细胞工程实验技术

CELecture1

细胞工程实验室基本实验技术

授课教师:谢浩10/20051WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞品种改良，生物制品(如抗体制备)，医学用途，…培养，改造细胞工程实验室的设置和运行都是为细胞工程服务的。10/20052WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞培养的基本概念细胞培养的基本条件细胞培养的基本技术10/20053WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.CE1-1 细胞培养的基本概念10/20054WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.什么是细胞/组织培养？体外细胞培养的优点和缺点培养细胞生长的基本条件10/20055WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.什么是细胞/组织培养？细胞的体外繁殖 Propagationofcellsoutsidetheorganism包括动物组织培养和植物组织培养 Tissuecultureinvolvesbothplantandanimalcells通过组织培养可以获得克隆 Tissuecultureproducesclones,inwhichallproductcellshavethesamegenotype(unlessaffectedbymutation

duringculture)10/20056WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.体外细胞培养的优点细胞株和细胞系的遗传单一性可由单细胞决定 Singlewelldefinedcelltype培养条件可控制，较易操作 Controlledconditions，alsoeasytomanipulate生物材料操作方便 Superbaccess可代替动物试验 AlternativetoanimaltestingModelsystemfordiscoveryofphysiologicalprinciplesChecklateronthesmallernumberofanimals可以获得大量的细胞 Largequantitiesofcellscanbeobtained10/20057WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.体外细胞培养的缺点细胞培养同动物培养完全不一样 NotatalllikeananimalIncellculturescellsarenolongerorganizedintotissuesMonolayerisnothinglikea3Dtissue细胞培养环境同体内环境不同 EnvironmentisnotlikeinvivoECMscaffolding受血清，血浆等培养条件的影响 Effectsofserum,plasma,etc. “Tissueculturecanbeapowerfultechniqueifconductedproperlyandagreatwasteoftimeandmoneywhendonesloppily” BerniceMartin,Ph.D.10/20058WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.细胞的营养需要细胞的生存环境温度: 37℃，O2CO2: 5%，CO2+H2O←→H2CO3←→H++HCO3-pH: 7.2-7.4渗透压 无污染无毒培养细胞生长的条件10/20059WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.CE1-2 细胞培养的设备10/200510WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.无菌： 净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器，洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素细胞生长： 纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清细胞检测： 倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器

细胞保存： 液氮罐10/200511WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.无菌设备：净化工作室------我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准-------洁净度级别尘粒最大允许数/立方米尘粒最大允许数

≥0.5um

≥5um浮游菌/立方沉降菌/皿

100

3,500

0

5

1

10,000

350,000

2,000

100

3

100,0003,500,000

20,000

500

10

300,00010,500,000

60,000

NA

1510/200512WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.风淋室是生物洁净室的理想配套设备，它不仅可以清除人体和物品表面附着的尘埃，减少带入洁净室的灰尘量，而且兼有气闸室的功能，可防止非洁净空气的侵入。风淋室的板壁采用轻质隔热夹芯钢板，吹淋板采用进口不锈钢制作，吹淋口方向可调，风淋时间可在30-99秒间的调整。风淋室可以配合加热器，冬天可以加热，温度可调，一般控制温度在30-35℃较为适宜。

无菌设备：风淋室10/200513WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.该装置是一种洁净室的辅助设备，主要用于洁净区与洁净区，洁净区与非洁净区之间小件物品的传递，以减少洁净室的开门次数，把对洁净区的污染降低到最低程度。

PB系列传递窗按用途分为标准型和生物洁净型两种。（后者带空气自净装置）按门互锁形式分为机械互锁和电子互锁两种外壳按材料分为彩钢板型、薄钢板喷塑型和全不锈钢型三种通用型尺寸如下表所列，特殊规格按用户要求制作。无菌设备：传递窗10/200514WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.高效过滤器是用超细玻璃纤维纸作滤料，胶板纸作分隔板，可与铝合金框、木框及镀锌钢板框组合而成。

特点：具有低阻高效、轻质、容尘量大等特点，层高的要求，缩小净化设备静压箱体积等优点。适用于常温常压常湿条件下环境空气的净化，尤其适用于需要高效空气过滤器覆盖率高的净化厂房。无菌设备：高效过滤器10/200515WuhanUniversityofScienceandTechnologyXieH.技术界性能栽参数淹：(1竿)净化网等级派：10田0级(美国爬联邦特标准20押9E愉)旱(2妄)平均松风速届：0.妥25～0.慨45砖m/熟s(可调)挠(3停)噪音情：≤6艇2d说B(便A)靠(岸4)电源顽：22垮0V夏/5躲0H敢Z层流及罩是让可提苍供局过部高欠洁净临环境锤的空务气净装化设卡备。杜它主继要由哲箱体闪、风傻机。稿初效惩空气讯过滤塞器、可高效唉空气腔过滤港器、只阻尼萌层、宗灯具璃等组次成，淘外壳恒为不样锈钢硬或彩择钢板家。该劲产品右既可刮悬挂睡，又鱼可地巩面支山撑，涌结构联紧凑野，使础用方姐便。袋可以趋单个健使用炒，也朗可多磨个联睡接组猪成带倦状洁江净区卵域，吐形成封洁净恋隧道柔。洁匙净层尚流罩快是将缸空气挡经风虎机以摘一定晴的风傲压通烈过高播效空悠气过植滤器末后，撒由阻氏尼层朽均压秒，使佛洁净梳空气光呈垂勇直层奇流型鄙气流钻送入暮工作虑区，仁从而托保证践了工报作区春内达祸到工艳艺所阿需的妖高洁钢净度抢。无菌税设备喂：洁蜡净层俗流罩10叼/2佩00练516W偏uh竞an者U密ni剥ve舌rs探it炮y范of挑S勉ci拍en次ce雪a坚nd拉T显ec必hn颠ol散og准yXi态eH.超净根工作舱台的雀工作呢原理疗是利园用鼓吗风机仔驱动干空气增遁过叨高效呈滤器挎除去闭空气们中的旱尘埃争颗粒筒，使恶空气谷得到树净化占。净策化空办气徐文徐通苹过工糠作台限面，宣使工抗作台正内构骆成无踩菌环铲境。无菌侵设备被：超斧净工群作台(H苏oo影ds邻)10阅/2钳00栋517W喊uh攀an远U逮ni蒜ve侍rs茎it就y伞of药S桐ci捞en愿ce糖a枣nd喂T微ec盈hn素ol鲜og辩yXi读eH.无菌掏设备喉：超沿净工遵作台10甲/2陵00阁518W头uh亡an罪U墙ni探ve软rs坐it挺y乓of贡S窃ci荣en肯ce端a刺nd哗T谷ec小hn此ol蒙og圆yXi驾eH.一种槐既能千使操丈作造日成无孟菌、步无尘岔的局淡部空叔气环晶境，锁保证浴检验浇、检疫测不杂受污责染，挺又能厉保证钓被研牌究的斤对象亲（如复病菌恰、细腹菌等静）不蛮外溢会，保暖护周胶围环蜂境及蹈操作恢人员婶的安制全隔耍离设距备。该设增备可某广泛蝴应用馒于低块、中纠等危无险度槽（病县原体1-度-3，DN免A重组P1躺--山P3）的知临床赴细菌为学，炊病毒觉学、桐微生诉物学幸、组欠织培帆养、揉生物惨学及充生命拿科学颈的研间究，腰加工器、检匠验部厉门。无菌乐设备表：II级A型生核物安秤全柜10絮/2僚00倚519W鸟uh主an脊U雨ni界ve跌rs甘it份y肠of寸S煤ci兴en斑ce剧a讲nd膀T朗ec框hn禾ol刚og轿yXi饭eH.紫外嘱线消档毒主酱要用毁于培寄养室环空气锅、操贸作台垃、塑驱料培竟养揭皿枕和培泰养板销等表许面消称毒无菌塘设备额：紫蓬外灯10亮/2注00他520W再uh冈an善U醉ni竹ve箱rs津it侵y替of淡S琴ci堆en腊ce量a晌nd驶T抓ec舞hn游ol清og脚yXi水eH.干热财消毒嫌（16宏0筒℃，2小时舒）主腰要用忆干玻肤璃器哥皿消会毒无菌洁设备握：电兄热干住燥箱10歇/2盛00费521W凡uh闪an芬U刻ni魂ve沃rs流it灭y洗of倒S窄ci始en替ce南a彼nd荷T束ec相hn音ol助og给yXi缸eH.Ze唉is呢s滤器蛮：过滤栋除菌垒：大抚多数剂培养协用液腾，如软人工仇合成浆培养欲基、棕血清吨、酶己液等私均采富用滤株过法约除菌无菌当设备矿：滤亩器10勾/2备00茶522W糠uh蒸an蔬U驼ni载ve晋rs茶it澡y菌of贷S命ci舱en板ce羊a转nd序T美ec兰hn蜂ol励og闭yXi奔eH.大容让量高季压灭板菌器全自蓝动手似提式建灭菌尺器无菌段设备变：灭今菌器10外/2长00摄523W艳uh跪an促U趁ni罚ve撒rs予it胀y竞of率S消ci怨en馆ce野a欺nd检T施ec泽hn抓ol柿og渴yXi宁eH.细胞病生长姜设备仰：纯腔水仪10谁/2孩00驴524W突uh速an末U匪ni命ve榜rs额it融y登of侮S浪ci版en宗ce亏a齐nd展T换ec弯hn龙ol印og衡yXi罪eH.Pi言pe龄tt钳es钳,凳bo你tt餐le窄s,点f爆la纲sk捆s,pe何tr君idi乞sh俱es•塑料--誉b捐et促te突r晃at知ta广ch禽me织nt遵a退nd闻c弹el返lgr奸ow宾th具o娱f泥mo另no粒la霞ye浸r兆ce且ll鸡c妖ul聚tu肉re--喘m诵or已e夏ex饥pe错ns盏iv创e瞧th毙an揉r盒eu携sa占bl晨e字gl滩as苦s--绍s治ui匆ta预bl肾e袭fo确r天st鸣or烈ag吵e历at剑4瓜ºC•玻璃--搜C碑an末w我it荒hs洲ta豆nd距t旅em俘pe萄ra晃tu店re唯s丽<0页ºCus宣e越fo民r眉ma野in辫ta能in馅in都g这fr桐oz者en肤s恢to联ck蜓s--仿S控te荣am口s添te骨ri顺li茅ze厕b四y赵au婚to誉cl束av令in搬g*妥re婆li折es戚o浴n携st昌ea弹m使pr祸es谣su柏re辨a商nd闻h定ig武h滋he关at*俩us浪e奇fa虫st扔-d辅ry娃c勾yc炭le吧t礼o漆dr划y灯co尿nd弦en嘴sa咸te*侵us依e疤“w毕et剑”级cy胸cl拦e修fo勾r蚕sa不lt避s狂ol淋ut志io改ns创t跟opr燃ev罚en孕t跪ev祖ap拼or践at储io市n*击lo胃os呢el接y郑pl叛ac妹e着ca淡ps畅o谈n槽bo件tt字le原s细胞移生长拳设备清：玻璃枕和塑筑料器抹具10糕/2好00安525W典uh送an浮U另ni础ve翻rs即it炎y乘of店S猎ci外en域ce畏a延nd尊T斧ec醉hn迫ol栏og魔yXi犯eH.细胞棍生长复设备首：培养京容器胜的选液择Ma炒jo市ri挨ty拖o锦f去ve控rt蚊eb着ra闲te坑c击el炒ls椒i技n纸vi瓦tr愧o俯gr诊ow踩a失smo捉no刘la话ye价rson烫a悔n鸽ar裹ti漫fi抓ci迹al聋s甲ub待st堵ra植teMo盗st听c斩el层ls师n乏ee奖d芹to满s种pr陷ea竟d征ou瘦t血on束a谜s蜜ub茄st玩ra蛾te缘瑞i弟n谜or核de铸r卧to邮p蚕ro峰li埋fe纯ra宿teOv锦er留cr泄ow首di灯ng心w娘il挠l缎in坐hi山bi垫t至pr守ol遵if愉er尘at烘io妙nBu当t皮ce亲ll咏s液do嚷n’厌t揉li误ke跃t按o诸be堪l疼on斥el蹲yCe魄ll始y冠ie辽ld育i骑s疲pr滴op渣or色ti匙on企al稿t沿o貌th郊e连av闷ai爹la薯bl慕e竖su开rf稍ac卷e10通/2起00饭526W宇uh众an公U往ni城ve咸rs土it惑y加of踪蝶S啦ci瞎en借ce字a舱nd彻T她ec隔hn借ol摩og尿yXi雪eH.细胞眠生长勒设备挎：培养伞板10树/2林00洞527W腔uh富an谅U舰ni光ve纱rs唤it陪y粪of挨S健ci躬en约ce甲a患nd级T页ec经hn风ol艰og鼓yXi五eH.细胞横生长黎设备岂：培养乒瓶10慕/2况00预528W捐uh怒an晃U孕ni虫ve仙rs纸it梢y第of荡S洁ci念en德ce说a欣nd底T周ec萍hn让ol踏og询yXi股eH.10念/2粘00展529W垮uh树an蜡U详ni续ve茄rs服it登y啊of夕S旧ci突en因ce称a虾nd狗T埋ec络hn罩ol把og赞yXi玻eH.Se银ns档in声g饼an拣d障co寨nt手ro珠l验de护vi打ce计sCh渔am据be蛇r载fa炸ns佛–确e冲ve戚n久di手st亏ri叨bu焰ti驳on循o扒f晌he乔at敬a井nd膜g妈as着es–袄Di层sa夕dv进an笼ta食ge翻–秋i境nc脆re纷as光ed骄s晃pr待ea默d宇of土c需on腿ta馆mi婶na及ti绳onCo听pp护er避w悲al链ls潮–上a泄re万s携up纳po摩se汪d瓦to受b糖e杠an隶ti午mi军cr裁ob吗ia纹lCO立2碧de冷li但ve夫ryRe航du寨ct恢or香s-秃to宗c逐ha陵ng隆e效th旁e挠pr企es捷su金re薄b乌et句we绪en览a幼t介an颜k立an近din却cu狮ba乌to蛙r泛(f窜ro牙m秃ab面ou辆t宋90屯0l残b喝to脆1状0-挥15求lb循)Tw柏o炮or呆m钟or翼e叫cy掉li桐nd败er束s刊wi沾th揉a总n般el昂ec汇tr辫on裤ic区s述wi同tc朋hWa纺tc光h乘fo窗r林le咏ak陪in砖g扭ga增s粮–缘瑞it私c恳an惜b堂e劳ex坐pe响ns啄iv敞e细胞痕生长俩设备宁：培养摸箱（In卫cu宽ba收to遣r)10菌/2疾00与530W仰uh蕉an庆U斗ni络ve对rs女it削y肿of长S分ci交en婶ce熟a教nd旬T咬ec怪hn算ol胁og妥yXi伸eH.CO贡2培养参箱设忌定的京条件情为37思℃，5％CO2。使用CO搏2培养尖箱培害养细强胞时分应注乎意的来问题健：①用螺湖旋口脉瓶培糊养细败胞时武，需梳将瓶拦盖微喂松，街以保怎证通坦气。②保持剧培养筹箱内些空气却干净锦。定苍期消蜡毒英（90唱℃，14输h其)。③箱内原灭菌载蒸馏之水30顶00毫升倾蒸馏街水槽质中以渠保持颂箱内起湿度灰，避笨免培苹养液温蒸发休。细胞晓生长悔设备挺：CO廉2培管养箱10阴/2誉00谱531W侦uh庭an穿U省ni颗ve环rs巨it血y站of瘦S遇ci腊en传ce范a你nd声T州ec至hn卫ol初og妹yXi烈eH.移液见器10还/2骆00恼532W怎uh老an牛U痒ni纸ve任rs暂it昨y垃of倍S撞ci用en益ce伞a恶nd及T其ec貌hn弓ol貌og乏yXi启eH.细胞环检测平设备妥：In喇ve塔rt乘ed另m迟ic肢ro塑sc垄op宇eIt蜓i碎s办vi州ta腾l咳to磨l营oo雅k蹈at纪c急ul倦tu使re席s览re膛gu码la举rl伤yA倦mo景rp挤ho朵lo吧gi绩ca蓄l斩ch桶an耳ge翼i藏s柱of螺te硬n血th羡e射fi升rs系t优si刺gn哑o近f拜de互te顺ri拣or晕at愁io反n醋in怀c草ul叨tu纪reIn滴ve咳rt强ed步b涛ec爪au昆se恰i赌t蜂is阳n帝ot录g柔oo萝d贫to倡o泛pe风n秆ti容ss浮ue呜c潜ul马tu泥re萍d酱is锯he例s坑☺It仓s摇ho计ul犬d那ha勇ve袄p彼ha誓se疏c冈on祖tr旱as只t–区Mo叙st脸c探el俭ls劲a京re规n蔽ot宝d非en体se表e办no浅ug导h喘to砌b梢e被vi泽si吊bl径e腥in俗a糕r可eg絮ul氧ar装l号ig富ht挎w赔it冰ho浩ut纹s此ta阀in今in最g10昨/2樱00与533W撑uh扯an陷U制ni逗ve把rs注it唯y竭of愉S俯ci厘en阿ce摘a塔nd断T招ec胀hn泽ol少og悦yXi绞eH.酶标晕仪最微孔危板震拼荡器细胞他检测君设备10邻/2归00当534W汉uh崇an敢U子ni肾ve剩rs穿it身y搅of叙S闹ci梨en盲ce草a榜nd短T耀ec赌hn棕ol识og忍yXi呢eH.细胞背检测役设备柄：高速老离心议机10科/2划00维535W尾uh肝an洁U倦ni路ve旁rs桃it厦y异of敌S头ci惊en鞭ce穴a清nd炉T格ec缴hn闯ol猎og茂yXi财eH.细胞自保存设备：Eq豪ui恨pm件en王t扭fo悔rcr悬yo杂pr窃es白er细va耍ti荐on液氮Li役qu晚id想n算it熄ro灵ge追n–苹Li渗qu螺id捎p咏ha济se胆(登-1门96oC)芒o万rva脚po尖rph播as里e份(-当15击6oC)可调务节速求冻速趟率的盖容器Fa跟nc内y喝fr吴ee油zi心ng瓣c底ha裳mb链er毁s穴to旬r够eg方ul峡at歉e浙th践e袜fr排ee霞zi蜓ng关r恐at粘e–世St代yr钥of凉oa切m秧co脖nt角ai侵ne丢rs值w嘱or健k甜to枕o10袍/2只00漂536W绍uh羡an只U逐ni垫ve错rs脏it强y榴of土S江ci愿en盼ce布a泊nd令T偿ec胀hn造ol泛og忧yXi遇eH.细胞气保存降设备方：液谊氮罐10呀/2猜00走537W旅uh候an袖U冲ni槽ve劈燕rs政it渐y魄of般S听ci乔en蠢ce重a薯nd喉T初ec量hn单ol纽奉og尿yXi苹eH.CE术1-稿3细胞碧培养探的基争本技盗术10小/2营00卧538W庆uh末an屑U绪ni骗ve撤rs欧it祖y仓of洲S询ci葡en您ce之a勤nd度T两ec饺hn挖ol倦og爱yXi饲eH.实验猛室安点全培养个基的跟成分智及配冈置细胞白培养他的基估本操将作10丸/2匹00认539W涨uh峡an奏U翻ni妹ve煌rs台it搜y怨of租S霉ci稼en使ce种a狠nd察T忆ec让hn宣ol厨og谦yXi唯eH.实验崖室安朴全：制巨度1、准骡入制杠度2、安秒全制螺度3、卫枪生消珠毒制拴度4、出握入制翅度10处/2移00砖540W消uh慎an吹U翻ni沃ve勤rs牲it连y临of披S派ci值en它ce绑a认nd窃T寺ec荷hn喜ol智og夕yXi趟eH.实验结室安吐全：Ba税si恨c拥sa斑fe赠ty朝c种on迈si逼de旗ra痰ti夺on运sSa拘fe钢ty剑a湿pp傅li搜es方b搜ot戒h转wa敌ys–家Pr雁ot救ec武t喜yo庄ur纹c它el罗ls泛a允nd写p插ro属te飘ct魂y碰ou队rs抱el汗fGe急ne扣ra浑l琴sa香fe施ty盯r方ul泻esAs脱ep枣ti物c默vs魂.盗an彻ti滴se案pt愿ic酷t牛ec肥hn患iq话ue10助/2嘴00铜541W顷uh防an啦U宝ni想ve套rs雕it昼y可of阴S悟ci丘en万ce句a斧nd皂T嚷ec匠hn轧ol族og杂yXi瞒eH.实验绍室安毅全：Sa贪fe会ty判i帖ss稠ue龄sBr镰ok抛en京g越la洪ssSh霉ar删p涨in窗st累ru拖me膛nt日sEl禁ec症tr弄ic摸it走yFr鞠os姑t昏bi搭te方f冷ro地m毫li垒qu洪id太n洋it岩ro填ge丈n粥ha捷nd婶li充ngBu哈rn使s游(i款f赔yo关u悲us炼e理Bu恢ns鬼en谷b趣ur却ne眉r)Ir锻ra椒di荡at轨io鄙n薄if唤i弄so到to恰pe匠s铜ar爽e蚊us宅edIn卷fe戒ct卷io体nCh槽em读ic疾al植t愧ox掘ic争it梳yBi知oh惯az稳ar迷ds10杨/2胶00棚542W怀uh场an俘U芳ni载ve弹rs齐it昼y吨of洋S坛ci啊en匙ce播a蚕nd沿T舞ec凝hn积ol排og葡yXi镰eH.实验务室安悄全：Sa春fe企tyDi普si谨nf伍ec牢ti猾onWo锹rk六s赞ur幕fa守ce蠢s,茎c上ul偏tu协re袍w脖as帮te自a娃nd牵e肢qu格ip杀me糠nt罢m摔us或t键be泪k焦ep要t揪cl驱ea蚕n肯to定p娘re晚ve杏nt连c嫂on奔ta方mi叨na奴ti垒onHy堆po祝ch陡lo幕ri钢de卖s(b望le贷ac均h)Go拨od池g棵en盟er幼al今p周ur尖po纪se伙d君is矮in月fe扭ct蚕an哈t友Co恢rr死os姥iv窜e拖ag配ai助ns截t桶me奴ta医ls壁(构i.法e.歪,倾ce钻nt靠ri呢fu震ge倦s)Us飘e绵at泽1悔00描0pp聋mfo矛r吵ge轿ne廊ra师l膝su炎rf宋ac陶e备us谱eAl富co俘ho步l70朴%膏et兵ha恰no耻l霜or刊6叙0-臭70泪%俯fo软ris扔op霞ro熊pa眨no俱lWa圆st胶e磁di拔sp境os浮alDi紫sp晓os块e牵re呜gu忘la音rl月y,纯d丧o富no戚t谎al凡lo貌w译to叔a权cc剑um锋ul超at销e招ti期ss昆ue蛛c逝ul笼tu醋re肚w眨as敬te喷(普me考di计a,赴p强ip间et青te苏s,胆f召la述sk贝s,婆e料tc晒.)10贺/2任00竹543W趁uh绩an驻U希ni宝ve条rs涂it鸡y序of渠S涌ci窗en竿ce沈a李nd举T照ec梁hn俊ol男og右yXi河eH.实验鸽室安齿全：10天/2畏00秀544W尿uh耐an孤U逗ni绵ve免rs援it深y铅of咳S隙ci蹈en悲ce雾a闸nd温T叼ec杰hn伸ol习og茶yXi相eH.水：弓新鲜雷配置恰的三淹蒸水希或去颈离子欣水平衡指盐溶犬液：面无Ca2+、Mg2+的缓喂冲液PB舱S：Na晓Cl8.胶0跃gKC戴l0.担2科gNa2HP位O4.H2O考1.境56平gKH2PO40.柳20恳g加水狼至10佣00稳m铅l培养判基的停成分汁及配刷置10紧/2醋00糖545W坐uh锄an远U晌ni姐ve躺rs言it蜓y这of未S蔽ci叨en狗ce互a疫nd唯T蛾ec伟hn扣ol略og必yXi很eH.培养室基成辟分的段选择基本陷成分附加险成分培养铲基的元成分少及配弟置10断/2挑00箩546W查uh鸡an砌U嫌ni卸ve踩rs比it威y书of会S虚ci择en圣ce碰a纽奉nd啦T激ec棚hn侦ol代og松yXi留eH.体外背培养叠细胞侦缺乏皱抗感揭染能差力，忙所以售防止编污染膨是决瞎定培怜养成半功或戒失败缴的首扇要条挺件。竹即便缸使用章设备还完善铜的实崭验室鱼，若停实验奸者粗摩心大霞意，肤技术称操作投不规谜范,也会冒导致饭污染脆。因挺而,为在蚊一切院操作院中最幻玉大可拿能地疏保证独无菌变，每晚一项孙工作放都必犯须做宵到有俘条不痛紊和庆完全附可靠解。细胞陶培养泄的基掠本操浊作：无菌狼操作易技术10腿/2邮00奇547W乞uh太an迫U急ni产ve屑rs进it旦y启of们S方ci询en业ce娘a照nd秒T终ec邮hn宝ol先og逆yXi捐eH.消毒(d绕is司in留fe春ct忙io请n)和消制毒剂(d额is双in咏fe砍ct愚an搏t)灭菌(s厕te动ri林li悔za嗽ti嫌on目)防腐(a突nt大is遮ep晨si罗s)和防怨腐剂抑菌(ba农ct晓er袜io罪st烧as海is)和抑残菌剂(ba顶ct到er踩io居st扰at旬ic)无菌(a旦se窄ps少is酱)和无馋菌技兼术/无菌抬操作(a乏nt虹is岔ep忘ti煤c植te誓ch趣ni犹qu窜e)细胞旧培养黄的基眯本操熔作：无菌棋操作曲技术10元/2喂00理548W常uh浓an绞U兆ni寺ve锁rs弹it乖y详of祥S望ci恐en炎ce祸a哥nd警T帅ec睬hn矛ol针og峰yXi塑eH.【培养饶前准肃备】在开狗始实侍验前稀要制众定好钩实验足计划突和操窑作程守序。船有关厌数据字的计贫算要腾事先些做好司。根匪据实处验要界求，朋准备页各种阔所需登器材咏和物类品、雄清点技无误夫后将暂其放饶置操睁作场姨所(培养庙室、和超净窃台)内，义然后织开始扰消毒岂。这凝可以尝避免喂开始乘实验念后，太因物基品不前全往肾返拿懒取而甘增加父污染照机会撇。细胞延培养部的基坚本操练作：无菌邪操作漂技术10揉/2艰00济549W唐uh膨an培U以ni传ve企rs舞it惰y舒of狐S帜ci管en趁ce异a沙nd宪T发ec陆hn哗ol买og信yXi算eH.【操作弦野消垮毒】无菌蛛培养聋室每构天都品要用0.者2%的新子洁尔减灭拖磨洗地古面—次(拖布垫要专蜂用)，紫婚外线迅照射笔消毒30催-5暖0m咬in，超矮净工布作台久台面箭每次绞实验起前要潜用75％酒元精擦挎洗。蚕然后牺紫外截线消现毒30墙mi屿n。在纷工作匪台面档消毒之时切周勿将煤培养掏细胞加和培演养用扩液同丈时照固射紫菜外线情，消脂毒时谎工作型台面款上用脖品不患要过嘴多或伯重叠追放置劈燕，否痕则会茫遮挡溉射线兽降低痕消毒跑效果猎。—些操吃作用拢具如填移液假器、俘废液爷缸、楚污物志盒、李试管项架等脚用75驰%酒精喷擦洗建后置启于台拍内同陡时紫意外线情消毒尺。细胞嗓培养克的基涌本操规作：无菌炕操作胁技术10槐/2断00拼550W五uh朋an痰U燥ni泻ve茂rs酸it吹y寒of杠S悟ci怎en踪蝶ce予a馅nd停T膏ec圾hn另ol像og哑yXi苦eH.【洗手雄和着帝装】原则妙上和星外科蒙手术靠相同避。平团时仅装做观矮察不庸做培运养操端作时喂，可恰穿着蜂细胞征培养龟室内港紫外伏线照治射30敌mi责n的清江洁工县作服型。在塔利用缓超净魔台工歼作时螺，因葱整个建前臂斧要伸恩入箱矩内，校应着伟长袖催的清窄洁工罩作服恋，并悦于开兽始操掌作前喊要用75％酒指精消杰毒手攻。如愤果实草验过暴程中群手触澡及可追能污樱染的丝式物品卖和出录入培惧养室娘都要扯重新豆用消爆毒液船洗手规。进踏入原平代培路养室爷需彻愈底洗傍手还籍要戴计口罩触、着纵消毒臂衣帽保。细胞淹培养掌的基兰本操骗作：无菌更操作锄技术10羞/2随00宽551W别uh假an场U柜ni惩ve即rs伸it肾y编of偏S先ci钩en燥ce截a梨nd仙T巾ec丙hn泰ol凶og无yXi协eH.【火焰版消毒】在无宪菌环酒境进则行培锯养或预做其博它无原菌工亿作时温，首涂先要劈燕点燃宿酒精脆灯。穷以后屠一切销操作真，如乞按装粉吸管春帽、可打开器或封洲闭瓶口口等泼，都兔需在革火焰搭近处恋并经肺过烧欺灼进靠行。细胞员培养岔的基退本操苦作：无菌手操作虫技术10宝/2夜00读552W逝uh杂an管U单ni而ve辆rs全it闭y瘦of谜S种ci秋en秋ce狂a岭nd围T远ec窄hn爷ol丢og缠yXi低eH.【操作】进行董培养恳时，驻动作须要准史确敏屑捷，留但又漂不必权太快摔，以袜防空哄气流拜动，惧增加葬污染务机会常。不装能用拐手触变及已姨消毒年器皿痰，如皆已接丽触，估要用腾火焰日烧灼不消毒爆或取受备品焰更换钥。细胞奋培养贤的基剩本操维作：无菌椒操作逆技术10底/2倍00商553W缸uh封an州U闸ni谅ve缩慧rs姥it扇y巩of掘S肥ci洽en草ce辣a墓nd计T杯ec芒hn略ol权og梨yXi淋eH.细胞疯培养亲的基侦本操越作St运er委il以iz我at红io叛n剖Te承ch贩ni歼qu倡esMe础ta俭l坏-必AGl榜as败s裤-柄A,衫RPl质as姓ti屡cs紧A墙,功R,丈GMe倘di朴um迎-晚R,租FSe暗ru凳m施-撕R,钳FSa饰lt熄s幕ol常ut怎io庙ns瓜-跳A吓,签R,鉴FA-初au识to友cl夫av凤in已g,呈R互-r陡ad弯ia掠ti纲on弊,截F-缝fi肝lt用ra错ti曲on缠,协G-忧ga额s10小/2幸00筐554W站uh析an炕U其ni照ve择rs捎it补y炊of横S君ci供en宁ce残a塑nd指T阿ec致hn具ol毁og眼yXi惑eH.Fi战lt胜ra信ti毕onSt洲er方il军iz鞭at均io拣n歇of觉s远ol阻ut塘io政ns剃f雅orma吸in估te滥na锹nc桂e俊gr棋ow碑th留o且r绸tr墨ea拌tm满en徐tDo签n午ot笔a钱ut裳oc粗la祥ve环n宿ut寺ri嗓en誓t偷me棵di抖um哨—h庙ea什t付wi桑ll堵d播es志tr熄oyso桑me知o懂f游th态e漂co漏mp赤ou俭nd吨s凳in美t扎he狭m吹ed淹iu也mPa求ss威t陡hr备ou愧gh赵s旗te绞ri萍le列f暂il瓦te确r圆wi居th千s挂ma誓ll堡p镰or救e乖si净ze观(离22μm)us杯e够st需er脚il夹e野te栏ch关ni瞧qu剥es细胞第培养太的基暗本操多作10陶/2大00芽555W仪uh雕an撞U岗ni阿ve舟rs午it绿y李of桂S猜ci堪en鸽ce形a桑nd伯T票ec您hn船ol虾og哥yXi牵eH.Fi侧lt若ra歼ti慈onAl短wa寺ys拣f孔il至te产r纺th坑ro茂ug晒h膏0.鲁2竖µm堂f呜il市te切r表to隆r泛em棕ov远e紧ba刮ct握er喊ia厉(美ba盟ct书er新ia证a倒re取1利-2蛾µ执m)0.略45熔µ编m伤fi嘱lt率er浩s典re负mo律ve腹o仇nl迈y茄pa娃rt艳ic牙ul订at喉esMy期co湖pl款as被maan但d持vi会ru弊se痒s沫wi只ll差s梅ti声ll崭f费il销te单r继th糊ro命ug划hFi纠lt酒er烧s耀co志me师i磁n孕ma堵ny恶s姨iz尺es剪,述al屈l毅ar遗e处$$恶$–祝Ce桐ll牌ul授os晓e,俭p涨ol驱yc泥ar绍bo狐na陷te立,旅PT硬FE亚,抚be戏st貌a沙re使‘雹lo绿w产pr蚀ot痰ei钻n唤bi数nd冠in找g’细胞弦培养肃的基赌本操杂作10灶/2饭00猜556W及uh励an言U策ni蛇ve旁rs遗it询y狡of孟S锈ci欧en起ce尼a浪nd倦T活ec讨hn演ol搁og站yXi悼eH.１．鞋肉眼允观察旱培养眼物颜奔色及夹混浊躬度２．格倒置盛显微郊镜观宝察细愤胞生床长状坛态细胞程培养掩的基月本操隙作：游培养咏细胞御的观革察10桨/2灵00环557W迟uh晴an据U团ni快ve灶rs买it幻玉y胞of贞S假ci好en誓ce滋a充nd岩T糟ec颤hn隙ol富og惹yXi稳eH.细胞率培养拖的基肉本操耐作：单清洁重液的雀配制10胆/2座00骡558W耗uh补an蔑U舌ni蠢ve泳rs旅it装y相of漠S帆ci晒en叔ce足a萌nd术T希ec她hn察ol姥og奴yXi森eH.浸泡斜（自翁来水厉）、哭刷洗女（洗虹衣粉准）、魔酸泡驱（24小时皇）流水忍冲洗昌、蒸敞溜水丑浸泡骆和冲搅洗、50院℃烘干细胞捡培养亲的基免本操至作：观常用饺玻璃恐器皿辜清洗10柔/2至00姜559W搜uh嘱an些U戒ni赚ve裤rs畜it凭y文of抬S将ci罚en到ce抱a蝴nd菠T愧ec窃hn缺ol产og犁yXi亭eH.甚至萝可发牺生在融最好闹的实它验室Ha劳pp脉en席s极to陶e紫ve坟n墓th悠e腐be妻st句…真菌Fu洪ng费al喊-馒y贴ea浸st细菌Ba延ct蝴er件ia谎l支原扰体My盲co欺pl腊as拦ma–棋fi樱lt匀er以ab之le满b术ac明te秃ri眠a案wh害ic针h壤wi炕ll学p培as郊s贩ac指ro杰ss鞭0烧.2选µ魔m帝fi朋lt蠢er池.诊Bi崖g抽pr块ob泽le赞m.伟I坚t杏is帐t较re宾at堂ed当w庆it份h读ce登ph录al锐os胡po友ri战n稀an狸ti伏bi暂ot阿ic绒s.劝C种an怨t左ak创e蝴ov鼠er奋l毒ab富or马at吵or争ie南s.细胞旅培养雕的基贪本操录作：Co益nt犁am健in伍at懒io告n10恨/2染00偏560W荣uh牲an驰U多ni宝ve讯rs必it产y源of聚S霜ci悲en责ce致a粒nd妥T也ec误hn翁ol魔og妖yXi飞eH.Cr周yo兼pr吹es钓er讨va酒ti裁onDe袖fi社ni款ti侧on隶:st勒or枣ag不e换at敬l陕ow悔t凶em流pe忘ra壶tu宏re呜m滥os夸t档of术te卧n疗in虏l槽iq挠ui狼d伞ni参tr馋og接en阀(饶-1射