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文档简介

第二节基因工程的

原理和技术基因工程的基本操作程序1、获得目的基因2、形成重组DNA分子3、将重组DNA分子导入受体细胞4、筛选含有目的基因的受体细胞5、目的基因的表达剪切拼接导入筛选表达目的基因的序列未知1、从基因文库中获取目的基因的序列已知—化学方法合成利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增人工合成一、获取目的基因的常用方法：

1、基因文库的构建——直接分离法（或鸟枪法）该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。2、利用PCR技术扩增目的基因

聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。PCR扩增仪氢键断裂，形成单链DNA。引物与DNA模板结合，形成局部双链。在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。多次循环，获得大量双链DNA分子。PCR技术扩增目的基因的mRNA逆转录单链DNA合成双链DNA（目的基因）蛋白质氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列推测结构基因的核苷酸序列化学合成目的基因化学合成法逆转录法根据已知氨基酸序列直接合成DNA二、形成重组DNA分子——

核心质粒DNA分子限制酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同种一个切口两个黏性末端思考：得到的一定是重组DNA分子吗？目的基因与质粒的连接思考：如何防止质粒或目的基因自身环化呢？基因两端用不同的限制性核酸内切酶切割，并用同样的酶切割质粒三、将重组DNA分子导入受体细胞（1）常用的受体细胞：有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。探究：转基因过程中，怎样选择受体细胞？

转基因植物——

转基因动物——

转基因微生物——植物体细胞或受精卵受精卵大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌等将目的基因导入微生物细胞受体细胞：细菌氯化钙

细胞壁的通透性增大重组质粒进入受体细胞目的基因随受体细胞的繁殖而复制将目的基因导入动物细胞显微注射技术提纯基因表达载体体外显微注射入受精卵受精卵移植将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法思考：重组DNA分子一定能导入受体细胞吗？探究：如何把导入了目的基因的受体细胞筛选出来？思考：能在选择培养基上生长的就只有接受了重组质粒的细胞吗？分子杂交技术表达检测转录检测——DNA分子杂交翻译检测——抗原-抗体杂交分子检测法抗虫鉴定抗病鉴定活性鉴定等个体水平的鉴定探究：目的基因是否表达呢？分子杂交技术知识延伸——DNA分子杂交技术

该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链DNA解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或化学发光催化剂等进行标记，之

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