细胞与遗传实验五 微核检测

细胞与遗传实验

细胞与遗传医学系1微核检测2原理环境中有害物质可导致细胞中染色体或纺锤体的损伤，产生的染色单体或无着丝粒片断染色体在细胞分裂末期滞留于子细胞胞质中，形成微核。3原理本实验选用培养细胞，用顺铂作诱导剂（射线、环磷酰胺等），促使细胞中染色体断裂，产生微核。微核经Giemsa染色后呈紫红色，胞质被染成淡灰蓝色。4目的观察微核的形成不同剂量顺铂Hela----顺铂（20umol/l,24h）Hela----顺铂（40umol/l,24h）Hela----顺铂（60umol/l,24h）Hela----缺糖损伤24h5器材与试剂显微镜、载玻片、培养细胞（小盖片）甲醇固定液PBS（pH7.4）Giemsa应用液（临用现配）

Giemsa原液：PBS＝1：9混合而成。6操作

培养细胞（小盖片）——加顺铂——PBS洗涤3次（careful！！）——甲醇固定5min——Giemsa染色5min——自来水冲洗（careful！！）——显微镜下观察——计数789101112注意事项正确掌握微核的形态特征，避免假阳性。以有核细胞形态是否完好作为判断制片优劣的标准13人类染色体G显带标本的制备14核型（karyotype）一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征顺序排列所构成的图像

非显带核型（染色体分组）A、B、C、D、E、F、G七组非显带核型15人类核型分组与各组染色体形态特征（非显带标本）

组号染色体号大小着丝粒位置次溢痕随体可鉴别程度A1~3最大中（1、3号）亚中（2号）1号常见

可鉴别B4~5次大亚中

难鉴别C6~12、X中等亚中9号常见

难鉴别E16~18小中（16号）亚中（17、18号）

16号可鉴别，17、18难鉴别F19~20次小中

难鉴别G21~22、Y最小近端

21、22号有，Y无难鉴别16显带G显带（Gbanding）Q显带（Qbanding）荧光显带，同G显带带纹R显带（Rbanding）反G带T显带（Tbanding）末端显带C显带（Cbanding）结构异染色质（着丝粒等）显带N显带特异显示随体及核仁形成区高分辩染色体显带技术17G显带1819Tbanding2021

常规G-banding使每个单倍体（24条染色体）都可以显示350~550条带，每条带大约代表5x106~10x106bp的DNA。每个基因长度不等，从102bp（a珠蛋白基因）~2x106bp（抗肌萎缩蛋白基因）。

22实验原理

经烤片处理的染色体标本用热、碱、各种蛋白酶、尿素等处理后，再用Giemsa染料染色，在油镜下可看到染色体两臂显示出着色深浅不同的横纹。最常用的是胰蛋白酶法。“深带”---Giemsa着色的带纹“浅带”---不着色或者基本不着色的带纹23原理

G显带深染带富含AT，富含长分散DNA序列（longinterspersedsequence，LINES）是DNA的重复区域，不编码表达基因.

G显带浅带，富含GC，含有许多转录基因。这种DNA在间期核中呈现较为伸展的状态。除了转录基因之外，它含有短分散DNA序列（shortinterspersedDNAsequence，SINES）。包括Alu序列。染色体上大多数断裂点和重排被认为是发生在浅染带。24

试剂及器材

器械：37℃恒温水浴箱、染色缸、刻度吸管、滴头

试剂：胰蛋白酶、0.4%酚红、5%NaHCO3、Giemsa原液、pH7.4磷酸盐缓冲液，0.85%生理盐水。25实验步骤取胰酶25mg，溶解于盛有50

ml0.85%生理盐水的染色缸中，并置37℃恒温水浴箱中，加入0.4%酚红2滴，混匀，然后以5%NaHCO3调节pH为6.4-6.6。

26实验步骤待胰酶液温度升至37℃后，将染色体标本片放入胰酶液中，并轻轻摆动，55秒后取出，立即自来水冲洗。27实验步骤染色液配制：pH7.4磷酸盐缓冲液4.5

ml

Giemsa原液0.5

ml染色8-10分钟。自来水冲洗，空气干燥，镜检。28实验结果低倍镜下可看到中期分裂相，进而转至高倍镜及油镜下观察，可见染色体较为饱满，分布均匀，着色较好，沿染色体长轴可显出深浅不同的G带横纹。2930人类染色体G带歌谣：

一秃二蛇三蝶飘，四像鞭炮五黑腰；六号像个小白脸，七盖八下九苗条，十号长臂近带好，十一低来十二高；十三、四、五一二一；十六长臂缢痕大，十七长臂带脚镣，十八白头肚子饱；十九中间一点腰，二十头重脚飘飘；二十一好象黑葫芦瓢，二十二头上一点黑；X染色一担挑，Y染色长臂带黑脚。31染色体G显带11223322X32结果人33结果猴子3435A组：1-31号：最大的中着丝粒染色体，短臂远端带少，“1秃”2号：亚中着丝粒染色体，长短臂上带较多，“2蛇”3号：中央着丝粒染色体，着丝粒上下有两条深染的宽带相对称，“3堞腰”12336B组：4-5，亚中着丝粒4号：短臂1~2条带，长臂4条带，均匀，接近中心粒的一条深。5号：短臂1-2条带，长臂4条带，3条带集中，第4条带靠近末端。4537C组：6-12，X亚中着丝粒6：短臂中段有一条明显而宽阔的浅带(似“小白脸”)7：短臂有3条深带，远侧深带着色浓（似“瓶塞”）8：长臂有三条分界极不明显的深带，远侧带着色浓

9：长臂次缢痕不着色，呈现特有的狭长颈部区(“细脖子”）10：长臂有三条深带，近侧带着色最深，与8号鉴别11：长臂远侧段有一宽的深带，与近侧深带间有一宽浅带12：长臂中段有一宽深带，与近侧深带之间有一窄的浅带X：

长短臂各有一深带，以着丝粒为中点对称，呈竹节状678910111238D组：13-15，近端着丝粒13号：长臂远端有3条较深染的带14号：长臂的近端及远端各有一条深带15号：长臂中央有一条深染的带13141539E组：16-1816号：中央着丝粒，次缢痕着色浓，与着丝粒形成“△”浓染区17号：亚中着丝粒，长臂远侧段有1条深带，与着丝粒之间为一明显而宽的浅带18号：亚中着丝粒，长臂近侧和远侧各有一条明显的深带

16171840F组：19-20，中央着丝粒19号：是核型中染色最浅的染色体，着丝粒及其周围为深染，其余均为浅带20号：长臂及短臂各有一条深带，长臂较明显192041G组：21-22，Y，近端着丝粒21号：着丝粒区着色淡，近侧有一明显浓染而宽的深带22号：着丝粒区着色浓，长臂有二条深带Y：长度变化较大，无随体，有时整个长臂被染成深带。2122Y42环状染色体(ringchromosome)易位(translocation)倒位(inversion)重复

——部分三体型(partialtrisomy)缺失

——

部分单体型(partialmonosomy)染色体结构畸变的种类43易位(translocation)相互易位(reciprocaltranslocation)44环状