第七章经典免疫学技术黑白般

第七章经典免疫学技术黑白般第1页，课件共58页，创作于2023年2月经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应第2页，课件共58页，创作于2023年2月经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应第3页，课件共58页，创作于2023年2月沉淀反应

可溶性抗原与相应抗体在液相或凝胶中特异性结合后，形成的免疫复合物在一定条件下出现的蛋白质析出现象。

第4页，课件共58页，创作于2023年2月沉淀反应原理沉淀原（precipitinogen）沉淀素（precipitin）第5页，课件共58页，创作于2023年2月沉淀反应的种类

1．溶液中沉淀反应

2．凝胶中沉淀反应第6页，课件共58页，创作于2023年2月溶液中沉淀反应是指在清彻透明的液体中，呈溶解状态的抗原与抗体在试管内或凹玻片上混匀，可凝聚成为肉眼可见的絮状或颗粒状的不溶性沉淀物。第7页，课件共58页，创作于2023年2月絮状沉淀试验康氏反应（Kahn‘stest）:心肌提取的类脂质抗原+反应素（Aegagin）敏感性高，特异性差，易出现假阳性。(1991年首批淘汰)性病研究实验室法(venerealdiseaseresearchlaboratory，VDRL)心拟脂及卵磷酯+反应素（Aegagin）不需加热的血清反应素试验(unheatedserumreagin)心拟脂及卵磷酯+氯化胆碱+反应素（Aegagin）第8页，课件共58页，创作于2023年2月反应最适比测定（1）抗原稀释法（Dean-Webb法）（2）抗体稀释法（Ramon法）（3）方阵法或棋盘格滴定法（checkerboardtitration）第9页，课件共58页，创作于2023年2月环状沉淀试验

（ringprecipitationtest）Ascoli于1902年建立用于检查兽类内脏、毛皮浸液等标本中的炭疽杆菌抗原第10页，课件共58页，创作于2023年2月免疫比浊法

（immunoturbidimetry）优点：校正曲线稳定，简便快速，易于自动化，无放射性核素污染缺点：特异性、灵敏度稍差第11页，课件共58页，创作于2023年2月免疫比浊法的分类（1）透射比浊法（transmissionturbidimetry）（2）散射比浊法（nephelometry）（3）免疫胶乳浊度测定法（immunolatexturbidimetry）（4）速率抑制免疫比浊法（rateinhibitionimmunoturbidimetry）第12页，课件共58页，创作于2023年2月免疫沉淀技术

（Immunoprecipitationassay）第13页，课件共58页，创作于2023年2月免疫共沉淀技术

（Co-Immunoprecipitationassay）第14页，课件共58页，创作于2023年2月GSTPULLDOWN第15页，课件共58页，创作于2023年2月小G蛋白结合活性检测第16页，课件共58页，创作于2023年2月免疫共沉淀的局限性（1）难以检测低亲和力和短暂的相互作用（2）不能够确切分辨第三种蛋白的桥联作用（3）灵敏度不如亲和色谱高（4）需对未知蛋白的相关信息有一定了解第17页，课件共58页，创作于2023年2月染色质免疫共沉淀第18页，课件共58页，创作于2023年2月RNA免疫沉淀在生理状态下对结合在RNA上的蛋白质进行免疫沉淀，然后通过基因芯片或者其它手段检测目的RNA的含量。第19页，课件共58页，创作于2023年2月免疫沉淀中抗体的选择第20页，课件共58页，创作于2023年2月免疫共沉淀技术的应用第21页，课件共58页，创作于2023年2月单相免疫扩散试验

（singleimmunodiffusion）第22页，课件共58页，创作于2023年2月双向免疫扩散试验

（doubleimmunodiffusion）第23页，课件共58页，创作于2023年2月免疫电泳

（immunoelectrophoresis）第24页，课件共58页，创作于2023年2月对流免疫电泳

（counterimmunoelectrophoresis）第25页，课件共58页，创作于2023年2月火箭免疫电泳

（rocketimmunoelectrophoresis）第26页，课件共58页，创作于2023年2月交叉免疫电泳

（crossedimmunoelectrophoresis）第27页，课件共58页，创作于2023年2月免疫固定电泳

（immunofixationelectrophoresis）首先将蛋白质抗原进行电泳分离，电泳后直接将抗体加于蛋白质区带表面，抗体与对应的抗原就会直接结合，形成的复合物嵌于固相支持物中。第28页，课件共58页，创作于2023年2月免疫印渍技术

（immunoblotting）第29页，课件共58页，创作于2023年2月经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应第30页，课件共58页，创作于2023年2月凝集反应

（agglutination）

颗粒型抗原与相应抗体结合后，在有适当电解质存在下，抗原与抗体充分反应相互聚集，形成肉眼可见的凝集团块。凝集原（agglutinogen）凝集素（agglutinin）第31页，课件共58页，创作于2023年2月凝集反应特点1．凝集反应中抗原颗粒较大抗原，长期静置或离心沉淀可自然下沉２．凝集反应中凝集块主要由抗原形成，而在沉淀反应中，沉淀物主要由抗体形成３．凝集反应：需稀释免疫血清中的抗体，使抗体分子不致于过多；沉淀反应：为了不使抗原过多则需稀释抗原第32页，课件共58页，创作于2023年2月直接凝集反应

（directagglutination）肥达氏反应（Widalreaction）：一种试管凝集反应。用已知的伤寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原，与病人血清作定量凝集试验，以测定患者血清中无相应抗体存在，作为伤寒、副伤寒诊断的参考。第33页，课件共58页，创作于2023年2月血型检测

细胞膜表面血清中A型：A抗原抗B抗体B型：B抗原抗A抗体AB型：A和B抗原无抗A和抗B抗体O型：无A和B抗原有抗A和抗B抗体第34页，课件共58页，创作于2023年2月间接凝集反应

（indirectagglutination）第35页，课件共58页，创作于2023年2月反应类型（1）正向间接凝集反应（forwardindirectagglutination）（2）反向间接凝集反应（reverseindirectagglutination）（3）间接凝集抑制反应（indirectagglutinationinhibitiontest）第36页，课件共58页，创作于2023年2月间接凝集抑制反应第37页，课件共58页，创作于2023年2月病毒的血凝粘病毒、痘类病毒、呼吸道肠道病毒、某些腺病毒等第38页，课件共58页，创作于2023年2月桥梁凝集反应第39页，课件共58页，创作于2023年2月共同凝集反应第40页，课件共58页，创作于2023年2月玫瑰花环种类第41页，课件共58页，创作于2023年2月玫瑰花环试验

（rosettetest）第42页，课件共58页，创作于2023年2月经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应第43页，课件共58页，创作于2023年2月第44页，课件共58页，创作于2023年2月补体参与的抗原抗体反应利用补体作为一种通用试剂来检测反应体系中抗原抗体复合物的存在，并利用补体对红细胞的裂解作用，通过红细胞的变化可以很容易地对反应进行示踪。第45页，课件共58页，创作于2023年2月溶血试验

（hemolyticassay）1942年Rutstein和Walker建立了测定血清中总补体活性的方法。即根据能使反应体系中50%的致敏绵羊红细胞发生溶血的血清的量，计算出每毫升血清中补体的含量。血清中每毫升补体含量（单位）=1/血清用量×稀释倍数第46页，课件共58页，创作于2023年2月补体结合试验

（complementfixationtest，CFT）1906年Wasermann就将其应用于梅毒的诊断，即著名的华氏反应。第47页，课件共58页，创作于2023年2月被动红细胞溶解试验

（passivehemolysistest）将已知抗原吸附在红细胞表面，然后加入待测的抗体和补体，若待测抗体和抗原能够特异性结合形成抗原抗体复合物，就会激活补体的活性，进而造成红细胞的裂解。第48页，课件共58页，创作于2023年2月溶血空斑试验

（hemolyticplaqueassay，HPA）第49页，课件共58页，创作于2023年2月间接溶血空斑试验间接法一般用于测定溶血效率较低的IgG或IgA型抗体，反应过程中需要加入抗球蛋白抗体辅助溶血空斑的形成。第50页，课件共58页，创作于2023年2月改良型溶血空斑试验第51页，课件共58页，创作于2023年2月反向溶血空斑试验第52页，课件共58页，创作于2023年2月免疫粘附血凝试验利用补体的C3b就会与红细胞表面的CR1发生免疫粘附而出现凝集现象来有效地测定各种抗原、抗体或补体含量。第53页，课件共58页，创作于2023年2月经典免疫学技术一.沉淀反应二.凝集反应三.补体参与的抗原抗体反应四.中和反应第54页，课件共58页，创作于2023年2月中和反应

（neutralizationtest）将待测血清与一定量的病原微生物混合，经适当时间作用后，接种于动物或细胞，观察待测血清中是否存在特异性抗体以及抗体能否保护易感的试验动物免于死亡或抑制病毒对细胞的毒害作用。第55页，课件共58页，创作于2023年2月中和反应优势（