免疫组化结果判断及常见问题的分析演示文稿

免疫组化结果判断及常见问题的分析演示文稿当前第1页\共有45页\编于星期三\20点（优选）免疫组化结果判断及常见问题的分析当前第2页\共有45页\编于星期三\20点肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性，肝细胞呈不同层次阳性。当前第3页\共有45页\编于星期三\20点

panCK（AE1/AE3）在肝脏理想的染色，采用了热修复。肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。当前第4页\共有45页\编于星期三\20点一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。当前第5页\共有45页\编于星期三\20点免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER当前第6页\共有45页\编于星期三\20点当前第7页\共有45页\编于星期三\20点当前第8页\共有45页\编于星期三\20点当前第9页\共有45页\编于星期三\20点当前第10页\共有45页\编于星期三\20点当前第11页\共有45页\编于星期三\20点合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判当前第12页\共有45页\编于星期三\20点C-erbB-2优良中差当前第13页\共有45页\编于星期三\20点4321ER当前第14页\共有45页\编于星期三\20点子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR当前第15页\共有45页\编于星期三\20点编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断当前第16页\共有45页\编于星期三\20点PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析当前第17页\共有45页\编于星期三\20点P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）当前第18页\共有45页\编于星期三\20点PCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性当前第19页\共有45页\编于星期三\20点胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。当前第20页\共有45页\编于星期三\20点CD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。当前第21页\共有45页\编于星期三\20点K-rasVEGF当前第22页\共有45页\编于星期三\20点附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

当前第23页\共有45页\编于星期三\20点2、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

当前第24页\共有45页\编于星期三\20点

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

当前第25页\共有45页\编于星期三\20点当前第26页\共有45页\编于星期三\20点四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥当前第27页\共有45页\编于星期三\20点内源性生物素—肾小管当前第28页\共有45页\编于星期三\20点内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌当前第29页\共有45页\编于星期三\20点蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色当前第30页\共有45页\编于星期三\20点嗜酸性粒细胞中细胞色素显色当前第31页\共有45页\编于星期三\20点吞噬细胞内

含铁血黄素

当前第32页\共有45页\编于星期三\20点坏死组织着色：AE1/AE3当前第33页\共有45页\编于星期三\20点坏死组织着色当前第34页\共有45页\编于星期三\20点交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色当前第35页\共有45页\编于星期三\20点黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色当前第36页\共有45页\编于星期三\20点灶状着色：机械原因着色当前第37页\共有45页\编于星期三\20点CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色当前第38页\共有45页\编于星期三\20点全片着色当前第39页\共有45页\编于星期三\20点边缘着色当前第40页\共有45页\编于星期三\20点“阴阳脸”着色当前第41页\共有45页\编于星期三\20点气泡当前第42页\共有45页\编于星期三\20点非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥非特异性着色及其对策当前第43页\共有45页\编于星期三\20点无信号片CD30