实验培养基的配制

重要考点3：培养基的配制组内合作：1、说出培养基配制流程；2、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用灭菌方法。当前第1页\共有25页\编于星期三\22点1、计算2、称量当前第2页\共有25页\编于星期三\22点3、熔化4、调节pH当前第3页\共有25页\编于星期三\22点5、分装当前第4页\共有25页\编于星期三\22点6、灭菌当前第5页\共有25页\编于星期三\22点灭菌——高压灭菌1.05kg/cm2、121℃，15—30min灭菌锅高压灭菌作用：杀死所有活的微生物及芽孢当前第6页\共有25页\编于星期三\22点（补充：倒“平板”）超净工作台当前第7页\共有25页\编于星期三\22点倒平板约50℃防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基当前第8页\共有25页\编于星期三\22点7、恒温培养（恒温培养箱）当前第9页\共有25页\编于星期三\22点培养基的配制

称量

熔化

灭菌

调节pH

分装加热熔化琼脂（搅拌）倒入三角烧瓶，与其他器具一起放入灭菌锅高压灭菌定容调节PH至计算恒温培养当前第10页\共有25页\编于星期三\22点（一般需要作无菌检查）核心：保证无菌操作超净工作台超净工作台、酒精灯火焰旁操作当前第11页\共有25页\编于星期三\22点分析与讨论1、如何检验培养基是无菌的？2、常用灭菌方法有哪些？将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条件下培养2-3d，如果无菌落产生，则培养基是无菌的。高压（蒸气）灭菌灼烧灭菌用于培养基、培养皿、锥形瓶等用于接种环等金属器具当前第12页\共有25页\编于星期三\22点3、消毒与灭菌的区别（1）消毒（如巴氏消毒法62℃，30min、酒精擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。（2）灭菌（高压灭菌1.05kg/cm2、121℃、15-30min；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微生物及其芽孢。当前第13页\共有25页\编于星期三\22点微生物重点实验2——微生物的培养掌握划线法接种方法与作用当前第14页\共有25页\编于星期三\22点单个菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。3.功能：1.定义：补充：菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体菌落是由单个细胞分裂形成的种群当前第15页\共有25页\编于星期三\22点常用工具图示接种环玻璃刮铲当前第16页\共有25页\编于星期三\22点微生物（如大肠杆菌）的培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算2.称量3.熔化4.调节pH5.分装6.灭菌7.恒温培养当前第17页\共有25页\编于星期三\22点二.大肠杆菌的培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡培养大肠杆菌：（超净工作台上、酒精灯火焰旁进行）划线法菌种1.接种：接种环划线法接种冷却后刮取菌苔划线法接种：使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落当前第18页\共有25页\编于星期三\22点枯草杆菌菌落菌落灰白色，较大，边缘比较粗糙大肠杆菌菌落菌落灰白色，圆形，透明或半透明滕黄八叠球菌菌落菌落黄色，圆形、边缘光滑当前第19页\共有25页\编于星期三\22点问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上的微生物污染培养物杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时接种物逐渐稀释，培养后得到单个菌落。避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。当前第20页\共有25页\编于星期三\22点划线法二.大肠杆菌的培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡培养大肠杆菌：1.接种：2.培养：将接种后的平板倒置放入37℃恒温箱中培养2～3d当前第21页\共有25页\编于星期三\22点Q：为什么划线法接种能观察到单个菌落？划线法接种时，使接种物逐渐稀释，最后出现单个细菌，培养后出现单个菌落。要获得单菌落一般选用_______法接种划线划线法优点：可对微生物进行分离、纯化，获得单一菌落当前第22页\共有25页\编于星期三\22点1、鉴别培养基是否被杂菌污染的方法是（）A.将未接种的培养基放在实验桌上培养B.将未接种的培养基放在窗台上培养C.将未接种的培养基放在恒温培养箱中培养D.将已接种的培养基放在恒温培养箱中培养C试一试2、要将配制好的培养基进行灭菌，通常采用的方法是（）A.灼烧灭菌B.高压蒸气灭菌C.干热灭菌D.煮沸灭菌B当前第23页\共有25页\编于星期三\22点B试一试3、下列对于灭菌和消毒的理解，不正确的是（）A.灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B.消毒和灭菌实质上是相同的C.接种环用灼烧法灭菌D.常用的灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸气灭菌等当前第24页\共有25页\编于星期三\22点4、培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是（）