第四章 微生物细胞和酶固定化技术

第四章酶和细胞固定化技术

河北科技大学生工学院崔建东酶和细胞固定化技术酶有哪些优点?Question1酶有哪些缺点?Question2为什么要固定化酶?Question3酶和细胞固定化技术酶的优点反应条件温和专一性强低污染低能耗催化效率高酶和细胞固定化技术酶的缺点易失活难回收难以反复使用不易与产物分离酶和细胞固定化技术如果你是工程技术人员，领导要你解决这个问题，你怎么办?酶和细胞固定化技术固定化酶的定义通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶柬缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用；过去曾称其为水不溶酶或固相酶。细胞和酶固定化技术什么是固定化酶？水溶性酶水不溶性载体水不溶性酶（固定化酶）固定化技术细胞和酶固定化技术固定化酶的发展历史德国的Schleith首先开始了酶固定化研究，并第一次实现了酶的固定化。1953年日本的千畑一郎开始了氨基酰化酶固定化研究，开始了将固定酶应用在工业上的第一步。1960年千畑一郎成功地将氨基酰化酶反应用于DL-AA的光学分析，实现了酶连续反应的工业化。这是世界上固定化酶用于工业的开端。1969年

第一次国际酶工程会议上正式提出固定化酶概念1971年固定化酶技术被广泛研究并被应用七十年代后期细胞和酶固定化技术固定化酶的优点（1）易将固定化酶与底物、产物分开；产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺。(2)可以在较长时间内反复使用，有利工艺的连续化、管道化。(3)酶反应过程可以严格控制，有利于工艺自动化和微电脑化。细胞绵和酶菜固定哲化技者术固定坟化酶宫的优惊点(4郊)在绝熊大多星数情腰况下桥提高贡酶的进稳定踢性。(5灵)较能赢适应熔于多公酶反功应。(6有)酶的锣使用谁效率卖提高殊，产将物得状率提惑高，冶产品迁质量升有保波障，槐成本狂低。细胞鼻和酶端固定并化技叨术固定局化酶例应用祝实例细胞摸和酶烧固定结化技避术细胞活和酶仁固定块化技捏术固定杏化酶皇的缺叫点(1摆)酶固璃定化碎时酶奏的活禁力有牺所损脚失。橡同时伞也增巷加了凤固定驱化的舞成本剂。(2抢)比较呈适应骄水溶腾性底苍物和葬小分抚子底诉物。(3乎)与完滤整细愿胞比摇较，剂不适锅于多帝酶反查应．细胞悔和酶线固定何化技腰术固定化酶的制备方法吸附法包埋法共价键结合法交联法细胞颂和酶浆固定肌化技粥术固定阴化酶1、吸行附法通过帽载体逃表面化和酶宜分子宫表面糟间的次级甩键相四互作召用而达坡到固叛定目俱的的六方法论。只需执将酶财液与班具有也活泼游表面秒的吸具附剂册接触蛋，再许经洗评涤除纳去未洪吸附垫的酶宵便能极制得介固定愁化酶桐。是葱最简凯单的挽固定冤化技概术，应在经炒济上疏也最民具有枕吸引道力。细胞味和酶是固定洋化技头术固定狂化酶1、吸煮附法（1）物理必吸附轮法通过葵氢键欣、疏车水作掀用和轮电子左亲和绘力等揭物理似作用旦，将冒酶固迁定于幸水不考溶裁瞒体上趟，制届成固役定化圆酶。载体芳包括临：有忘机载霸体（乳纤维往素、嗽果胶消原、降火棉穿胶及价面筋佣、淀浊粉等稿），君无机腥载体太（氧清化铅任、皂场土、子白土驾、高孙岭土圈、多舞孔玻销璃、禽氧化僻钻等乱）。纤维修素皂土细胞病和酶萝固定置化技丈术固定吗化酶1、吸补附法（1）物喉理吸因附法酶活严力损外失少堆，但堵酶和焰载体多的结逢合不递稳定公，容果易脱眼落。细胞麦和酶秆固定陡化技寄术固定容化酶1、吸惯附法（2）离而子交缝换吸筛附法现这是也将酶摇与含翠有离君子交砖换剂螺的水跟不溶纷载体欲相结化合而掘达到建固定拉化的免一种静方法晋。常业用的沿载体炉有阴犁离子赔交换土剂（拆如四痰乙氨拴基乙葬基-纤维炎素、指混合语胺类-纤维粒素等不），炮阳离酱子交叫换剂模（羧委甲基-纤维蔑素、川纤维轰素柠然檬酸天盐、DE钟AE轧-葡聚房诚糖凝遵胶等富）。胺类-纤维推素甲基-纤维甩素纤维症素柠睬檬酸钠细胞锯和酶雅固定贯化技海术固定桥化酶1、吸伯附法（2）离模子交肿换吸孟附法这种构吸附票法较亲为牢孙固，挽所以帝应用渡比较散广泛晶。世界斩第一永例获姻得工口业应平用的阁固定蹄化酶戏是DE耽AE遗-S病ep面ha际de蹦x酷A-碍25吸附第的氨多基酰筐化酶妻反应损用于DL蔑-A穿A的光煌学分餐析。细胞刑和酶象固定猫化技泪术影响壮酶蛋子白在品载体先上吸挥附程鸭度的谊因素:1.获p巴H：影屑响载恳体和过酶的予电荷渣变化,从而艇影响预酶吸附附。2.离子弯强度送：多挤方面饺的影雹响，办一般滚认为番盐阻资止吸兵附。3.蛋白饭质浓词度：杏若吸殖附剂敏的量着固定们，随挨蛋白普质浓恨度递增加杜，吸姓附量上也增拒加，承直至朋饱和侧。4.温度胖：蛋泰白质柱往往芽是随举温度亏上升讯而减惨少吸馆附。5.吸附阔速度笔：蛋歼白质窑在固开体载疤体上它的吸棒附速酿度要广比谢小分五子慢白得多弦。6.载体近：对兼于非艘多孔迷性载酬体，晶则颗邀粒越恒小吸答附力无越乎强。浸多孔片性载只体，锣要考举虑吸盖附对疯象的弯大小绒和总羞吸附约面积陕的大缩慧小。细胞王和酶滨固定旅化技睡术固定糠化酶2、包禁埋法将酶鉴包埋傅在多冻孔载皇体内星部而情制成同固定协化酶情的方敢法称岭为包错埋法支。包埋勒法可崇分为恳凝胶嫌包埋特法、亦半透程膜包举埋法袜和微囊泊化包销埋法摊。细胞书和酶储固定寒化技权术固定匀化酶2、包南埋法凝胶次包埋饱法（泪胶格挽包埋右法）以各列种多啦孔凝让胶为怜载体惠，将宽酶包钥埋在捆凝胶时的微需孔内残而使丝式酶固炕定化介的方蛮法称寒为凝粱胶包积埋法签。常用余的凝糠胶有糖琼脂鼻凝胶蜂、海生藻酸厌钙、浮角叉测菜胶升、明挑胶等箩天然兼凝胶兆以及皱聚丙商烯酰嚼胺凝弟胶、洞光交狸联树孩脂等盼合成咏凝胶。细胞纠和酶池固定嘱化技饥术固定膊化酶2、包督埋法半透暗膜包矩埋法半透元膜包慌埋法洁是将悉酶包馋埋在孩由各脉种高济分子吴聚合例物制流成的暴小球礼内，幼制成选固定逝化酶谊。常用动于制连备固弄定化街酶的催半透龄膜有共聚酰沫胺膜止、火闹棉胶蚁膜等爸。细胞姑和酶消固定治化技古术固定部化酶2、包均埋法微囊今化包婚埋法微囊释法主糕要将凡酶封螺装在笼胶囊日、脂控质体役和中谈空纤嚷维中欣。胶偿囊和俱脂质虹体主叠要用升于医紧学治倒疗，户中空茶纤维锣主要窃适于择工业乒使用画。微生辱物细歪胞和谣酶固傻定化签技术包埋籍法的波优点狐、缺男点包埋邀法的遥优点拜在于碎它是哗一种疗反应铺条件重温和抗、很五少改掉变酶祖结构僻但是胀又较粒牢固召的固仗定化搬方法还。包埋谁法的头缺点财是只害有小辞分子窜底物康和产锤物可员以通缠过高曾聚物挂网架斤扩散掉，对偶那些太底物歪和产拥物是腰大分胀子的耕酶并廊不适烂合。贯这是忽由于或高聚讨物网笑架会砖对大港分子务物质司产生狠扩散血阻力算导致壁固定赤化酶包动力焦学行聪为改承变，庭使活炎力降陆低。细胞辫和酶适固定扩化技板术固定域化酶3、共撞价结奔合（康偶联耍）法它的著原理原是酶在蛋白瘦分子泼上的薄功能均基团摄和固昏相支爷持物馒表面蜓上的皇反应宪基团痛之间鞠形成撇共价第键，伸因而秤将酶搭固定轰在支怖持物扣上.细胞拆和酶骗固定烂化技绝术固定锹化酶3、共用价结宏合（姨偶联盐）法共价愿键结身合法亏所采乖用的冷载体冠主要毯有：嘱纤维幸素、停琼脂郑糖凝妈胶、凑葡聚蛛糖凝涉胶、守甲壳暑质、士氨基榆酸共肥聚物粒、甲躬基丙唐稀醇趴共聚就物等授。酶分目子中应可以杯形成住共价敞键的宁基团尘主要死有：所氨基收、羧左基、汤巯基刑、羟旅基、协酚基哗和咪旧唑基销等。细胞企和酶住固定例化技壤术固定提化酶3、共华价结歉合（膛偶联累）法

要静使载宽体与退酶形搅成共科价键羽，必弹须首变先使好载体吓活化揪，即惑借助姓于某希种方督法，麦在载然体上逢引进投一活鸭泼基武团。进然后抗此活息泼基懒团再社与酶贫分子刘上的坦某一绸基团悦反应颂，形健成共波价键研。

使元载体在活化甘的方假法很禁多。柔主要床的有盛重氮摧法、糊迭氮蛋法、表溴化垃氰法嫌和烷竖化法遭等。细胞拾和酶告固定欠化技分术固定爸化酶3、共铲价结淡合（宪偶联鸟）法优点导、缺贵点（1）共泉价偶倘联法漆的优侨点：仅得到焰的固范定化瞒酶结网合牢致固、拍稳定器性好启、利闭于连怒续使知用。绕（2）共裁价偶该联法辅的缺神点：载体尼活化简的操罚作复雹杂，集反应单条件颜激烈率，需地要严零格控悟制条湿件才搂可以踏获得淘较高含活力遣的固萌定化条酶。地同时启共价认结合古会影摇响到衬酶的遭空间望构象备，从计而对锤酶的线催化把活性绿产生慢影响层。细胞眼和酶饥固定锣化技欧术固定双化酶4、交筒联法共价怪交联崭法的皱基本培原理植是酶孤分子父和多钢功能嚼试剂泥之间发生约交联纽奉作用开，形成斑共价菠键得宗到三防维的交联仅网状悉结构惕。细胞君和酶缩慧固定讲化技耗术固定赤化酶4、交肝联法能起晌交联延作用雹的试鞠剂很碰多，机但目末前常数用的丝式交联鹿试剂选是戊端二醛恐和双漂耦联巴苯胺-2斩,2外’-二磺惹酸。浪交联仗法常怒与吸功附法佛结合施使用屿，或圆者与锻包埋某法配弱合，孙目的访是使悔酶紧查紧地掀结合恳于载路体上假。细胞段和酶傅固定半化技纸术固定偏化酶4、交店联法交联法酶直接交联酶辅助蛋白交联吸附交联法载体交联细胞慰和酶取固定犁化技柱术固定锋化酶4、交争联法共价宝交联象法的沾四种贩形式（1）酶藏直接贩交联么法：在酶则液中圈加入胞适量观多功黎能试关剂，汇使其铸形成慢不溶畜性衍猾生物到。固舞定化摔依赖绍于酶绒与试懒剂的犯浓度弓、溶兰液pH和离励子强许度、船温度本和反方应时湖间之使间的粗平衡霸。操作颠简单菊，但恭是缺泡乏选行择性管，活劣力回揪收往获往不趁高。细胞总和酶遗固定缎化技患术固定欠化酶4、交丧联法共价叼交联纹法的邀四种纤形式（2）酶刷辅助考蛋白然交联右：当可逆得到巴的酶桂量有章限，挣可以荐使用躲第二枯个“述载体鞠”蛋遵白来透增加则蛋白乔质浓僵度，损从而国使酶时与惰辆性蛋壤白共认交联趟的方梯法。这种获“载岸体”帝蛋白纤即辅金助蛋市白，盯可以师是白至蛋白做、明押胶、确血红秃蛋白鹊等。细胞虽和酶桌固定捎化技梯术固定博化酶4、交书联法共价秀交联智法的柱四种页形式（3）吸芬附交销联法地：此法速先将纠酶吸命附在稠硅胶炊、皂笋土、匪氧化疤铝、要球状股酚醛术树脂坟或其丛他大间孔型助离子雷交换在树脂来上，墓再用凯戊二出醛等驼双功涌能试洽剂交柿联，投用此使法所常得固碗定化煌酶也伶可称张为壳申状固穿定化肢酶。ABDCSE装M余im问ag填es伙o旺f国(A禁)居mo土di杠fi警ed岩M萌SG却m建ag暑ni席fi汉ed弱4纯00秒00炕×;证(允B)父M浊SG轧-里CL震EA敏s-朋m晌ag昏ni眠fi榨ed末4及00拜00戒×;搜(福C)敏m垦od被if喷ie局d抱MS贿G斯ma叠gn忙if读ie汗d刚10板00禁00傻×;敞(动D)御M冶SG候-C背LE灿As裕m饲ag薄ni斥fi劲ed昂1棍00吸00意0×该论炉文被PL逢OS气O视ne接受细胞馆和酶懒固定梅化技甲术固定带化酶4、交帝联法共价列交联内法的昨四种索形式（4）载穷体交仗联法葡：用多智功能断试剂磁的一垫部分梳功能餐基团胜化学晴修饰股高聚恳物载趋体，吹而其赵中的挤另一牢部分忌功能盼基团争偶联划酶蛋忘白。细胞敢和酶美固定暑化技球术固定邮化酶6、固菠定化惕方法英与载雀体的喊选择1.必须夸注意微维持秋酶的糊催化瓦活性灶和专各一性2.酶与摧载体尚结合吧牢固3.载体闻的机棒械强压度4.固定溜化酶桃要有圈最小半的空汪间位知阻5.载体犯稳定偿，不祥可与乱底物可、产结物发衡生反扑应6.固定苦化酶田要廉妙价细胞迅和酶燥固定剃化技饼术固定粗化酶7、固苍定化最酶的兼特性(1巷)稳定普性:固定垒化酶烧的稳馅定性膏一般娇比游料离酶家的稳腹定性路好。(2秒)最适衬温度:固定菌化酶瓦的最视适作解用温胜度一籍般与当游离工酶差婚不多享，活周化能摧也变启化不页大。(3协)最适pH值:酶经离过固智定化晕后，值其作炉用的锁最适pH值往骡往会怖发生习一些史变化珠。◆影抛响固罚定化探酶最垃适pH值的拆因素助主要监有两抛个，睬一个约是载闯体的羽带电坦性质惠，另警一个系是酶戴催化饮反应叼产物晌的性状质。细胞锣和酶布固定搏化技斗术固定顽化酶7、固任定化之酶的忠特性(4齐)底物透特异馆性:固定锋化酶忧的底绩物特隐异性泰与游绑离酶巧比较势可能补有些欧不同牢，其抹变化阿与底叶物分汉子量咐的大塘小有态一定稀关系序。对育于那拿些作谱用于琴低分逐子底就物的任酶，监固定勾化前走后的颈底物沉特异市性没稠有明和显变矮化。◆固折定化政酶底哀物特歼异性蕉的改狐变，充是由樱于载忙体的恰空间艳位阻翼作用忌引起孝的。细胞裕和酶恋固定积化技水术固定怠化酶7、固返定化饶酶的切特性（5）、有一军定的柄机械熊强度暑且稳御定性拐好，壤催化箱剂与凯系统毙分相狂。（6）、固定副化酶钥在使来用前蝴可充蜡分洗醉涤，诊不带染进杂单质，匠在反兰应中民酶与嚷产物洞自然据分开年，所匹以产不物易餐提纯傻，收棕率也网高。（7）、能反寨复使客用，袄可大斗大降积低生妨产成喉本；幕同时姑也为搁实现德生产疮的管君道化史、连手续化乓与自伍动化愁提供臣了可想能。细胞渔和酶寻固定宋化技抛术固定认化酶影响衡固定障化酶蕉（细昼胞）敬性质截的因应素酶经阴过固姥定化替后引剖起的施性质跨改变楼，不沸外乎笛两种风原因醒：一腰是酶岭本身漠的变猪化，码二是缠受固怠定化雾载体鼻的物攀理或瘦化学氧性质白的影授响。细胞嘱和酶昼固定倘化技蛛术固定洪化酶影响因素分配效应空间障碍效应扩散限制效应细胞舞和酶辟固定牲化技六术固定总化酶影响青固定释化酶仓（细喉胞）目性质厘的因邀素1、分馒配效蛋应由于改载体没和底冈物的恨性质宪差异珍引起脾了微垃环境召和宏务观环鞭境之处间的否性质库不同天。微淋环境御是在摩固定岁化酶挠附近犯的局秩部环塑境，染而将锁主体成溶液满称为刮宏观岗环境渐。由恼这种碍不同甘造成模的底母物、上产物今和各接种效初应物复在两阴个环怠境之储间的害不同传分配叼，被橡称为腔分配建效应领。细胞林和酶触固定网化技考术固定妄化酶影响扁固定修化酶沟（细暴胞）鸽性质级的因患素2、空间迅障碍织效应固定守化之昨后，压由于收酶的蚂空间宫自由臭度受忍到限间制(因为渔载体绘的空轰隙太宣小，仰或者剪固定腔化方词式与坛位置盼不当捉，给屈酶的驾活性坡部位墙造成告了空榨间屏夸障)，使树酶分哲子的谦活性安基团纳不易浪于底类物或株效应轧物接纠触，巷影响唇酶分觉子的鲜分子渣活性京中心役对底努物的正定位阔作用,所造丛成的仪对固牵定化爪酶的粮活力逃的影锈响效浪应，趋被称围为空辈间障柔碍效彩应。细胞吓和酶母固定愉化技体术细胞次和酶叠固定限化技恳术固定商化酶影响意固定独化酶婶（细怨胞）阅性质舒的因顷素3、扩腐散限垦制效拦应酶固棋定化蹄使生棉物催树化反距应从框均相腐转化控为多蒙相，泉于是朗产生穷了扩温散阻欢力。包括戒外扩他散阻辆力和干内扩蒙散阻砌力。细胞炸和酶严固定圈化技倍术固定硬化酶影响摧固定堵化酶粱（细侍胞）借性质我的因继素3、扩摄散限只制效冬应外扩构散阻涝力是底绸物从项宏观命环境唤向酶掩颗粒酱表面夕传递殿过程冶中的个一种剂扩散姑限制秀效应静，它涂发生体在反励应之疲前，宁发生烤在固亚定化获颗粒筑周围颜的液露膜层越。它听会使群底物飞在固序相酶璃周围乖形成嘱浓度蚕梯度洽，通松过增锹加搅概拌速心度和防底物巴流速牵的方户法可竞以减拿少外哥扩散屋效应航。细胞坛和酶爆固定乖化技框术固定怖化酶影响兽固定灾化酶固（细侄胞）疾性质痕的因拜素3、扩姨散限之制效骡应内扩趴散阻维力是指肆底物静分子屿达到免固相申酶表昏面后棒传递崇到酶伶活性训部位很时的驶一种训扩散危阻力议，它蜂与催缺化反蔬应同熔时进软行。南载体僻小而授弯曲腹的细马孔是犹产生予内扩绑散阻安力的揭主要旺原因竖。因雕此使帐用低公分子驾量底追物，桂小的赖粒径孤、载烤体孔修尽可赤能大浸而直痛且互榨相连亩通，碗或仅鼠仅将骡酶固班定在来载体葱表面信都可般以降催低这芽种内私扩散岗阻力锋。细胞状和酶激固定专化技芒术固定为化酶1、固嫂定化差酶的接活力幼在大厉多数蝇情况弯下比盯天然职酶下斥降，哭其专倒一性桑也会颗受到初影响角发生撑改变是。固定释化酶根后发迷生变阴化的酸性质活力罗下降帜原因量：酶分俭子在并固定气化过雹程中知，酶鸽的空木间构初像发吐生了针变化视，甚至腿活性咱中心阿的氨枣基酸杀也会闪参加压反应理。固定姜化后呜的空盒间障河碍效凡应的踩影响硬。内扩酱散阻墓力的授影响批使底口物分扫子与训活性貌中心寇的接槽近受道阻。包埋索法时缺被高头分子伞物质拔半透开膜包驰围。细胞织和酶熔固定滴化技赤术固定杆化酶固定快化酶绝后发省生变合化的阿性质2、固畏定化漂后酶宝稳定害性提昨高稳定宗性提碰高的状原因朵：固定厕化后井的酶烈与载胳体多攀点连头接，捕可防匪止酶板分子伸展喇变形穗。酶活顿力的旋缓慢蝴释放梦。反率应开摊始只距有部州分酶踏起作用，持其余科部分贿仅在槐开始洲起作困用的惨酶变剥性后李才起作用阵。抑制携自降冤解，英提高晨了酶伶稳定莲性。细胞默和酶业固定苗化技则术固定采化酶固定甲化酶阅后发妥生变片化的旅性质3、固滴定化蚕酶的弯作用诸最适pH发生骆变化一般歉来说殊，带剥负电多荷载从体制市备的且固定仗化酶攻，其回最适pH值较喉游离泽酶偏蝇高，印反之孙，若讨使用音带正坦电荷仔载体丹的话摧，其敢最适pH值较顷游离师酶偏隶低，岔即向劫酸性絮偏移胁。细胞纷和酶排固定乱化技赚术固定系化酶固定鞭化酶钟后发碍生变孤化的其性质4、固妥定化霸酶（迫细胞荡）的详最适耕温度烂的变铜化酶反扑应的涝最适交温度悔是酶楚热稳伏定性苦与反萍应速悔度的会综合油结果店。因衡为固纤定化秒后，蹈酶的它热稳掌定性面提高神，所肌以最醋适温之度也图随之偏提高该，这县是很只有利盾的结棒果。细胞洞和酶直固定描化技截术固定瘦化酶固定银化酶惭后发年生变横化的坡性质5、米氏尽常数Km的变书化由于笔高级雅结构枣变化斗及载反体影阶响引畏起酶粮与底塔物亲域和力巧变化黄，从突而使Km变化翅。而罩这种Km变化贝又受摸到溶洲液中计离子趣强度舞影响心：离睡子强句度升光高，腊载体待周围幅的静欧电梯灿度逐贺渐减僻小，Km变化穴也逐铸渐缩苏小以纸至消什失。细胞法和酶娃固定俊化技邪术固定陡化酶固定览化酶竟活力柱分析固定易化酶际的活略力即菠是固单定化荷酶催镇化某乞一特稀定化负学反喂应的妖能力押。其女大小书可以隔用在叔一定阳条件脆下它槽所催柔化的所某一宣反应揭的反技应初列速度继来表陆示。它的碧单位狼可定雄义为滋每毫裳克干坐重固裂定化斩酶每章分钟括转化蛮底物麻的量谱：用μm阵ol逮/杜mi欧n从·m多g或μm呀ol克·m若in-1/c缸m2细胞子和酶芝固定碧化技垂术固定寄化酶固定状化酶傲活力准分析固定犹化酶筑活力萍回收=(固定丘化酶首总活污力/被固丢定游此离酶草总活句力)×1澡00羞%固定庭化酶敲（细第胞）毒的半娇衰期在连蜘续测潮定条虚件下黎，固胞定化多酶的遵活力战下降食为最仙初活虹力一捞半所忠经历食的连丢续工模作时裙间称幸为固教定化塞酶的才半衰充期。右以t1/煎2表示购。固霉定化械酶的枕操作瘦稳定勾性是后影响闪使用睡的关矛键因届素，押半衰奖期是辜衡量茫稳定虏性的比指标中。细胞定和酶徐固定篇化技拼术固定结化酶固定摊化酶察新方具法无载嚼体固扶定化怜酶新锡技术交联洪溶解哄酶、牛交联杜酶晶喷体、飞交联感酶聚映集体绪和交鞭联喷殊雾干线燥酶演。定向脂固定兽化新钥技术借助冻化学辞方法继的位汽点专感一性友固定船化磷蛋顷白的猴位点继专一酸性固屈定化免疫萌球蛋哗白的骄位点芬专一客性固聚定化糖蛋赵白的燃位点误专一还性固睁定化利用掠基因借工程偶的位通点专足一性物固定滴化新型腿固定逗化材小料的睬应用通过斑磁性只、辐余射、菌光、侵等离楚子体玩、电歼子等武新材判料新讲方法援均可造制备译高活演性固刃定化瞧酶。细胞丽和酶湾固定搁化技听术固定阿化酶无载勿体固珍定化罗酶新说技术优点添：在载跌体固服定化球酶中骂，由寒于聚铜合物敢载体浊的存弄在而糕大大盏降低树了酶搬与大蚀分子度底物惯的结艇合容祖量和疮反应蹈能力促，而座无载鼓体固封定化执酶具乡丰有较泻高的梁催化内剂比锈表面雪；较蛮高的似酶催漫化活婆性，是成本南低；洞受底闪物扩钢散限迫制的岛影响勾较小治；可末提高色了酶扣在极邪端条芬件下玻及有披机溶季剂中虚和蛋灿白酶蜘中的伪操作测稳定助性等咐优点御。细胞园和酶革固定疑化技驴术固定态化酶无载农体固龙定化勾酶新酷技术1、交作联溶剪解酶(C事LE蚊s)是通逆过交衬联剂匠对酶飞分子庸直接赵交联肠而获效得，除也是作操作铲最简叉单的等一种纲方法耗。到震目前芒为止扔，已域有20多种箭酶通菌过交食联直崖接形受成CL五Es或先忘吸附拼在惰城性膜险载体洪上再延经交基联形闹成有曲载体庸的CL毙Es形式山。但枕是这泥种采予用外犹加载善体的彼方法身会明岩显地迎降低华单位摇体积玻的酶拜活性斩水平浑，所与以其召工业氏应用鸡范围摊受到膜限制咏。细胞帅和酶衡固定便化技虚术固定袖化酶无载她体固会定化钩酶新纪技术2.交联犁酶晶痒体（CL位CE所s)是酶奥结晶衫技术野和化辅学交随联技绿术的之结合,将结亏晶后饥的酶野经过昏交联礼剂的坐聚合箩交联盾而得屯到的鼻固定境化酶证。但由肤于需盛要对悔酶进孔行纯舰化结饱晶，桂操作巨步骤唐较为戚烦琐阁。应慨用受观到限巾制。细胞棕和酶帆固定推化技普术固定靠化酶无载梳体固伙定化肿酶新晚技术3.交联完喷雾闪干燥班酶（CL坐SD融s)将酶般溶液霜喷雾质干燥通成小钓颗粒费后进剃行交叫联的饭固定川化方列法。喷雾丹干燥井酶颗廉粒尽谅管可点以获星得较醋好的杨酶活原，但梅直到贝今天覆还未艘开发找出理兰想的走交联堵喷雾全干燥孔酶，宪主要露原因芒是喷事雾干卖燥过糕程往巾往是雕可逆叔的，贼而使案酶变狮得无沫效。某与CL妙EC德s、CL浸EA葵s或有摘载体调固定剃化酶顾相比蓬，CL赚SD拆s的操眨作性炮相对嫂较差采，故针而其篇工业愧应用慨受到借限制劫。细胞抬和酶肚固定拒化技字术固定秤化酶无载仇体固辰定化眼酶新巩技术4.交联安酶聚皇集体步（CL拆EA疤s)酶分冰子经嚼沉淀益形成悄不溶显性酶胆聚集博体再逐经交澡联反竹应形主成。CL神EA底s具有绝更高念的酶卧活回知收率粮，更告强的终机械港稳定顽性，淋而且押由于密省去脊了繁援琐苛捷刻的衔酶纯技化结侧晶过近程，倡使得CL赞EA嫁s制备她成本皆低廉廉，是墨一种翠极具矿开发尽前景勿的固船定化洞酶方倍法。细胞爬和酶迁固定虾化技内术细胞叛和酶响固定纱化技虽术传统比CL柄EA纺s技稿术缺冲点：1、奖对于释分子租含有穷较少辨氨基或基团讲的酶看，很走难用翁戊二引醛交楚联，状从而很减低酷交联葛效率饮。可非用富芳含氨叔基的浮蛋白桐或聚甘合物欣与酶尚共沉博淀交欧联克漏服。细胞地和酶栗固定企化技苏术传统反CL撞EA回s技甚术缺泼点：2、灶交联倾过程鼓会破抛坏酶涂的活垒性构榜象，鹿导致岭酶失墓活，眨可以讲用酶求印迹腰的方顺法解弄决。细胞垮和酶扒固定咳化技烧术传统斤CL趁EA容s技赛术缺司点：3、浅交联条形成闯的C新LE诸As裤颗粒匆较大真时，遗对于叼催化枣小分大子底选物的屿酶，秀会形探成传脖质阻芦力和孩空间若扩散瓶限制峡。降判低催唐化效泄率。佩可以弯制备饼多孔业的C河LE谜As状.细胞胡和酶规固定链化技沙术传统展CL拐EA乳s技跃术缺提点：4、扭传统浆制备穗的C誓LE被As辛机械灿强度就低、不难回蔑收，牺可以栋将C玩LE敬As宝吸附蜻在载胖体上哄。细胞香和酶辣固定僻化技更术传统县CL拢EA贸s技辅术缺刊点：5、张传统自制备厕的C某LE幅As臭机械想强度旷低、雷难回倾收，剪可以旨将C息LE怜As党共价罗结合鞭在载迫体上部。细胞理和酶晌固定模化技名术传统尺CL很EA亚s技危术缺爽点：4、帐传统怖制备态的C齐LE忧As朽颗粒扮小、年难回骄收，荷可以情将C浙LE袍As忌固定川到磁遵性钠警米颗赌粒上稼。综述席文章细胞域和酶维固定率化技村术固定丈化细险胞将细景胞限太制或狭定位榴于特瓶定空灭间位妨置的岗方法壶称为冰细胞无固定衫化技冰术。袭被限优制或物定位码于特谣定空柱间位道置的细胞孕称为扒固定贵化细庄胞。(固定集化活恋细胞悬或固粘定化丈增殖番细胞)微生星物细倦胞、补植物淹细胞哥和动贿物细些胞都践可以翅制成爱固定舅化细凭胞。细胞诞和酶非固定蜜化技锹术固定咸化细币胞固定旅化细附胞的冤特点有细拉胞特讲性，垄生物招催化况剂功甲能，浆固相毫催化火剂特怒点。优点厉：①无个须进捎行酶笋的分膛离纯事化②保创持酶涨的原鬼始状暗态，澡酶回哨收率痰高细胞蔽和酶宝固定福化技讲术固定挤化细慰胞③比核固定研化酶业稳定性性高④细合胞内伍酶附主助因泰子可监再生⑤细绑胞本槽身含暗多酶恒体系⑥抗矛污染窗能力穗强细胞逆和酶眨固定倦化技生术固定酒化细援胞细胞爷和酶裙固定洪化技琴术固定化细胞直接固定法吸附法共价结合法交联法包埋法固定雨化细果胞细胞跨和酶计固定煤化技听术固定扩化细竞胞直接后固定紧法在没佳有载狱体的粘情况冲下借脸助物升理方视法或紫化学畏方法迷将细贺胞直乡丰接固著定化丢。吸附鼠法物理倒吸附虏法-利用公具有值高度赴吸附齐能力旨的吸刃附剂羽将细花胞吸清附在强载体纲表面社使其首固定挡化离子险吸附占法-利用执静电标引力丙将细检胞固涉着于捕带有为相异叠电荷妻的离政子交拒换剂虏上。细胞旅和酶猎固定河化技体术固定浓化细感胞共价丹结合瓜法将细敬胞表银面上善的功喜能团朝和固挪相支芬持物蜂表面果的反咳应基晃团之勿间形军成化敏学共愈价键扯连接寸，从停而成望为固岂定化冰细胞很。交联适法与共辛价结块合法浆一样范，都贱是靠仗化学嚷结合痕的方兰法使骡细胞兆固定侍化。包埋绩法将细垃胞包欠裹于背凝胶央的微款小格周子内浩或半驻透膜皇聚合肉物的胶超滤开膜内找。细胞狗和酶矩固定芒化技院术固定化细胞类型微生物细胞固定化植物细胞固定化动物细胞固定化原生质体固定化细胞堤和酶悦固定井化技户术1、微蔽生物宋细胞零固定凑化固定踪蝶化微恩生物千细胞尘的特弦点：①固少定化禁微生搅物细樱胞保跨持了索细胞姥的完窗整结斗构和捎天然掉状态颜，稳洪定性雁好。②固浙定化压微生姻物细零胞保想持了菜细胞渴内原爹有的罗酶系纱、辅笋酶体筹系和惑代谢斤调控抱体系吹，可乞以按蓝照原毙来的坐代谢费途径盒进行她新陈赞代谢良，并装进行贡有效抄的代眯谢调刻节控林制。细胞乳和酶怒固定缓化技逃术1、微岔生物邻细胞毕固定娘化固定去化微饥生物毙细胞害的特型点：③发垂酵稳床定性踏好，挂可以扛反复驾使用肺或者翁连续鹿使用要较长宽的一走段时模间。④固炉定化尼微生窄物细虹胞密村度提六高，驶可以野提高钞产率残。⑤提梯高工傲程菌第的质唐粒稳传定性计。细胞睬和酶粮固定币化技滨术1、微雁生物娱细胞毙固定继化固定妇化微与生物闸细胞疫的应适用◆主纯要用亲在两眉个方孔面：(1益)利用违固定博化微邻生物秋生产勇各种莲产物(2腐)固定肺化微锋生物耐细胞赏制造戒微生袭物传缓感器细胞女和酶细固定队化技凯术固定匆化细狸胞2、植凯物细岁胞固构定化固定盏化植盟物细辞胞的害特点溪：（1）植洞物细奴胞经趟固定格化后型，由拖于有国载体冒的保敲护作粗用，霜可减毙轻剪芬切力撤和其拉他外桐界因前素对惑植物谨细胞腹的影旱响，熟提高误植物街细胞盘的存情活率影和稳畅定性拒。（2）细赚胞经注固定乏化后粮，被社束缚华在一老定的赚空间退范围罢内进衫行生愈命活完动，热不容际易聚巨集成森团。细胞忌和酶瓦固定昼化技幅术固定岁化细池胞2、植阵物细禁胞固替定化固定矿化植著物细瞒胞的阁特点董：（3）固汪定化勺植物提细胞均发酵教可以冰简便含地在魄不同迈地培捐养阶繁段更聪换不伯同的永培养盗液，稀即首醒先在享生长诊培养壁基中薄生长吴增殖顽，在丝式达到侨一定掠的细斧胞密趣度后缓，改鲜换成狸发酵辛培养雁基，剧以利例于生宽产各信种所各需的携次级桑代谢且物。（4）固握定化台植物膜细胞凝可反焦复使赤用或夫连续栽使用汁较长灶的一朗段时园间，当大大通缩短余生产金周期疤，提韵高产末率。（5）固左定化将植物到细胞活易于汪与培详养液冶分离喇，利馆于产渡品的题分离芝纯化魂，提委高产演品质炒量。细胞吵和酶御固定趋化技村术固定止化细行胞2、植峡物细斥胞固方定化植物叮细胞外固定伞化的域方法：◆植样物细鹅胞固锡定化吩的方柔法主傲要有侧吸附复法和耐包埋森法两每种。◆吸腿附法谦是将世植物狱细胞咐吸附跌在泡汉沫塑亏料的隶孔洞瓦或裂尾缝内发，或滑者将者植物束细胞窃吸附熔在中降空纤偷维的寺外壁谅上。细胞迅和酶衫固定那化技残术固定踏化细秩胞2、植滴物细蝴胞固并定化植物圈细胞撇固定决化的珍方法◆包程埋法做是将寸植物下细胞与包埋茫在琼稻脂、唐角叉沾菜胶浑、海告藻酸反钙凝波胶、阅聚丙疏烯酰惹胺凝众胶、砍明胶嘉等多串孔凝愉胶之小中。弄包埋瞎方法河与微阔生物勤细胞嫌包埋迎时基毛本相异同。细胞往和酶谎固定茫化技友术固定命化细撑胞2、植躲物细酿胞固齐定化固定艘化植嫌物细嫩胞的从应用最：◆固宵定化峰植物随细胞掏的主奴要用乡丰途是因制造选人工吨种子再，就有浇可能扮获得遵大量宝具有订相同蹦遗传族特性闷的植群株。西对种严质的进保存块具有道重要厅意义烧。并营可以赞节约相种子竟的用云量。◆固萝定化路植物恭细胞心还可煤以用攀于生涨产各插种色盏素、宜香精册、药摘物、榨酶等夹次级踏代谢琴物。细胞努和酶徒固定您化技宏术固定奋化细屯胞2、植伙物细眠胞固予定化固定高化植麦物细涝胞的哗应用槐：人工添种子任何纵一种宫繁殖体。捎无论尘是涂斗膜胶蓄囊中籍包埋狮的,裸露贵的或迷经过聋干燥千的，额只要同能够示发育叙成完凝整植毙株的扒均可巨称之塞为人哨工种誉子。细胞亭和酶雁固定作化技来术固定岁化细雅胞3、动侄物细千胞固仗定化固定弯化动径物细委胞的病特点紫：（1）提隐高细江胞存嘴活率邮：动脑物细屈胞经嚷固定期化后单，由杀于有婆载体敞的保标护作吊用，唉可以肥减轻收或免拴受剪健切力沙的影息响，线同时蕉动物炭细胞求可附默着在胡载体络表面靠生长武，从搞而可洞显著吹提高炭动物并细胞宫的存开活率核。细胞败和酶剃固定纪化技仁术固定橡化细肉胞3、动掏物细事胞固馒定化固定磨化动校物细收胞的间特点冤：（2）提处高产信率：布动物汪细胞珠固定掀化后强，可腾先在毙生长更培养委基中芬生长香繁殖醋，使槐细胞惊在载疼体上堪形成麦最佳酸分布栋并达诞到一备定的览细胞射密度包。然塑后可清简便喘地改面换成论发酵怪培养监基，叉控制错发酵液条件敲，使誓细胞啄从生痕长期拾转变产到生撞产期咱，以兔利于如提高虫产率权。细胞外和酶抚固定奸化技姜术固定昨化细牌胞3、动镰物细挠胞固赔定化固定杯化动辨物细滑胞的黎特点招：（3）固略定化体动物括细胞逆可反音复使土用或登连续糠使用丸较长碎的时疾间。挂例如甜，中蜘国仓脆鼠卵盾巢细爱胞（CH破O）生拌产人婶干扰湖素可格以稳膛定地捉生产30天。（4）固达定化读细胞睛易于控与产慎物分柔开，竟利于坚产物溉分离盆纯化督，提杨高产签品质鄙量。细胞筒和酶等固定补化技截术固定漆化细衣胞3、动为物细储胞固个定化动物刮细胞京固定帐化方茎法：◆动随物细游胞固里定化背地方掏法有讲吸附行法和饱包埋禾法两评种。(1瞧)吸附宣法：◆大绩多数蒜动物锋细胞偶属于袭附着抽细胞帜，它衡们在分培养懒过程以中，毫必须夕趋向闹于附粱着在烘固体市表面端。故赶此吸心附法灿特别欣适合珍于动宁物细宇胞的考固定踢化。细胞家和酶贷固定脱化技劳术固定革化细舌胞3、动辩物细寇胞固类定化动物包细胞有固定运化材述料：转瓶慨是由钥玻璃磨或塑雹料制嫌成，深表面您经过还一定陵方法越处理滔而带远上电惹荷。微载初体是罚指颗找粒细论小的贫固定钩化载市体，胞直径麻一般室为10择0～20挣0μ骆m，相垃对密裕度接自近1.宝0。是破由带终有表枯面电壶荷的社葡聚潜糖、放明胶叉、纤菠维素爪、聚墓丙烯戚酰胺翻、聚挑苯乙阵烯或揭玻璃丈等材朵料制静成。筋微载阅体已钉用于蹈多种网动物雾细胞吸的固辫定化施；细胞吃和酶玩固定版化技毛术固定阿化细饰胞3、动症物细户胞固统定化(2础)包埋知法:◆包摩埋固涨定化秧法一那般适乘用于芽悬浮凝细胞何。◆根营据载条体和酒方法为的不筛同，叙有凝绿胶包替埋法面、半朽透膜申包埋恰法两固种。细胞飘和酶抬固定驰化技协术固定敌化细技胞3、动窄物细慌胞固腹定化(2可)包埋丢法:①凝胶蜘包埋码法：利用量各种医多孔杠凝胶爹为载掏体将突动物究细胞息固定检化。炊细胞培被固贩定在症凝胶塞的微想孔中扑生长职繁殖咏和新美陈代北谢，揉由于妥有载旷体的夸保护宁，动芦物细乞胞有舰较好计的稳隶定性取，可精显著殃提高勿其存盗活率询。用于盐动物污细胞敢固定形化的筐凝胶嘉载体久主要乳有琼远脂糖姓凝胶冈、海雄藻酸碑钙凝省胶和春血纤赞维蛋切白等勇。细胞桥和酶企固定乌化技恨术固定趣化细离胞3、动纽奉物细药胞固谱定化(2罗)包埋语法:②半才透膜脚包埋拼法：探利用旦高分谢子聚宴合物深形成位的半物透膜吉将动话物细材胞包霜埋，勺形成俩微囊贵型固竿定化静动物易细胞印。细胞迷和酶爪固定芳化技谅术固定被化细趁胞4原生春质体眉固定然化原生吼质体除去晚细胞贡壁的移细胞申体.细胞索和酶眼固定造化技蚊术固定谱化细遣胞4原生凡质体览固定贼化◆采包用包念埋法林制成递固定救化原虑生质河体。◆原错生质秧体固扫定化俩一般响采用助凝胶柄包埋我法。细常用稍的凝朋胶有还：琼唇脂凝义胶、贺海藻赶酸钙屯凝胶唉、角斗叉菜屿胶和灿光交其联树摸脂等纹。细胞稀和酶旁固定循化技耗术固定吊化细拜胞4原生柳质体汁固定特化固定草化原设生质游体的耐特点评：(1眨)固定摊化原调生质事体由符于解除了或细胞身壁这例一扩砍散屏洽障，添可增酱加细霜胞膜铺的通驶透性采，有毛利于蚂氧气起和营赔养物挖质的决传递钟和吸嘴收，敢也有崇利于素胞内迷物质忽的分练泌，慰可显闹著提郊高产拣率。细胞壳和酶能固