪实验毛。本文脂由探皱生科狂技技蛋术人涂员提冰供,科Fa裳nt翅ib烧od葛y全谋球抗翻体搜医索引壤擎，熟您身破边的尽抗体其专家饶!封闭借度正常苹红细丑胞在互等渗敌溶液背中能录重新铅封闭动起来贪，恢茄复对饱大分狭子和贴阳离阻子的登通透狱屏障沉，形伐成封眨闭影码泡。授影泡撕在封草闭状岛态时蚊，大早分子口和阳仙离子共不能汗透过市细胞店膜。低因此斑膜内营侧表贼面的范酶不双能和挑外加妇的底霜物接辟触发哀生反消应，报即酶感对底险物的仓可及进性小还。当彼制备沫的影晚泡加蚁入表作面活肤性剂钳后，弹消除久了膜拉的通学透屏疯障，镰则酶奸对底村物充嚷分接听触，您显示特最大园酶活产性。苍即酶梨对底删物的易可及惹性越线小，遇表示风影泡康的封夏闭度嘱越大锤，反鼠之，铺可及梳性越探大，棋影泡逃封闭纲度越魔小。损由于勾在癌吉症发棍病和鸦抗癌摔药物担的双隶重影芹响下倚，红道细胞封膜的僵结构巴和功年能发勒生改奏变，老尤其咱是膜瞒蛋白短质和跃脂质饭的过麻氧化枯，这准些变它化势饱必影济响红纷细胞轻膜重贡新封局闭的呀能力贼。本文座由探共生科粗技技让术人薯员提站供,逮Fa岩nt蕉ib跌od代y全不球抗却体搜父索引流擎，稍您身魄边的赶抗体丝式专家明!实验干所需石要的墓药品威及仪拜器:蛋白父酶抑酸制剂跑苯甲饺基磺宴酰氟流（P淋MS电F）吊（S欣ig钩ma接）；拜考马随斯亮姓兰C猪BB贵G2唯50时（南丙京建辉成生佩物工何程研妙究所叛）；登白皂正素;金K任3F衰e（肃CN荷）6。75弓1分光殿光度拌计；低虹速离滨心机波（北揭京离禽心机两厂）市；低蒙温高驶速离醒心机司（B强EC纪KM捡AN遵）；蜡超净席工作诸台;群光学绘显微贼镜。本文饥由探撑生科骂技技歼术人薯员提是供,恳Fa色nt睛ib递od详y全奇球抗逗体搜晴索引骡擎，正您身夏边的而抗体编专家按!测定渣方法辽：红细蚂胞封躬闭影筒泡的陷制备烈：义先制笛备不脸封闭琴影泡攻，方窄法同纪前。资然后挣用等厦渗磷嚷酸缓冶冲液慰将不竹封闭湿影泡忘洗涤蒸一次轨，2抛00宾0转组/分婚，离提心1底0分洒钟，告接着内将洗波过的负影泡炮放在彼等渗武溶液祸中，院37乖℃保授温1尤小时节即获意得封震闭影嗓泡。NA扰DH胡－细奶胞色毕素C箭氧化麻还原段酶活吼性的外测定脾：取呆膜样直品（杆膜液泽）0榆.6爽ml蛋于比许色杯蓝中，睛按要森求加料反应大液，哀混匀熟后在葵波长区42剧0n怖m处怠比色踢，以驱加入精NA检DH觉为起端点，死记录贯反应叮开始刮6分伸钟内隆的O斜D值禾（每烟隔1肢分钟蚀记录雕一次呜）。气上述熄反应阅在室东温（标25际℃）泰进行带。比顿色对负照，充除不野加N释AD慌H溶举液外碎其他端操作夜同上派。本文飘由探程生科谅技技穗术人与员提中供,相Fa彻nt诸ib勺od帅y全愧球抗坏体搜嗓索引南擎，费您身拉边的祸抗体容专家多!数据柄处理胡同上腾。需要醉注意铸的问筒题：加入多NA擦DH申后1考mi柿n后抱需要自马上证测定由，时夺间尽侄量计餐准。另外充,K3Fe狂（C终N）6需要任现配薯现用欢,否港则容被易失迈效。本文碍由探必生科泰技技贤术人旅员提接供,递Fa勇nt郑ib涛od炊y全炊球抗缓体搜馆索引逐擎，速您身继边的正抗体凭专家瞎!红细毯胞膜亭的流滑动性大量么事实可证明,许多杰疾病瓣与生酒物膜莫脂的印流动水性变世化有喘关,在细墓胞周坦期的辉不同迎时相纹、代妻谢过束程中潜、疾书病条山件下巡寿以及尤药物星作用娱后细淡胞膜扶都会腐有流爸动性梅的变扬化，府而且崇发现偿许多跳疾病帅除实虚质性恭器官宜的细怠胞膜莲病变唉外，的常伴疫有红滋细胞冲膜的悼异常勺。红蒸细胞狂的正筝常功甲能也购与红庄细胞是膜的镇流变筋性质乖有很杆大关晋系，晴对细番胞形亿态、荷物质端运输蒙、酶吗活性晒、抗蔑原性收及受铅体活塔性等堡均有泽影响咬。本文别由探兆生科小技技桶术人印员提萌供,曲Fa宝nt遗ib丛od象y全胁球抗脑体搜疗索引附擎，糊您身住边的册抗体金专家术!红细睡胞膜榜流动黄性实捐际上洗是指忠膜质怨流动捧性，请其中男也包报含膜恶中蛋饱白质部的运脆动。置红细淡胞膜第质流道动性诱对红释细胞串的形年态结伍构、团酶活姨性、纤受体菠活性映及物容质转狗运均剧有影贼响。凝膜流煤动性我增大阀,微泡粘度轨下降政,血坟流流蛛速加认快,楚红细犁胞免涂疫粘扩附肿怕瘤细房诚胞的页能力裹则会矿随之垂增强影。我们酬期望免的目销的是困：与坡正常贪组相尝比，签荷瘤乖小鼠忠红细肃胞微写粘度箩升高姓，膜成脂流忘动性冷下降税，经您过药老物处豆理后艳，不成同荷沃瘤小苦鼠机王体内半红细割胞微丸粘度煤均有反不同造程度酿的下蒜降，够即膜椅脂流她动性慕有所贤提高披。本文姓由探递生科理技技嚷术人分员提今供,匪Fa弃nt漆ib酸od浇y全掀球抗逢体搜蜓索引谱擎，发您身挪边的宰抗体绍专家拖!测定虚细胞效膜流体动性齿的方畅法很抱多,闲如差诞示扫头描量恼热法队(D牧SC响)、块X射盈线衍迷射法叙、电争子自孕旋共剃振法旱（E圈SR号)、听核磁另共振躺(N练MR箩)及呜荧光血偏振推法等改。这里酿我们宫运用暴荧光怪偏振利法选酱用荷头瘤小仙鼠红鼓细胞希膜作晴为考每察对央象，象观察贿红细圾胞膜制流动米性的朴变化波。本文歇由探泉生科脏技技住术人视员提伶供,倒Fa辟nt愉ib计od判y全词球抗敌体搜址索引吃擎，详您身够边的齐抗体很专家业!实验谁所需畜要的须药品含及仪飘器:试剂污与药仅物斗蛋白则酶抑岔制剂幕苯甲异基磺爽酰氟刮（P委MS跪F）鸟（S朵ig疑ma秘）；哨考马窗斯亮段蓝C轻BB姻G2适50亭（南绢京建研成生览物工尘程研端究所丘）；误DP跪H(橡Si牵gm袋a公蹈司生由产)碧；生樱理盐千水;荧光胖分光脸光度斩计,低速艺离心陈机,水样浴箱陶,低温缠高速掀离心切机（Av悬an此ti扩TM群68魂c叠en品tr绝if夜ug颠e，BE五CK浴MA费N）。本文祝由探庙生科笑技技棚术人粘员提府供,妄Fa耐nt疫ib返od训y全秤球抗纸体搜瘦索引撑擎，厘您身也边的件抗体害专家命!测定苹方法主：红细党胞膜吹的制更备同赶上。膜蛋两白定屡量同宵上.红细胞切膜的钥荧光漫标记墓：膜铁蛋白检定量摔后，润取新淘配制殿的2m病mo抵l/非L倚DP择H(向Si辽gm盆a公司另生产)四氢佣呋喃额液10评μl分别相加入10炎.0只ml蛾R拣BC膜缓反冲液(膜蛋甘白总宪量98劈燕0μ哈g/延ml立)及10朵.0你ml瘤细摄胞悬喉液，25爷℃温浴30尘mi连n，用PB战S液洗漏涤1次,最后障将细土胞悬泻浮于4.亲0m戏l姑PB让S液中嗓，即雄得DP圆H标记职的细筹胞膜寺。荧光狂偏振绢度的炸测定芝：细碰胞膜屿的流剩动性摸采用窑荧光碌偏振细度(P缝)和微皱粘度(η止)表示钻。本文哥由探采生科溪技技还术人锻员提渡供,晚Fa扯nt循ib催od仆y全海球抗冠体搜让索引衣擎，效您身桃边的网抗体愉专家凤!实验财采用胳日立恩公司讲生产领的RF个-5跨40荧光碗分光以光度海计测角荧光刷偏振廊度。λex36叹2n场m,链λem43级2n虏m,狭缝10佛nm挡,测温25筛℃,按公升式计贷算P值和η值。数据壤处理芽同上注意区事项远:在运围送样阁品时碧尽量辽使样施品处化于低着温下芽。本文代由探迫生科广技技拜术人穷员提拘供,营Fa史nt偿ib按od探y全谨球抗森体搜京索引贺擎，量您身慌边的棒抗体乳专家渠!带3子蛋白轮(b赞an获d3拜)测粪定带3古蛋白半(b童an置d3照)是猾红细序胞(作RB恰C)定膜中猾含量摊较多贸的含锋糖内寸在蛋脉白，雕是一忙种典拍型的临多次村跨膜字蛋白垮质,染介导想Cl-、H辜CO3-的跨柔膜交蜜换过由程,妇参与较细胞出内p肠H酸烫碱平逃衡的汉调节侄,并觉与细去胞增桂殖、摄凋亡堆和衰弯老相把关。置带3准蛋白邻的1亡4次闭跨膜厨(t坐ra哥ns铅me仔mb鉴ra背ne躁,啦TM晕)结黄构是讨阴离虏子交腐换的煤活性池部位菊,它坐可以平不依帜赖于劲胞质候域而揪独立掌发挥多离子胖交换轿的作队用。白实验塞证明居，带愿3蛋扁白除绩了具补有物敲质转千运功追能之交外，棉还具升有调礼节血袜红蛋漆白携质氧能虹力，鬼调节情和保债护糖手酵解忙酶活委性及导稳定递红细盟胞骨合架的竿功能辉。本文乡丰由探占生科朗技技轮术人落员提狸供,耗Fa呜nt形ib毙od扩y全解球抗鄙体搜雁索引芝擎，狼您身难边的扫抗体速专家素!试剂端与药洽物30年%丙铜烯酰瓣胺贮使存液趁：称电取丙拣烯酰屈胺5哨8g支，甲筑叉双同丙烯拍酰胺妹2g唇，加娇蒸馏逃水溶畅解定饺溶至迫20浇0m仰l，嘱装入智棕色耗瓶4摸℃保询存；1.幻玉5m巧ol嗽/L膨T学ri月s·怪CI泳（P运H8舒.8深）缓银冲液位：4蛮℃保草存；0.煌5m洋ol宜/L揉T狠ri休s·灯CI神（P仰H6陈.8虎）缓汽冲液义：4军℃保炒存；10阔%S叹DS除：室芬温保扛存；10户%过驱硫酸饺铵（梁AP故S）圆：4词℃避赶光保蛮存；四甲才基乙诸二胺兰（T尘EM茎ED滨）：圣原液鸽使用销，4规℃避杰光保务存。本文策由探补生科塞技技彩术人勉员提弟供,文Fa泄nt干ib疮od暂y全弟球抗扇体搜鹅索引丹擎，喝您身师边的瓶抗体驻专家效!电泳垃缓冲放液：刊称取尚Tr垦is巷1未5.劈燕15吧g，固甘氨腊酸7婚2.