脓汁和粪便标本中病原菌的检测

关于脓汁和粪便标本中病原菌的检测第1页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三空气细菌检查结果分析

细菌菌落直径1～3mm，有光滑型、粗糙型、粘液型。霉菌菌落比较大，呈棉絮状、绒毛状。计数菌落形成单位（CFU）,报告结果。37℃培养24小时培养72小时培养48小时第2页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第3页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第4页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第5页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三132

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4手指皮肤的细菌学检查甲和乙、丙和丁共用1个平板上:甲、丙→常规洗手下:乙、丁→标准洗手甲（丙）乙（丁）丙丁第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。

第6页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三手指皮肤细菌检查结果分析

比较洗手前后细菌的种类。洗前细菌种类多。洗后细菌种类少。洗手能洗掉大多数暂住菌。比较常规和标准洗手的细菌数量。常规（简单）洗手，平板上细菌数量少。标准洗手，平板上细菌数量多。常住菌数量大，牢固附着在皮肤上，常洗不掉，可洗松动，经摩擦接种、脱落到培养基上，显示细菌更多？外科手术人员洗手？碘酒和酒精棉球消毒以后，有没有细菌生长？空白对照有没有细菌生长？第7页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三医学微生物学实验

综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测（三）菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法（讲解）脓汁和粪便标本检验（录像）第8页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三菌落特征ColonyCharacteristics大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约1～3mm)，小(直径约1mm以下)。形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。第9页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三金黄色葡萄球菌菌落特征X-SA

琼脂培养基添加了显色酶基质，金黄色葡萄球菌形成淡蓝色菌落。血琼脂菌落直径约2mm、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐，菌落周围有透明的β溶血环，溶血菌株大多有致病性。Baird-Parker琼脂菌落黑色，奶油状，表面光滑，湿润，圆形，凸起，有光泽，边缘整齐，不透明，外层有一透明圈。第10页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三伤寒沙门菌菌落特征HE琼脂HektoenEntericAgar沙门菌产生蓝绿色、黑色中心菌落XLD琼脂木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂XyloseLysineDesoxycholateAgar沙门菌产生较小黑色菌落SS琼脂SalmonellaShigellaAgar沙门菌产生较小黑色菌落埃希菌产生较大红色菌落第11页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三链球菌菌落特征血琼脂甲型溶血性链球菌，菌落周围有1~2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血。血琼脂乙型溶血性链球菌，菌落周围有2~4mm宽、红细胞完全溶解、透明的溶血环，称乙型溶血或β溶血。血琼脂丙型链球菌，不产生溶血素，菌落周围无溶血环，称不溶血性链球菌或γ溶血。甲型乙型丙型第12页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三志贺菌菌落特征HE琼脂HektoenEntericAgar形成不发酵乳糖的深绿色菌落。麦康凯琼脂MacConkeyAgar形成较小的，无色半透明不发酵乳糖的菌落。SS琼脂SalmonellaShigellaAgar

菌落圆形、液滴状、边缘整齐，湿润，无色半透明。第13页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三大肠埃希菌菌落特征麦康凯琼脂MacConkeyAgar伊红美蓝琼脂eosinmethyleneblueAgar

科玛嘉显色琼脂CHROMagar第14页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三细菌的纯培养PureCultures脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。37℃培养24小时

第15页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落色素是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落，菌落直径2～3mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，淡粉红色，半透明，直径1～2mm。37℃培养24小时

第16页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三若培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，或者菌落中心黑色，边缘粉红色。由紫黑色变成粉红色菌落中心黑色，边缘粉红色。大肠埃希菌菌落特征改变第17页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三若划线分离不成功，菌落数量少的，或者菌落分布密集的，获得菌落形成单位的可能性比较大。划线分离成功的，菌落分布越往后越稀疏的，获得单菌落可能性越大。第18页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三斜面接种分工甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面乙→普通平板→白色菌落→1支斜面丙→EMB平板→紫黑菌落→1支斜面丁→EMB平板→粉红菌落→1支斜面※斜面正面上2/3作标记：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。※选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。※在平皿底部玻璃上，画个大圈选取菌落，得到同组同学认可，才能挑取。第19页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三画圈选菌落第20页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三画圈选菌落第21页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三甲→黄色丙→紫黑乙→白色丁→粉红接种环→套住菌落→轻刮取菌第22页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三斜面接种法StreakSlantMethod甲→黄色,乙→白色。丙→紫黑,丁→粉红。标记：组号，颜色①接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。②再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。③细菌涂布接种在斜面培养基的表面。第23页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三生物安全警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径＞100um沉降很快,＜50um在0.4s内扩散开,＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。第24页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三灭菌收集平板→灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置）→速送灭菌室→高压蒸汽灭菌→洗刷。第25页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三第26页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三奥林巴斯CX21型生物显微镜第27页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三使用须知显微镜是精密光学仪器，请不要让其受到撞击，请小心操作。在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。★如果拿住载物台①和镜筒②等部位搬运的话，有可能会造成损坏。第28页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三开关与调整光强开或关之前，必须将亮度调整旋钮②按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。电源开关①拨到∣侧为开，拨到○侧为关闭。按箭头方向转动亮度调整旋钮②变亮，相反方向转动则变暗。第29页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三聚焦从显微镜的侧面观察，按箭头方向转动粗调旋钮①，使物镜③尽可能接近标本。一边看目镜，一边慢慢逆箭头方向转动粗调旋钮①，使载物台下降。看到标本以后，用微调旋钮②来正确对焦。★10倍物镜的工作距离（WD，从物镜到标本的距离）为10.5mm。★油镜的WD为0.13mm。第30页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三调整聚光镜位置和孔径光阑用聚光镜上下移动旋钮①，将聚光镜转到最上面。在孔径光阑环②上刻有物镜倍率（10倍，100倍等），观察时将与使用物镜相对应的倍率放到正面。第31页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三转换物镜旋转物镜转盘①，将希望使用的物镜（10倍、100倍）转到标本的上方。第32页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三100倍浸油物镜使用方法油镜放入光路之前，一定要在标本的观察部位上加一滴浸油。旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。如果浸油内有气泡，会影响观察，可稍微旋转物镜转盘，使油镜来回通过1～2次浸油，排除油内气泡。第33页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三香柏油折射率n=1.515空气的折射率n=1.000玻璃的折射率n=1.520油浸镜的原理光线

滴加香柏油可使光线更多进入物镜,避免光线通过折射率低的空气而散失,以提高物镜的分辨率,使物象明亮清晰。放大倍数：目镜10倍×物镜90或100倍。≈第34页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三奥林巴斯CX21型生物显微镜（实验柜内，每人一台）注意：只能横放，不得竖放。第35页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三显微镜油镜的使用P1310×物镜→看到标本→滴加香柏油→100×油镜→浸泡油中→模糊物象→细调节调焦，观察物像→记录结果→关闭电源。将聚光镜调到最高处；孔径光阑环上刻有的物镜倍率（10×，100×）必须转到正面，与使用的物镜相对应。油镜处理：擦镜纸拭去香柏油→擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭→擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩→横放在实验柜内。★(顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。★（校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。第36页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三医学微生物学实验

综合性实验三、一空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析脓汁和粪便标本中病原菌的检测菌落特征观察P11细菌纯培养P10油镜使用方法（讲解）脓汁标本检验（录像）肠道致病菌的分离鉴定（录像）第37页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三①试管用毛刷，上下刷洗内壁和管底。②字迹用湿纱布，粘去污粉擦拭。③管口朝向相同，流水冲洗10次。④洗干净的试管，倒扣在筐内，晾干。平皿用纱布，旋转擦拭内外侧，字迹用纱布粘去污粉擦拭。流水冲洗10次。逐个倒扣在筐内，晾干。第38页，讲稿共42页，2023年5月2日，星期三思考题在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?空气的卫生标准规定如何?你的实验结果说明了什么问题?怎样从医务人