3种不同剂量丹参酮ⅡA磺酸钠对力竭运动大鼠心肌

3种不同剂量丹参酮ⅡA磺酸钠对力竭运动大鼠心肌研究已证明力竭运动可造成心肌损伤[1-2]，对极少数运发动可造成运动猝死。本研究从新角度研究力竭运动造成心肌损伤的机理，寻求理想剂量丹参酮干涉保卫心肌细胞。在前期研究基础上，进一步研究怎样更好地加强运发动的运动能力，以及减少力竭运动对心肌的损害的有效方法，采取不同剂量丹参酮分别干涉力竭运动后的大鼠，旨在寻求干涉保卫心肌细胞的丹参酮最佳剂量，讨论不同剂量丹参酮干扰力竭运动后大鼠的心肌恢复和保卫作用。1?材料与方法1.1?实验材料1.1.1?实验动物?选用30只3个月健康的清洁级SD雄性大白鼠，均来自福建药大学实验动物中心，分笼饲养，平均体重〔18022〕g。实验室内自在饲养，以国家标准啮类动物饲料喂食及饮水，大鼠适应1周后进行游泳实验。1.1.2?实验药物?丹参酮ⅡA磺酸钠[阿尔贝拉医药控股〔通化〕，H22026452，规格5mL∶20mg]。1.1.3?训练设备?300L塑料水箱1个，四壁光滑，水深为60cm，约为大鼠身长的2倍，水温25～28℃。1.2?实验方法1.2.1?力竭模型制造?大鼠力竭训练采取游泳耐力训练方式，每只大鼠的尾部加上其本身体重7%的负荷以提升大鼠有用的负荷度，天天上午、下午各训练1次，每次力竭标准参考Thomas等报道的文献内容，以大鼠下沉10s不露出水面为准，天天共2次，维持3周。1.2.2?实验分组?将30只大鼠随机分为A、B、C、D、E共5组，每组6只。A组：大鼠自在饮食，惯例饲养，不做任何训练。B组：大鼠根据力竭模型规定做力竭运动。C组[低剂量组，10mg/〔kgd〕]：力竭运动后腹腔打针丹参酮低剂量组。D组[中剂量组，15mg/〔kgd〕]：力竭运动后腹腔打针丹参酮中剂量组。E组[高剂量组，20mg/〔kgd〕]：力竭运动后腹腔打针丹参酮高剂量组。每周训练6d，周日休息，共训练3周。1.2.3?取材与指标观察?实验动物在训练3周后，各组同时取材，打针0.3%戊巴比妥钠1mL/100g麻醉，将大鼠胸腔翻开暴露心脏，在心脏尚在跳动时，心尖部位取下1条直径约1mm的心肌组织，立即用4℃的3%戊二醛-1.5%多聚甲醛-0.1mmol/L磷酸盐缓冲液〔pH=7.2〕固定，切成1mm3细的小块，在装有上述溶液的小瓶中固定4h，用磷酸盐缓冲液漂洗后，接着用4℃的1%饿酸再固定1.5h，漂洗后用系列酒精、丙酮脱水，环氧树脂618包埋。经半薄切片定位，超薄切片60nm，用醋酸铀、枸橼酸铅染色HE500，置Hu-12A型透射电镜75kV下观察。对每例标本统一于5000倍、10000倍、20000倍等3个放大倍数观察并随机拍摄全貌、部分和细胞器。2?结果正常情况下，心肌纤维排列基本正常，轻度空泡变性，心肌细胞核正常，线粒体形态构造正常。力竭运动可造成大部分心肌细胞的肌丝溶解，大量线粒体肿胀，一些区域的肌膜不完好，致使心肌细胞线粒体等细胞器外溢；腹腔打针丹参酮低、中、高剂量组3组心肌纤维构造，细胞器较正常饲养组无明显变化。见图1。3?讨论力竭运动的动物模型当前常用的重要有两种方法：力竭游泳过度训练和跑台大强度耐力训练[3-4]。力竭游泳过度训练又称递增负荷游泳训练，根据经典的Thomas的方法，对大鼠的力竭运动模型的建立采取游泳耐力负荷训练，高强度负荷运动训练3周后，即构成大鼠力竭运动心肌损伤模型。与跑台大强度耐力训练比较，力竭游泳过度训练模型的建立所需的实验条件简便，可操作性强，条件可控。本研究中B组结果证明力竭运动可造成大鼠心肌构造毁坏，显微结果可见大部分心肌细胞肌丝溶解，线粒体肿胀，肌膜损伤，部分细胞器外溢。力竭游泳过度训练方法简单，反复性好，结果可靠，可作为后继研究的动物模型，与之前的研究结果一致[5]。传统各种中药及有效成分对过度运动训练后损悲伤肌有一定的的保卫作用[6]，尤其近期研究表示清楚丹参及丹参酮ⅡA对心肌均有一定的保卫作用[7-9]。〔本经〕记载丹参主心腹邪气，肠鸣幽幽如走水，寒热积聚；破症除瘕，止烦满，益气，具有活血祛瘀，安神宁心，排脓，止痛的成效[10]。现代实验研究已证明丹参含有脂溶性成分：根茎中分得丹参酮Ⅰ、ⅡA、ⅡB、隐丹参酮等。丹参有如下重要药理作用[11]：对血管作用：扩张冠脉，增长心肌血流量；扩张外周血管，血流增长；脑血流量下降；扩张外周血管，改善微循环，促进组织的修复与再生作用；去除自在基；促进组织的修复与再生，坏死心肌去除快，减轻缺血组织再灌注损伤、抗心肌缺氧；丹参制剂中含有隐丹参酮、二氢丹参酮，对体外的葡萄球菌、大肠杆菌、变性杆菌有抑制造用，加强免疫和抗肿瘤等作用。中医理论上以为力竭运动病机气虚血瘀，筋脉失养，表现为心肌缺氧、缺血再灌注损伤等，丹参因其具有活血化瘀、改善微循环、通脉养心等成效在治疗心肌缺氧和保卫缺血灌注损伤有很大优势，治疗效果明显，另外，丹参在我们国家的药源广、价格较廉价，因而广泛应用与、运动医学的领域。治疗心脑血管疾病时去除氧自在基的重要成分为丹参中含量最丰富的是丹参酮ⅡA磺酸钠，丹参酮是最具有代表性的构造，可改善心肌缺血及再灌注损伤，抑制细胞调亡等[12-13]。本研究结果表示清楚不同剂量对力竭运动后大鼠心肌均具有保卫作用，但以中剂量改变心肌构造较为明显，其机理可能为丹参酮能够减轻由运动产生的内源性自在基对线粒体的损害，具有较强的抗自在基损伤和抗脂质过氧化损伤的作用，到达保卫心肌的作用。观察不同剂量丹参酮对损害心肌形态构造的影响，可为今后进一步研究丹参酮抗心肌损伤分子机制奠定理论基础。[以下为参考文献][1]GulM，DemircanB，TaysiS，etsofendurancetrainingandacuteexhaustiveexerciseonantioxidantdefensemechanismsinratheart[J].ComparativeBiochemistryandPhysiologyA-molecularIntegrativePhysiology，2006，143〔2〕：239-245.[2]HuangCC，LinTJ，LuYF，ettiveeffectsoflargininesuppl