兽医生物制品制造-被动免疫制品制造（兽医生物制品技术）

抗病血清的概念、机理及应用1.概念抗原注射于动物体，可刺激动物的B淋巴细胞转为浆细胞产生特异性抗体，待动物血清中积累大量抗体时，采集其血液，分离析出血清，此即含抗体的抗病血清，或称免疫血清，高免血清。抗病血清的概念、机理及应用2.种类抗菌血清、抗病毒血清、抗毒素等。抗病血清的概念、机理及应用3.作用预防和治疗急性传染病。4.机理当将有高度免疫力的抗体输入动物体后，动物就被动地获得了抗体，从而形成了免疫力，称为人工被动免疫。免疫血清具有很强的特异性，一种血清只对相应的病原微生物起作用。抗病血清的概念、机理及应用5.应用主要用作紧急预防接种，通常是在已经发生传染病或受到传染病威胁的情况下使用。优点：是注射后立即产生免疫。缺点：免疫力维持时间较短，一般仅2～3周，因此，在注射血清后2～3周仍需再注射一次疫苗，才能获得较长时间的抗传染能力。目前免疫血清仍大量生产的仅有狂犬病抗血清、破伤风抗毒素等少数几种。抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例一、实训目的熟悉鸡新城疫抗血清的制备程序，掌握鸡采血技术、血清分离技术二、实训器材鸡新城疫Ⅳ系苗、灭菌生理盐水、无菌注射器、酒精棉球，硫柳汞，无菌试管，无菌吸管，灭菌瓶等。抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例三、实训方法1.选择试验动物根据抗原种类、所用血清量的大小等实际情况选择试验动物。本实验选择健康无病的青年鸡作为试验动物，数量根据需要而定。2.抗原的制备所用抗原为鸡新城疫Ⅳ系苗。抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例3.免疫方法和免疫程序煮沸消毒注射器与针头。用消毒注射器抽取抗原（鸡新城疫Ⅱ系苗）按下列日程与剂量注射入鸡体内次数时间抗原剂量接种部位第1次第1天Ⅳ系苗5倍免疫剂量颈部皮下第2次第14天Ⅳ系苗10倍免疫剂量胸肌或腿肌抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例第21天进行试血，从鸡翼根静脉采血1毫升，分离析出血清，用血凝抑制试验检测ND抗血清效价。HI达1:128以上即可大量采血制备鸡ND抗血清。若ND小于1:128，则进行第三次免疫，方法同第二次免疫，以提高效价。抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例4.血液采集与血清提取（1）采血将鸡侧卧于水平台面上，右侧朝下，剪去胸前区的背毛，皮肤用碘酒、酒精消毒后，在从胸骨脊前端到背部下凹连接线的1／2处，用左手食指摸到心搏最明显处，右手持注射器垂直进针，刺入2-3厘米即可采得血液，并立即将所得血液以无菌操作注入一灭菌的器皿内。抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例（2）分离血清器皿内的血液放置1-2小时，待其自然凝固后，将血液吸入离心管中。血块吸入另一离心管中，4000转／分钟，离心20分钟，吸取血清部分与前面的血清混合。若血清中有红细胞，则需离心沉淀以去掉红细胞。抗病血清制造

-以鸡新城疫抗血清为例5.抗血清检验将分离血清进行无菌检验、安全检验及效价测定。6.抗血清保存向血清中加入防腐剂硫柳汞，使其浓度为0.01%。分装入灭菌瓶，用蜡封瓶口，贴上标签，注明抗血清名称，血凝抑制价及生产日期，放冰箱保存备用。卵黄抗体1.卵黄抗体的概念产蛋鸡（鸭、鹅）感染某些抗原后，其血清和蛋黄中均可产生相应的抗体。因此可以从免疫过的产蛋鸡（鸭和鹅）产的蛋黄中提取相应的抗体，该类制剂称为卵黄抗体。小鹅瘟病毒卵黄抗体、雏鸭病毒性肝炎卵黄抗体。卵黄抗体卵黄抗体2.卵黄抗体的制备流程选择产蛋鸡注射油佐剂灭活苗测卵黄抗体滴度高免蛋浸泡清洗消毒酒精棉擦拭蛋壳打取鸡蛋分离蛋黄卵黄抗体3.IBD卵黄抗体的制备（1）制造用鸡的选择选择健康的蛋鸡，隔离饲养观察l周后无特殊反应者，方可免疫。卵黄抗体（2）疫苗免疫以IBD油佐剂灭活苗对开产前或已开产的健康蛋鸡,每只肌肉注射2ml,7-10d后重复注射一次,再过7-10d再注一次,油苗剂量适度递增。第三次免疫后定期检测卵黄抗体水平,待琼扩效价达1:128时开始收集高免蛋,4℃贮存备用,琼扩效价降到1:64时停止收蛋。高免蛋合格时间大约持续一个月。卵黄抗体（3）高免卵黄抗体的制备a.高免蛋的处理用0.5%新洁尔灭溶液浸泡清洗高免蛋,再用酒精棉擦拭蛋壳。b.分离卵黄无菌操作，打开鸡蛋，分离蛋黄。卵黄抗体c.卵黄匀浆收集的蛋黄置无菌的组织匀浆器中，分装消毒瓶内，4℃冷藏备用。根据卵黄抗体琼扩效价水平加入生理盐水进行稀释(稀释后的卵黄抗体琼扩效价不低于1:16-1:32),加双抗各1000IU/ml,加硫柳汞浓度达1/万,充分搅拌后，过滤,分装于灭菌瓶内，4℃贮存。卵黄抗体（4）高免卵黄抗体的检验

每批都进行效价测定、细菌培养和安全试验，合格后方可出厂。免疫原制备免疫血清的抗原，一般是微生物体或其毒素（类毒素），或微生物的提取物等纯化的完全抗原。因此制备免疫血清所用的抗原，要根据病原微生物的培养特性，采用不同的方法生产。免疫原1.制备抗菌免疫血清所用抗原基础免疫用抗原:多为疫苗或死菌。高度免疫用抗原:一般选用毒力较强的菌株。抗原制备方法：菌株接种于最适生长的培养基,按常规方法进行培养，收获，经纯粹检查,证明无杂菌者,即可作为免疫抗原。免疫原2.制备抗病毒免疫血清所用抗原基础免疫用抗原:

可用弱毒疫苗;高度免疫用抗原:用病料脏器毒乳剂等强毒。高度免疫抗原制备方法免疫原3.制备抗毒素血清所用抗原一般多用类毒素作免疫原。而毒素或全培养物(活菌加毒素)只有在需要加强免疫刺激的情况下才应用。例：白喉抗毒素、破伤风抗毒素生产抗病血清动物的选择与管理1.动物的品种马、牛、羊、猪、兔、鸡、豚鼠、小鼠等。用同种动物生产的称同源血清，用异种动物生产的称异源血清。制备抗菌和抗毒素血清多用异种动物，抗病毒血清的制备多用同种动物。例：猪丹毒抗血清，猪瘟抗血清总的看来，制备免疫血清用马较多。生产抗病血清动物的选择与管理2.数量由于动物存在个体差异，所以选定动物应有一定的数量，一个批次至少取用2只以上动物。生产抗病血清动物的选择与管理3.年龄及健康状况年龄要求:通常选择体型较大、性情温顺、体质强健的青壮年动物为宜。健康要求:非疫区选购,并经隔离观察,确认健康者方可应用。使用前还必须经过严格检疫,呈阳性反应或可疑性反应的动物均不能使用。生产抗病血清动物的选择与管理4.动物的管理由专人负责喂养和精心管理。加强饲养管理，喂以营养丰富的饲料。在高度免疫和采血期间,每日测温两次,随时观察其健康情况。每日至少要有4h以上的运动。防止散毒。详细登记每头动物的来源、品种、性别、年龄、体重、特征及营养状况、体温记录和检疫结果等。生产抗病血清动物的选择与管理生产抗病血清动物的选择与管理血液采集与血清的提取1.血液的采集免疫动物经效价检测合格后即可采血。不合格者，再度免疫，多次免疫仍不合格者淘汰。高度免疫最后一次大剂量注射抗原后7～10天进行第一次采血。采血可以全放血(一次采集)或部分采血(多次采集)。血液采集与血清的提取多次采血者，第一次采血时采血量按每千克体重采血约10ｍl，经３-５天第二次采血，按每千克体重采８-１０ｍl。第二次采血后经2-3d，注射足量免疫原。如此循环注射免疫原和采血。全放血在最后一次高免之后8-11d进行。采血前，动物禁食24h，但需饮水以防止血脂过高。血液采集与血清的提取一次放血方法

绵羊或其他大动物可用颈动脉放血，家兔、豚鼠和鸡则可通过心脏直接采血。多次采血方法

大动物可通过静脉采血，家兔、豚鼠和鸡等小动物可通过心脏采血。注意事项①实施无菌操作②采血时不加抗凝剂血液采集与血清的提取2.血清的提取（1）自然凝结加压法将血液采入玻璃容器内，于室温下自然凝固，待血清自然析出。为了有助于血清析出，在凝血块上可加以灭菌的不锈钢压砣。用无菌滴管吸取自然析出血清，于3000r/min离心15min，取上清液，放入灭菌瓶中。血液采集与血清的提取（2）枸橼酸盐血浆分离血清法按每1000ml血液加入10%的枸橼酸