高效液相色谱法测定化妆品中苯扎氯铵

高效液相色谱法测定化妆品中苯扎氯铵张鹏祥;曹蕊;高晓^;尹家振;张明明;赵华【摘要】采用高效液相色谱法测定化妆品中苯扎氯铵的含量.色谱条件为:AgilentZorbaxCN柱(250mmx4.6mmi.d.,5pm),流动相为V(乙月青)：V(0.1mol-L-1醋酸铵缓冲溶液(冰醋酸调pH=5.0))=70：30的混合溶液流速1.0mL-min-1,检测波长260nm,柱温25°C,进样量20".结果表明，该方法的检出限为130凹・g-1,线性范围为5~100mg-L-1,回收率为92.0%-110.6%,RSD为0.32%-2.10%.%Ahighperformanceliquidchromatographicmethodwasestablishedforthedeterminationofbenzalkoniumchlorideincosmetics.ChromatographyseparationwascarriedoutonaAgilentZorbaxCNcolumn(250mmx4.6mmi.d.,5pm),usingacetonitrilewith0.1mol-L-1ammoniumacetate(70:30volumeratioandpHadjustedto5.0byglacialaceticacid)asmobilephase.Theflowratewas1.0mL•min-1andthecolumntemperaturewas25C.Detectionwascarriedoutat260nm.Thelimitofdetectionis130pg•g-1.Linearplotrangesbetween5~100mg•L-1.Averagerecoveriesare92.0%-110.6%withrelativestandarddeviationsof0.32%~2.10%.【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷)，期】2012(042)003【总页数】4页(P230-233)【关键词】化妆品;苯扎氯铵;高效液相色谱法【作者】张鹏祥漕蕊;高晓^;尹家振涨明明;赵华【作者单位】北京工商大学理学院，北京1000148；国家食品药品监督管理局保健食品审评中心，北京100070;北京工商大学理学院，北京1000148;北京工商大学理学院，北京1000148;北京工商大学理学院，北京1000148;北京工商大学理学院，北京1000148【正文语种】中文［中图分类】TQ658苯扎氯铵，中文别名为洁尔灭，是由正烷基取代的二甲基苄基氯化铵（［C6H5CH2N（CH3）2R］Cl）的同系物组成，这些正烷烃基R分别为C8H17，C10H21，C12H25，C14H29，C16H33和C18H37［1-2］。其中最常用也是最主要的成分为十二烷基二甲基苄基氯化铵（以C12表示，下同）、十四烷基二甲基苄基氯化铵（C14）和十六烷基二甲基苄基氯化铵（C16）［2-5］。苯扎氯铵作为限用物质，在我国《化妆品卫生规范》（2007年版）［6］中作了限量规定：淋洗类护发用品中，最大许可用量为3%（质量分数，下同），特别要求如果成品中使用的苯扎氯铵的烷基碳数等于或小于14,则其使用量不得大于0.5%；其他产品中，最大许可用量为0.1%。以往检测苯扎氯铵的方法主要有滴定法［7-8］、紫外分光光度法［9-10］、毛细管电泳法［11-13］、液相色谱-质谱法［14-16］和示差分光光度法［17］等，其中滴定法和紫外分光光度法只能测定苯扎氯铵的总含量，毛细管电泳法操作较复杂，液相色谱-质谱法成本较高，而示差分光光度法需要发生一些衍生化反应，且操作较繁琐、费时。目前检测苯扎氯铵最常用的方法是HPLC法［4,18-21］，且多采用C18或C8色谱柱，但其特异性和峰形均较差，易造成假阳性，而且多用于检测药品如眼药水和鼻制剂中的苯扎氯铵的含量，因为这2种药品的成分较简单而易于测定，且前处理方法也较为简单。但化妆品中成分较复杂，干扰因素较多，故需要对之前的HPLC法加以调整以使其适用于对化妆品中苯扎氯铵的检测。作者采用氰基柱检测化妆品中的苯扎氯铵，以期建立一种简便、快速的HPLC法来检测化妆品中的苯扎氯铵。1实验部分1.1主要试剂与仪器乙腈，色谱纯，德国Merck公司；醋酸铵，色谱纯，美国Mreda公司；十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵，纯度＞99%(TLC)，美国Sigma公司；十六烷基二甲基苄基氯化铵，纯度为99%，美国Sigma公司；色谱用水。Waterse2695高效液相色谱仪(配PAD二极管阵列检测器)，美国Waters公司；微型涡旋混合仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司；超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；CP224S分析天平，德国赛多利斯公司。1.2色谱条件色谱柱为AgilentZorbaxCN柱(250mmx4.6mmi.d.,5pm)；流动相为V(乙月青)：V(0.1mol-L-1的醋酸铵缓冲溶液(冰醋酸调pH=5.0))=70:30的混合溶液；流速为1.0mL-min-1；检测波长为260nm；柱温25°C；进样量20pL。1.3标准溶液的配制及样品处理精密称取C12,C14和C16各0.05g，精确到0.0001g,置于50mL棕色容量瓶中，用乙青溶解并定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为1g-L-1的标准储备溶液。准确称取试样0.5g，精确至0.001g,置于25mL具塞刻度管中，加入20mL乙青，涡旋1min，振摇，400W超声提取30min，取出后冷却至室温后滴加乙青至25mL刻度处，混匀，经0.45pm滤膜过滤，滤液作为待测样液，备用。1.4定性定量分析采用标准物质的保留时间和峰扫描光谱纯度对照2种方式对样品峰进行定性，以夕卜标法定量。2结果与讨论2.1色谱条件的选择2.1.1检测波长的确定分别配制一定质量浓度的C12,C14和C16的乙腈溶液，分别进行紫外全波长扫描，发现3种物质最大吸收波长均在210和260nm左右，但是在210nm处很多物质包括溶剂均有吸收，而且化妆品成分复杂也容易在此造成干扰。故采用260nm为检测波长。2.1.2流动相的组成及缓冲体系分别采用甲醇、乙腈作为流动相的有机相考察检测效果。结果表明，乙腈的效果明显优于甲醇，乙腈所占比例的大小只影响保留时间，最后选择乙月青的比例为70%（体积分数）。实验采取加入醋酸铵-醋酸的缓冲液体系来优化色谱峰，减少拖尾。对比了醋酸铵溶液的浓度分别为0.075和0.1mol-L-1时对色谱峰的影响，发现浓度的大小只是改变色谱峰的保留时间，如图1所示。在尽量保护色谱柱和减少检测时间的基础上，最后选取醋酸铵的浓度为0.1mol-L-1。流动相的pH对色谱峰保留时间没有影响，苯扎氯铵是一种弱碱性物质，保持流动相的适当酸性可有效检测苯扎氯铵，故选用醋酸调pH=5.0。c（醋酸铵）/（mol・L-1）:a0.075;b0.1图1流动相中缓冲盐浓度对色谱图的影响Fig.1Effectofconcentrationofmobilephasebufferonchromatogram2.2样品预处理条件的选择在样品预处理过程中，利用正交试验，确定了样品预处理的最佳条件为：超声时间为30min，超声强度为400W，超声提取时溶剂加入量即料液比（g：mL）为1:40，定容后料液比为1:50。2.3线性关系精确移取50,100,300,500,800和1000pL苯扎氯铵标准储备溶液置于10mL棕色容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀。此时溶液中苯扎氯铵的质量浓度分别为5,10,30,50,80和100mg-L-1，在选定的色谱条件下，分别取20pL进行色谱分析。以峰面积Y为纵坐标，质量浓度X为横坐标，绘制标准曲线，得到3个线性回归方程：Y=1083X-176.2,r=0.9997;Y=975.1X-670,r=0.9999;Y=906X-749.5,r=0.9996。线性回归方程及相关系数表明，苯扎氯铵在5~100mg-L-1内线性关系良好。进行空白样品添加苯扎氯铵标准溶液试验，以信噪比(S/N)为3确定3种苯扎氯铵同系物的检出限，测得检出限为130pg・g-1。以S/N为10确定3种苯扎氯铵同系物的定量限，测得定量限为435pg-g-1o2.4精密度实验分别移取质量浓度为10.0和80.0mg-L-1的苯扎氯铵标准溶液，每种质量浓度同—日内测定6次，从第1次开始起每2h测定1次，每次测定连续进样6次，得到苯扎氯铵3种同系物成分的面积响应值的彼此符合程度RSD。另分别移取质量浓度为10.0和80.0mg-L-1的苯扎氯铵标准溶液，每种质量浓度每天测定6次，连续测定3d;从第1次开始起每2h测定1次，每次测定连续进样6次，得到苯扎氯铵3种同系物成分的峰面积响应值的彼此符合程度RSD，结果见表1。由表1可知，苯扎氯铵3种同系物成分的日内和日间精密度均良好。表1日内和日间精密度(n=6)Tab.1Within-dayanddaytodayprecisions(n=6)p/(mg・L-1)成分RSD/%日内日间C121.401.6910.0C141.211.88C161.121.24C120.310.6680.0C140.450.94C160.270.442.5回收率回收率实验采取在已知苯扎氯铵质量分数(1%)的基质样品中加入已知质量浓度的苯扎氯铵标准溶液，按1.3方法处理后，利用选定的色谱条件进行分析，结果见表2。由表2可知，3种同系物的回收率为92.0%~110.6%，满足分析要求。表2不同基质中苯扎氯铵同系物的回收率(n=3)Tab.2Resultsofrecoveryofdifferentsampleswithbenzalkoniumchloridehomologues(n=3)基质种类添加量/%成分平均回收值/%平均回收率/%RSD/%乳状基质水剂基质0.050.500.050.50C121.0511102.11.02C141.046192.01.10C161.049298.41.12C121.462292.40.46C141.464092.80.32C161.454590.90.38C121.0520104.41.87C141.0553110.62.10C161.0545109.01.56C121.5292105.80.45C141.5365107.30.42C161.5305106.10.362.6实际样品分析按照建立的HPLC法检测了10种不同剂型的化妆品实际样品，5种阳性样品中有4种样品的苯扎氯铵质量分数分别为0.5%,0.05%,0.05%和0.025%，另外1种低于检出限；阴性样品5种，结果未检出。其中3种阳性样品的HPLC图如图2所示。图23种样品高效液色相谱图Fig.2Chromatogramsofthreecosmeticsamples3结论建立了一种HPLC法来检测化妆品中的苯扎氯铵，方法具有良好的精密度、准确性和重现性，简便、快速，可为国家化妆品的质量监管起到一定的参考作用。参考文献：[1]PINZAUTIS,BAMBAGIOTTI-ALBERTIM,MONETIG,etal.Determinationofbenzalkoniumchlorideincontactlenssolutionsbypositive-ionfastatombombardmentmassspectrometry[J].JournalofPharmaceutical&BiomedicalAnalysis，1989，7(12):1611-1616.[2]叶妙华.苯扎氯铵两种HPLC方法的比较与选择[J].亚太传统医药，2010,6(6):23-25.[3]丁晓静，车宜平，刘丽萍，等.反相高效液相色谱法测定复方化学消毒剂中苯扎氯铵含量的不确定度评定[J].化学分析计量，2006,15(4):7-9.[4]丁晓静，车宜平，赵海燕，等.反相高效液相色谱法测定复方化学消毒剂中苯扎氯铵[J].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