【课件】微生物的基本培养技术课件高二下学期生物人教版选择性必修3

二

微生物的选择培养和计数科学实例寻找耐高温的DNA聚合酶被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应（PCR）思路：耐高温的酶耐高温生物体高温环境（eg热泉、火山口等）寻找寻找美国黄石公园热泉启示：

根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。（eg耐寒微生物、石油分解菌、尿素分解菌、纤维素分解菌等）实验室筛选的原理：

人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。科学实例选择培养基选择培养基鉴别培养基伊红-美蓝指示剂刚果红指示剂选择培养基配方的设计CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH3讨论：1.在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能生长发育繁殖。2.除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。如何确定选择培养基有选择作用？实验思路：

设置基础培养基（eg牛肉膏蛋白胨培养基）或完全培养基作为对照，若基础培养基或完全培养基中生长的菌落数均多于该选择培养基，则该选择培养基具有选择性。微生物的选择培养土壤取样

注意：①一般要铲去表层土，取距地面3～8cm的土壤层；②取土样的工具和纸袋在使用前都需要灭菌。1mL1mL1mL1mL1mL1mL9mL无菌水90mL无菌水10g梯度稀释菌液101102103104105106107滴加菌液涂布器灭菌注意：①将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；②不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。培养与观察

待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d。在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。注意：实验前最好将培养皿做好标记，

eg组别、日期、稀释度等稀释涂布平板法微生物的数量测定1.稀释涂布平板法——活菌计数法

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。(1)原理(2)统计原则①

一般选择菌落数为30～300的平板计数。②

在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。(3)计算1.稀释涂布平板法——活菌计数法请计算：4号试管的结果表明每克土壤中的活菌数约为

。1.1×108(4)结果分析统计的菌落数＜＜活菌的实际数目原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。1.稀释涂布平板法——活菌计数法2.显微镜直接计数法

利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量。(1)原理对细菌等较小的细胞进行观察和计数较厚，常用于相对较大的酵母菌细胞、霉菌孢子等的计数。2.显微镜直接计数法(2)优点快速、直观(3)缺点①统计结果一般是活菌数和死菌数的总和偏大②不适于对运动细菌的计数归纳拓展《导》P77探究·实践土壤中分解尿素的细菌的分离和计数5.进一步探究CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH3呈碱性，遇酚红指示剂呈红色方法：在培养基中加入酚红指示剂，尿素分解菌周围会形成红色圈。刚果红指示剂纤维素