限制性内切酶和引物教学课件

隈制性内切酶一基因的剪刀网尔伯限制性内切酶的分类:(三大类)1类,Ⅲ类,Ⅲ类2.1类,Ⅲ类为限制--修饰酶限制性内切活性和甲基化活性,都作为亚基的功能单位包含在同一酶分子中3.类限制性内切酶与甲基化酶是分离的,切割位点专一,适合于DNA重组。二、型限制性内切酶来娠:E.coliB(EcoB);E.cliK12(EcoK)等。同肘具有内切酶和甲基化酶的活性,是一个三亚基双功能酶。辅酶:Mg2、ATP、S-腺苷甲硫氨酸识别位点;15b,非常特异5’-GANNNNNNNNTGCT-33-ACTNNNNNNNNACGA-55N:任一碱基;A:6-甲氯基嘌呤酶切位点:识别位点上游约1000bp处八(类限制修饰酶SAM性状态全甲垂化DNA甲基化DNA非甲基化DNAAIRSaM放入AA0A巧早了早单甲Arp图3-8【酶的限制一修饰机制F1)AM.En/422535,∏I型限制性内切酶是用途最广、最简单的一种限制性内切酶∏I型限制性内切酶的形式多样,从大小上来说,它们可以小到如PwuI(157个氨基酸),也可以比1250个氨基酸的CjeI更大。在已纯化分类的3000种限制性内切酶中,已发现了超过250种的特异识别序列。1、根据酶作用特点进行的分类根据酶的作用特点,∏I型限制性内切酶分为3类A.最善遍的是HhaI,HindⅢ和NotI这样在识别序列中进行切剖的酶。有以下4种情况:a)大部分这类酶都以同源二聚体的形式结合到DNA上,因而识别的是对称序列;b)但有极少的酶作为单聚体结合到DNA上,识别非对称序列。c)一些酶识别连殃的序列(如ECORI识别GAATTO)d)而另一些识别不连续的序列(如BglI识别GCCNNNNNGGC)B.ⅢS型酶另一种比较帟见的酶是所谓的ⅢS型酶,比如FOkI和AlwI,它们在识别位点之外切开DNA。这些酶的大小居中,约为400-650个氣基酸左右;宅们识别连续的非对称序列,有一个结合识别位点的域和一个专门切剖DNA的功能城。一般认为这些酶主要以单体的形式结合到DNA上,但与临近的酶结合成二聚体,协同切开DNA链。因此一些IIS型的酶在切剖有多个识别位点的DNA分子肘,话性可能更高。C.第三种∏型限制性内切酶第三种Ⅱ型限制性内切酶(有时也被称为型隈制性内切酶)是一类较大的、集限制和修饰劝能于体的酶,通常由850-1250个碱基组成,在同一条多肽链上同肘具有限制和修饰酶活性。有些酶识别连续序列,并在识别位点的一端切开DNA链;而另一些酶识别不连续的序到(如BcgI:CGANNNNNNTGC),并在识别位点的西端切开DNA链,产生一小段含识别序列的片段。这些酶的氨基畋序列各不相同,但其结构组成是一致的。他们在N端由一个负责切开DNA的功能域,这个城又与DNA修饰城连接;此外还有一到两个识别特异DNΔ序列的功能城构成C端,或以独立的亚基形式存在。当这些酶与底物结合,它们或行使限制性内切酶的功能切开底物,或作为修饰酶将其甲基化。2、特点①识别位点与酶切位点高度一致,具有高度特异性。Dimerofpyullboundtodna②极为稳定⑦辅酶:Mg+3限制性内切酶的命名原则:①第1个字毋大写,表示来憑物种属名的第一个字母②第2、3个字母小写,表示来娠物种种名的前二个字母⑦如果细菌有不同的血清型,則有第四个字母,小写,且与前3个字母紧紧排在一起。HindIl:Haemophilusinfluensaed④当控制宿主的限制、修饰糸统的遗传因子位于病毒