实验一薄层层析板的制备

试验一薄层层析板的制备一、试验目的制备薄层层析板，使叶绿素在层析板上分别显色。二、试验原理薄层层析，常用TLC〔Chromatography〕表示，又称薄层色谱，属于液一固吸谱的优点。一方面适用于小量样品〔0.01卩g〕的分离；另一方500mg的样不能用气相色谱分析的物资。粒大小，一般要求直径为10 40卩刃硅胶是无定形多孔性物质，略具酸性，适用于酸性物质的分别和分析。薄层色谱用的硅胶分为： “硅胶H“—不含粘合剂；“硅胶G”一含焜石膏粘合剂；“硅胶HF254”一含荧光物质， 可用于波长为254nm紫外光下观看荧光；“硅胶GF254”一既含锻石膏又含荧光剂等类型。粘合剂除上述的锻石膏〔半水合硫酸钙：

2CaSQHQ〕夕卜，还可用淀粉、竣甲基纤维素钠。三、试验材料、器具1、试剂硅胶、4%。的CMC溶液〔竣甲基纤维素钠〕2、试验用具：药匙、研钵、载玻片、量筒、玻棒1干净。〔干净的标准：水不是呈股流下，而是呈瀑布状态流下。〕2、与硅胶混合：CMC—Na3:1〔3ml:1g〕。取CMC—Na溶液下，以赶尽气泡为佳。3、铺板：将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片外表。铺板板上，倒时也要留意不要引入小气泡。尤其是载板的四个角，简洁高出玻璃板其他部位〔3g7.5x2.5cm5-6块〕4、晾干：置水平台上于室温下晾干。5105C30min，然后取出，放入枯燥器中，备体。通过活化硅胶，主要转变了硅胶内部的微孔构造，使其孔径的大小及难。下面先介绍一下配置方法：CMC—Na溶液的配置：一般其浓度为0.3 0.5%，依据自己阅历而定〔我习惯用 0.4%使之溶解，即得。

60 70C,CMC—Na，边加边搅拌，与硅胶混合：CMC—Na3:1CMC—Na溶液倒卜-而上，然后自上而下，以赶尽气泡为佳。

”按一个方向研磨3铺板：手动或机械。手动铺出的板的薄厚与所加的混合后的硅胶量有矢，而机械铺出的板的薄厚 所选用的钢板有尖， 可依据需要来定。但此过程中最尖键的是板子边缘铺得好坏，手动铺板确定要将玻璃板边缘硅胶涂匀 〔我习惯用两头掂法，即板下方的中间垫一物体，两头悬空，两手均匀掂动〕。而机械铺板要留意板与板之间平坦性， 或者由高到低排列。4晾干：自然晾干。5105C30min，取出，放入枯燥器中，备用。这是试验室和检验室薄层层析板常用的制备方法之一，供大家参考！层析英文名称：chromatography1:基于不同物质在流淌相和固定相之间的安排系数不同而将混合组分分别的技术。当流淌相〔液体或气体〕流经固定相〔〕备。2：质，在流淌相和固定相之间进展分别的一种生物化学技术。层析〔chromatography〕是“色层分析”的简称。利用各组分物理性质的不同，将多的区分力在把微细分散的固体或是附着于固体外表的液体作为，把液体〔与上述液体不相混合的〕或气体作为移动相的系统中，使试料中的各成分边保持向两相分布的平衡状态边固定相的有、、氧化铝、树脂、离子交换纤维等，或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体，也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入瘦长形 筒中进展的层析称为〔colum或是在硅藻土和纤维素那样的无活性的载体上附着适当的液体，也可使用其他物质。将作为固定相的微细粉末状物质装入瘦长形 筒中进展的层析称为〔column涂上一层薄而均的物质作为固定相的称为薄层层析〔thin-layerchromatography〕，后器中，使移动相〔液体〕斑点状移动到各自的位置上，再依据Rf值的测定进展鉴定。当斑点不易为肉眼观看种移动相开放后再用另一移动相进开放放〔这时的开放方向应与原方向垂直〕，使各成分分别完全的双相层析〔two-dimensionalchromatography〕。分别后、后，连续开放使各成分和移动相一起向柱外分别溶出，这就是广泛使用的所谓洗提层析〔elutionchromatography〕。层析依据固定相与〔试料〕间亲和力的差异分为吸附型、安排型、离子交换型〔换层析〕用亲和层析，马上与基质类似的〔通常为共价键〕和性沉淀与其对应的特定的酶或蛋白质。按层析的机理划分：吸附层析、安排层析、离子交换层析、、层析等。析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。:利用某些凝胶对于不同分子大小的组分阻滞作用的不同。♦按流淌相与固定相的不同划分：相，划分为：、气液层析、和液液层析等。♦按操作形式划分：柱层析、纸层析、薄层层析、高效液相层析等。纸做液体的载体，点样后，用流淌相开放，以到达分别鉴定的目的。和鉴定。层析，纸层析是一种安排层析，柱层析可做各种层析。根本原理层析须在两相系统间进展。一相是固定相，需支持物，是固体或液体。另一相为流动相带，这个过程叫展层。系数K是物质在两相中的浓度比。K值大，则在固定相中吸附牢，K值小吸附差。各物质间的K值差异大，则易被分别。不同类型层析的义不同，可视为吸附平衡常数，安排常数或离子交换常数等。

K值含来，到达纯化的目的。在层析时用理论塔板数能。

n来衡量层析效tR为物质在上的保存时间，W为洗脱下来的物质峰形的宽度。表示层析柱的效能愈高。如用 H表示， 则包含了层析柱长度的因子。式中L为层析柱的柱长。H值越大，则柱效越低。

n值愈大好层析的尖键几种常用的层析吸附剂的吸附力强弱，是由能否有效地承受或供给，或供给和承受活泼氢来决少用于无丙酮、乙乙酯、醸、氯仿、苯、和己烷等。为了能得到较好的分别效果，常用两种或效果。溶解，但安排比率不同，展层时就会形成以不同速度向前移动的区带。纤维素、离子交换凝胶等。带阳离子基团的，如磺酸基〔一S03H、竣甲基〔一CH2C00〕和磷酸基等为阳离子交换剂。带阴离子基团的，如DEA-〔二乙基胺乙基〕和QAE-〔四级胺乙基〕等为阴离子交换剂。离子交换层析只适用于能在水中解数，K值愈高，被吸附愈牢。洗脫时，增加溶液的离子强度，如转变 pH，增加盐浓度，离子被取代而解吸下来。洗脫过程中，按区带。♦凝胶过滤层析

K值不同，分成不同的方法曾被称为分子筛。目前常用的凝胶商品有：凝胶〔sephadex〕、凝胶〔bio-gel〕、凝胶〔sepharose〕和凝胶〔styragel〕等。♦素等。♦属于安排层析或吸附层析，仅适用于分析分别性和低挥发性物质。固定相是在惰性支持物〔如磨细的〕上掩盖一层高沸点液体，如硅油、高沸点和油脂、环氧类聚合物。外涂层约为支持物重量的 20%。分析时操作温度范围，一般从室温到200C。特别的层析柱能到达500C。流淌相常用氨、氮或氮为展层气体。气相层析分别的区带格外清楚，是由于挥发性物质在两相间能很快达到平衡，所需分析时间大为缩短，一般为数分钟至 10余分钟。检测记录系统绘出的各峰是测定流出气体电阻变化的结果，因而测定样品量可到微克和毫微克水平。具有快速、灵敏和微量的优点。气相层析也能用于分别制备样品，但需增加将流出气体通过冷冻将分别物回收的装置。可做单向层析。对于简洁的混合物，可做。

1944年A.J.P第一次用纸层析分析氨基酸，得到很好的分别效果，开创了近 代层析的发展和应用的局面。

70年月以后，纸层析已渐渐为其他区分力代替。在玻璃片、金属箔或塑料片上铺上一层约 1 2毫米的支持物，如纤维效果。如用薄层层析做，一般约需半小时，分别效果更好。薄层层析一般用于定性分析。也能用于定量分析和制备样品。〔又名〕70年月进展的层析法。其特点是：用高压输液泵，压强最高可达5000psi〔相当于34个〕。用直径约3 10微米的超细支持物装填均匀的不锈钢柱。常用的支持物是在玻璃小珠上涂一层应生成Si—C， 进一步连接疏水的烷基，

1 2微米的，经硫酰氯反Si—C18H37,或阳离子交换基团一Si〔CH2n—C6H4SO3H或阴离子交换基团一Si〔CH2nNH2这不中支持物能承受很高的压力，化学性能稳定。用不同类型支持物的吸附层析、离子交换层析和凝胶过滤层析。其分析微量化可达

HPLC可做10-10克水10

HPLC适于分析分别不挥层析法。

HPLC配有程序把握洗脫溶剂的梯度混合仪，数据处中发挥了重要作用。好的分别效果。这种层析法与一般的相反，故称为反相层析。目前用HPLC做反相层析常用的ODS柱，C18H37Si—基团。在核酸分析中，将样品经局