免疫组织化学(一)课件

免疫组织化学实验技术免疫组织化学的定义免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）技术是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，对组织或细胞内抗原或抗体物质定性和定位的组织化学技术。定性与定位免疫组织化学的分类免疫荧光法免疫酶法免疫胶体金法等实验所用标本石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究实验所用抗体单克隆抗体：一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体：将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。酶联免疫组织化学

三步法

二步法荧光标记免疫组织化学常用染色方法SP法SP法检测ERalpha在绵羊输出管中的分布酶标二步法免疫荧光（FITC）检测垂体中LH免疫荧光法（TRITC）检测PRL组织切片脱蜡水化二甲苯，10min2

无水乙醇，5min90%乙醇，5min80%乙醇，5min70%乙醇，5min

蒸馏水，5min

1.脱蜡和水化免疫组织化学步骤抗原修复

高压修复微波修复胰酶修复免疫显色

PBS洗,33min；

3%H2O2，室温5分钟；

PBS洗,33min

10%正常山羊血清封闭液,室温10分钟

滴加一抗，4℃于湿盒中孵育过夜。

免疫显色

PBS洗,33min；

二抗孵育

PBS洗,33min

三抗孵育PBS洗,33min

DAB染色，苏木素复染

脱水封片

70%乙醇，5min80%乙醇，5min90%乙醇，5min无水乙醇，5min二甲苯，10min2取出切片，滴加30μL中性树胶，用盖玻片封片晾干后观察结果，进行分析统计。组织化学结果图片JournalIFArticlesCellandTissueResearch(德国)2.670171HistochemistryandCellBiology(德国)2.594112JournalofHistochemistry&Cytochemistry(美国)2.513172HistologyandHistopathology(西班牙)1.931135AppliedImmunohistochemistry&MolecularMorphology(美国)1.40263CellsTissuesOrgans(瑞士)1.31958ActaHistochemica(荷兰)0.89542EuropeanJournalofHistochemistry(意大利)0.84551FoliaHistochemicaetCytobiologica(波兰)0.67238ActaHistochemicaetCytochemica(日本)0.46036SCI收录的组织化学相关杂志相关抗体及组化相关产品公司DAKONovocastraSerotecZymedSantaCruzChemiconR&DNeomarker免疫组织化学相关英文缩写词汇IHC，immunohistochemistry，免疫组织化学ICC，immunocytochemistry，免疫细胞化学AP，Alkalinephosphatase碱性磷酸酶HRP，horseradishperoxidase，辣根过氧化物酶PAP，peroxidaseanti-peroxidase，过氧化物酶抗过氧化物酶复合物DAB，3，3′-diaminobenzidine，二氨基联苯胺TMB，3，3′，5，5′-tetrametylbenzidine，四甲基联苯胺NBT，Nitrobluetetrazolium，四唑氮蓝BCIP，5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate，5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐ABC，avidin-biotinylatedhorseradishperoxidasecomplex，ABC复合物FITC，fluoresceinisothiocyanate，异硫氰酸荧