液相色谱维护基础知识

液相色谱维护基础知识第1页，课件共35页，创作于2023年2月内容介绍时间内容负责人8:30-9:00签到9:00-9:10开场致辞内容介绍陈有新9:10-10:00气相色谱基础理论及气相色谱分析方法改善王妍10:05-10:15休息茶歇抽奖10:15-10:45气相色谱柱的维护与选择邹敏10:45-11:30液相色谱柱实用技术及液相色谱维护保养陈有新11:30-11:50岛津公司最新UFMS产品介绍陈有新11:50-12:00抽奖答疑郭志远12:00-13:30精美中餐中联大酒店第2页，课件共35页，创作于2023年2月液相色谱实用技术2013年12月17日丹东第3页，课件共35页，创作于2023年2月内容介绍液相色谱基础介绍液相色谱柱种类介绍液相色谱柱常见问题解决液相色谱柱的保养第4页，课件共35页，创作于2023年2月HPLC工作流程图

第5页，课件共35页，创作于2023年2月色谱柱

在一个圆筒型管子里，填装细微颗粒的填料，是整个分析过程的心脏。有各种类型的填料（分离模式），要根据分析的目的成分的不同，进行合理的选择与使用。第6页，课件共35页，创作于2023年2月色谱柱横截面（单位：mm）HPLC色谱柱（一般情况,20～300mm×1～4.6mmI.D.)

（材质：SUS、PEEK）填料（单位：μm）・硅胶・聚合物扩大扩大无数的细孔（单位：10nm）官能基色谱柱和填料7第7页，课件共35页，创作于2023年2月正相填料（固定相极性>流动相极性）反相填料（固定相极性<流动相极性）离子交换型填料尺寸排阻型填料其他不同填料对应不同的分离模式用途不同的填料分类8第8页，课件共35页，创作于2023年2月液相色谱柱键合相选择参考名称

别名

功能基团

正相

反相

离子对

应用

Silica

-OH√

极性和中等极性以及非离子性有机化合物

Bμtyl

C4

-C4H9

√

√

分离肽和蛋白质，保留时间比C8和C18短。

MOS

C8,Octyl

-C8H17

√

√

中等极性到强极性化合物，小肽和蛋白质，极性药物、甾族环境样品。

ODS

C18

-C18H37

√

√

烷基键合相中对中等极性化合物保留最强。广泛用于药物、甾族化合物、脂肪酸和环境样品。

CPS

CN,Cyano(Propylnitrile)-(CH2)3CN

√

√

对极性化合物有独特的选择性，适合正相分离；当用于反相系统时，其选择性与C8和C18不同。在药学领域和复杂混合物的分离中应用广泛。

APS

NH2(Aminopropy)-(CH2)3NH2

√

√

反相中分析糖类和其他极性化合物；弱阴离子交换分析，阴离子和有机酸则应用缓冲剂和有机改性剂做流动相；正相中与硅胶的选择性不同。

Phenyl

-(CH2)3C6H5

√

√

苯环及芳香族化合物

Diol

-(CH2)3OCH2CHOHCH2OH√

√

反相时，分离肽和蛋白质。正相时，与硅胶选择性相似，但极性较弱

SCX

强阳离子次换

-(CH2)2C6H4SO3H-

√

有机碱

SAX

强阴离子交换

-(CH2)3N+（(CH3)3

√

有机酸、核苷和核苷酸

9第9页，课件共35页，创作于2023年2月色谱柱常见问题解决第10页，课件共35页，创作于2023年2月色谱柱是液相色谱仪的心脏

现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解。不要总是首先埋怨色谱柱!!!第11页，课件共35页，创作于2023年2月

3.1.1谱峰分叉首先判断柱头是否柱头塌陷?(按色谱柱评价报告的条件评价色谱柱)色谱柱使用过程中易出现的问题及解决办法第12页，课件共35页，创作于2023年2月修补前后现象

第13页，课件共35页，创作于2023年2月原因:

a.柱头塌陷

b.柱外死体积

c.柱头填料污染

d.进样阀密封问题

e.样品分解

f.色谱柱填充不实

g.色谱柱受到强烈振动第14页，课件共35页，创作于2023年2月

样品分解第15页，课件共35页，创作于2023年2月解决办法：a.流动相含盐时,冲洗系统要用20%的甲醇／水，不要用纯水冲柱,修补色谱柱；b.检查进样阀→色谱柱→检测器的管路连接有无死体积,更换密封环(刃环)；c.严格过滤流动相和样品,修补色谱柱；d.检修进样阀。

第16页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.2柱压过高不要认为压力高就是色谱柱的问题首先判断是否是色谱系统管路阻塞?方法:(分段检查泵→在线过滤器→进样阀→色谱柱→检测器→排液管)第17页，课件共35页，创作于2023年2月原因:

a.在线过滤器阻塞

b.进样阀定量管阻塞

c.管路阻塞

d.保护柱阻塞

e.压力传感器不准确

f.泵流量偏大

e.色谱柱的问题第18页，课件共35页，创作于2023年2月色谱柱问题

微粒堵塞流动相改变造成粘度变化柱床膨胀样品在色谱柱上不可逆吸附细菌滋生联系色谱柱生产厂家寻求帮助。

第19页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.3

重复性差实验的重复性差色谱柱被污染流动相pH值及组成不合适造成键合相流失，如通常的硅胶基质色谱柱在碱性条件下使用样品溶剂不同或样品本身不稳定进样技术问题第20页，课件共35页，创作于2023年2月原因：色谱柱被污染官能团坍塌色谱柱内的死体积流动相pH值及组成不合适造成固定相流失流速急剧变化造成固定相物理损坏机械震动造成固定相产生裂缝柱床收缩或干涸3.1.4柱效降低第21页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.5鬼峰或假峰进样阀或注射器污染样品溶剂与流动相不同样品中有空气流动相中杂质引起20%到100%甲醇梯度第22页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.6柱外效应小于3mm内径的色谱柱进样阀和色谱柱、色谱柱和检测器之间用短的细内径的连接管用无死体积接头用较小体积的检测池进样体积减小第23页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.7色谱峰分裂柱外死体积柱头填料污染部分阻塞进样阀密封问题化合物一起洗脱第24页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.8色谱峰展宽所有的色谱峰展宽柱效降低进样体积太大部分色谱峰展宽上次进样洗脱的色谱峰蛋白或聚合物等高分子量化合物第25页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.9色谱峰拖尾部分色谱峰拖尾次级保留效应–残留硅醇基的作用在大峰的尾部有小峰所有色谱峰拖尾柱外效应柱头污染重金属离子色谱柱填充不理想第26页，课件共35页，创作于2023年2月3.1.10峰前伸色谱柱没有充分平衡在主峰前有小色谱峰流动相的溶剂强度低于溶解样品的溶剂第27页，课件共35页，创作于2023年2月色谱柱筛板问题强保留的样品组分色谱柱填充不良压力影响化学影响通常的硅胶基质色谱柱，其pH使用范围为2～83.1.12色谱柱寿命色谱柱作为消耗品具有一定的使用寿命，应在日常使用过程中注意以上事项，尽量延长色谱柱的寿命。第28页，课件共35页，创作于2023年2月养成良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，请先检测柱效；保存新色谱柱所得结果及实验条件；定期检测柱效。2.色谱柱的使用及保养第29页，课件共35页，创作于2023年2月2.1

色谱柱的使用及操作流动相的转换

特别是正、反相互换，及使用GPC柱温度的变化

常规色谱柱温度不超过60℃流速(压力)的变化幅度

避免流速(压力)突然变化特殊色谱柱∶样品及溶剂的要求切记∶拿到一支新色谱柱时，

一定要先看其使用说明！第30页，课件共35页，创作于2023年2月2.2色谱柱的保养流动相样品其它方面第31页，课件共35页，创作于2023年2月流动相：使用色谱纯溶剂，并与填料相匹配超纯水或二次蒸馏水若使用缓冲液作流动相缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液(盐)的浓度缓冲盐过滤流动相对样品的溶解度第32页，课件共35页，创作于2023年2月样品：除去样品中的微粒及杂质SPE或过滤等方法了解样品在流动相中的溶解度如样品溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用第33页，课件共35页，创作于2023年2月其它方面