ABO及Rh血型鉴定-课件

实验一ABO血型鉴定

Rh血型鉴定

临床检验基础与输血教研室1ppt课件实验内容

一、5%红细胞悬液的配制

二、ABO血型鉴定（试管法、纸片法及微柱凝胶法）三、Rh血型鉴定及阴性确认试验?2ppt课件一、5%红细胞悬液的配制

原理：使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，为了遵循抗原抗体结合的量比关系，获出最佳结果。器材:

小试管（玻璃及塑料皆可）、滴管、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂:

生理盐水。标本:

抗凝或非抗凝静脉血。

3ppt课件操作1、全血2ml

1000g离心3min，分离上清（备用）；2、压积加生理盐水约2～3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液；3、重复洗涤红细胞3次，去掉上清液制备压积红细胞；4、取1滴压积红细胞于1支干净的小试管中，在其中加入19滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%的红细胞悬液。红细胞盐水悬液用前制备，用ACD（橼酸-枸橼酸钠-葡萄糖）溶液保存最长可保存1周。4ppt课件目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO血型。正定型：用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B）来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。二、ABO鉴定

5ppt课件6ppt课件器材:

记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、载玻片、显微镜。试剂:1.ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B)；2．试剂红细胞：3％～5％Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本:

抗凝或非抗凝静脉血。7ppt课件（一）试管法操作(1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A、－B；反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞：洗涤3次，取管底压积1滴加19滴生理盐水。(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4）离心：3000r／min离心15秒（1000×g）。

(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象。8ppt课件表lABO血型正反定型结果试剂血清+受检红细胞

受检血清+试剂红细胞

（正定型）

（反定型）-A-B受检血型AcBc

Oc

＋

－ A －

＋

－－

＋ B ＋

－

－－

－ O ＋

＋

－＋

＋ AB －

－

－判断标准9ppt课件

4+

红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3+

红细胞凝集成大小块，血清清晰。

2+

红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。

l+

肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。mf

混合凝集外观,指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。－阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准10ppt课件试管法结果判定附：评分判断标准4+：12分；3+：10分；2+：8分；l+：5分；±：2分；mf：1分；－：0分11ppt课件（二）玻片法或鉴定纸板法操作

(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者3％～5％红细胞悬液l滴，混匀。(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板)，使血清与细胞充分混匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。

12ppt课件正定型反定型13ppt课件（三）微柱凝胶血型检测卡法原理：凝胶分子筛和亲和效应微柱凝胶柱中填充凝胶（葡聚糖），及相应试剂（抗体或抗原）。凝胶分子间的间隙只允许游离红细胞通过，分子排阻层原则将发生凝集反应的红细胞阻滞于凝胶之内，而未凝集的游离红细胞则穿过微孔运动到管底，从而判定有无凝集反应。14ppt课件

操作

1.准备检测卡，标记2.分别滴加0.05ml1%受检者红细胞悬液相应孔中。3.专用卡式离心机离心（先900g,2min；再1500g,3min；或按说明）。4.观察结果。15ppt课件结果判定阳性：红细胞特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。反应强度：特异性红细胞抗原抗体复合物位于胶表面，为强阳性反应；复合物在胶中为弱阳性反应；愈靠近胶底部凝集颗粒愈小，反应愈弱。阴性：被检红细胞无相应的抗原与抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。16ppt课件新乡医学院第三临床检验教研室结果判定17ppt课件注意事项1.试剂2.悬红3.蛋白4.溶血5.冷抗体6.老年、儿童7.污染18ppt课件目的

掌握Rh血型鉴定的原理、方法。原理

Rh血型系统，包括40多种抗原，通常使用相应的抗C、抗c、抗D、抗E、抗e五种Rh分型血清来检查红细胞抗原。在临床输血中一般只做D抗原的鉴定，被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性，不凝集者为Rh阴性。三、Rh血型鉴定19ppt课件器材小试管、滴管、试管架、记号笔、载玻片、显微镜、离心机。试剂1.Rh抗血清：常用的为IgM抗抗D（其他为抗C、抗c、抗E、抗e）。2.己知Rh阳性和阴性的5％红细胞悬液各1份。3.盐水溶液。标本静脉血。20ppt课件操作(盐水试管测试法)1.取单克隆抗-D（IgM）、-C、-c、-E、-e试剂各1滴到5支试管中。2.每管各加1滴3％～5％待检红细胞悬液。3.充分混匀，以1000g离心15秒。4.观察结果：轻摇散开试管底部的细胞扣，用肉眼观看凝集。5.判定结果。21ppt课件22ppt课件Rh(D)阴性确认试验（只讲不做）方法：试管法、微柱凝胶法原理：间接抗人球蛋白试验操作（试管法）试剂1.三种批号（或三个厂家）IgG抗-D试剂血清，标记1、2、32.Rh(D)阴性、Rh(D)阳性红细胞悬液标本：洗涤三次的待检红细胞悬液23ppt课件操作1.五支小试管，标记检1、检2、检3、阴、阳对照。2.三支检测管：滴入IgG抗-D试剂1滴，对照管滴入任一种IgG抗-D试剂。3.三支检测管各滴入被检红细胞悬液1滴，对照管分别按标记滴入Rh(D)阴性、Rh(D)阳性红细胞悬液1滴。4.混匀，置37℃水浴箱30min。5.洗涤三次，最后一次吸净管口生理盐水（扣干）。6.各管滴加1滴抗人球蛋白试剂，混匀，1000g离心15s7.轻轻摇动试管，观察结果。24ppt课件检测管1检测管2检测管3阴性对照管阳性对照管IgG抗-D11～2滴IgG抗-D21～2滴1～2滴1～2滴IgG抗-D31～2滴待检悬浮红细胞1滴1滴1滴Rh(D)阴性红细胞悬液1滴Rh(D)阳性红细胞悬液1滴混匀后置37℃水浴箱30分钟,洗涤3次滴加1滴抗人球蛋白试剂，混匀，1000g离心15秒具体步骤25ppt课件注意事项1．用抗D血清进行Rh血型鉴别时，结果为阴性，不能直接报告Rh阴性，需进一步检测。应进一步鉴别是弱D型还是部分D型。