体外受精和早期胚胎培养

第二节体外受精和早期胚胎培养1988年3月10日，我国首例试管婴儿我国试管婴儿之母张丽珠教授和首例试管婴儿郑萌珠

试管婴儿1978年7月26日，世界首例试管婴儿“路易斯．布朗”在英国诞生，现已成为母亲。思考问题：1.资料上用到了什么生物技术？2.试管婴儿和母亲正常怀孕，生产的过程有何异同？试管动物技术

是指通过人工操作使卵子和精子在体外条件下成熟和受精，并通过培养发育成早期胚胎后，再经移植产生后代的技术。存在困难：1、引进一头良种成年奶牛需要3万－5万元。2、牛的生育率低，一头牛一胎只产一个，一生只能生育四五次。（牛的妊娠期约280天）牛的生育率虽然很低，但是牛的卵母细胞却相当的多，其卵巢中卵母细胞数目要比一生中排卵数多1000倍左右。公牛产生的精子数目就更多了（精子数:50亿/mL)理论基础：讨论1：是否有可能让引进的良种牛快速大量的繁殖？为什么？试管动物技术快速繁殖动物优良品种目的：技术手段：体外受精和早期胚胎培养讨论2：如何让引进的良种牛快速大量的繁殖？试管动物技术的三个基本操作环节：第一步：体外受精

第二步：胚胎的早期培养第三步：胚胎移植精子卵子受精卵早期胚胎胚胎①②③新个体哺乳动物个体发育过程试管动物一、体外受精体外受精：采取雌性动物的卵细胞和雄性动物的精子，使其在体外（试管中）受精。过程：卵母细胞的采集和培养、精子的采集和获能、受精阅读教材：P69—71思考：1、卵母细胞的采集有哪些方法？

2、精子的采集有哪些方法？

3、体外受精前需要对生殖细胞做哪些处理？

方法1：给供体注射促性腺激素，使一头母畜的卵巢一次排出比自然情况下多几倍到十几倍的卵子（超数排卵），之后从输卵管中冲取卵子，直接与获能的精子在体外受精。1、卵母细胞的采集和培养方法2-1：从屠宰场得到的废弃牛卵巢中采集卵母细胞借助超声波探测仪、内窥镜或腹腔镜等的引导，从活母畜卵巢采集卵母细胞。操作员先将带有超声波探头和吸卵针的采卵器通过生殖道插入子宫，同时将探头贴在卵巢上。根据B超屏幕所显示的卵泡位置，利用采卵针穿刺卵泡并同时抽吸卵母细胞。方法2-2：从活体卵巢中采集卵母细胞CO2培养箱复习：动物细胞培养的条件是什么？卵母细胞的成熟培养操作对象采集方法培养方法实验动物如鼠、兔以及家畜猪、羊等用促性腺激素处理，使其排出更多的卵子，再从输卵管中冲取卵子大家畜或大型动物1.从刚屠宰的雌性动物体内摘取卵巢，从卵巢中采集卵母细胞2.活体采卵：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞可直接与获能的精子体外受精采集的卵母细胞需在体外培养成熟后才能与获能的精子受精

比较两种方法采集的卵母细胞在体外受精前的处理有所不同2.精子的收集和获能1)收集的方法:假阴道法,手握法和电刺激等2)获能处理:培养法：把精子放入获能液中。（啮齿动物、家兔和猪）化学法：把精子放入一定浓度肝素或钙离子

载体A23187溶液中。（牛、羊）3.受精在获能溶液或专用的受精溶液中完成受精过程发育培养液获能溶液或专用的受精溶液获能的精子＋培养成熟的卵子胚胎完成受精二、胚胎的早期培养:

应用人工创造条件,对获取的早期胚胎进行体外培养

发育培养液成分:盐类:无机盐、有机盐营养物质:氨基酸、核苷酸调节物质:维生素、激素特殊物质:动物血清牛、羊：桑椹胚或囊胚小鼠、家兔：卵裂期或囊胚试管婴儿：8个或16个细胞阶段注意：不同动物胚胎移植的时间不同注：目前尚无由受精卵到新生儿的全体外胚胎培养技术保存剩余的卵子和精子的方法是什么？试管动物克隆动物生殖方式技术手段遗传物质来源遗传规律有性生殖核移植技术、胚胎移植遵循体外受精胚胎移植2个个体主要来自核供体试比较试管动物和克隆动物:无性生殖不遵循归纳小结:采集卵母细胞体外培养采集精子体外获能体外受精胚胎移植受体（时期：）方法：假阴道法

手握法

电刺激法（方法，试剂）早期胚胎培养（试剂）（培养条件、目的阶段）成熟的卵子获能的精子MII中期

1）超数排卵（试剂）

2）活体取卵（仪器）

3）从屠宰的卵巢取卵方法为充分利用屠宰母畜卵巢上的卵母细胞，不妨将屠宰场和“胚胎工厂”合建。这样屠宰场的产品就不仅是鲜肉，还会生产出大量的胚胎和胚胎工程所需的原材料，你看这个想法可行吗？奇思妙想“试管牛”工厂化生产的技术流程图采集良种母牛的卵母细胞卵母细胞的体外培养采集良种公牛精子精子体外获能体外受精良种牛体外受精胚胎胚胎移植受体牛良种犊牛成熟期牛屠宰加工厂市场采集卵巢中的卵母细胞1999年4月23日晚9时，在广州中山医科大学第一附属医院出生一健康女婴，她是我国首例第三代试管婴儿，父母身体健康、婴儿的母亲7年前生下一男婴，孩子一岁后发病，最后死于脑出血，5年后，她第二次怀孕6个月时，到医院抽羊水及脐带血诊断，发现胎儿是男孩，而且是血友病患者，遂引产。夫妇二人最后来到中山医科大学附属医院做试管婴儿。医生培养了7个可做活体检查的胚胎，并抽取每个胚胎1－2个细胞进行检查后，选择了两个胚胎进行移植,最后一个移植成功。根据资料回答下列问题:（1）试管婴儿技术作为现代生物技术和母亲正常怀孕，生产的过程相同之处是：不同之处是：受精作用在体外，并在体外发育成早期胚胎进行胚胎移植通过有性生殖产生、在母体子宫内发育形成胎儿（2）血友病的遗传方式为（），如果用B、b分别表示血友病基因和正常基因，则父亲、母亲的基因型分别是（）和（），如果该夫妇再生一男孩，患血友病的概率是（）隐性遗传伴X染色体XBY1/2XBXb（3）医生抽取活体胚胎的1或2个细胞后，可通过观察（），判断胎儿的性别，你认为医生应选用（