生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例培训课件

生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例生化药物所谓生化药物是指以天然的动物、植物、微生物等生物体组织和器官为原料，通过化学方法进行提取、精制或者用化工合成方法制成的内源性生理生化物质，用于预防、治疗、诊断疾病。包括由上述这些已知药物加以结构改造或人工合成创造出的自然界所没有的新药物。由于约定俗成，生化药物不包括抗生素（抗生素早已自成体系）；也不包括用微生物(细菌，病毒，主克次体)、微生物和动物毒素、人和动物的血液及组织等制成的供预防、治疗和诊断特定传染病或其它有关疾病的生物制品；习惯上也不包括中药制成的中药制剂。生物化学制药主要采用化学提取法。2生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例

3.中国的三大药源化学药物生物药物中草药生化药品生物制品现代生物技术药物中国药典2005年分为1部、2部和3部药典1部收载药材及饮片，植物油脂和提取物、成方制剂和单方制剂等；药典2部收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及药物辅料等；药典3部收载生物制品，首次将《生物制品规程》并入药典3生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例生化药物的分类（一）：按药物的化学本质来分类（二）：按药物的来源来分类

4生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（一）：按药物的化学本质来分类1：氨基酸及其衍生物类药物2：多肽和蛋白质类药物-----蛋白质类药物有白蛋白、丙种球蛋白、胰岛素，多肽类有催产素、降钙素、胰高血糖素。3：酶与辅酶类药物----消化酶、氧化还原酶、抗肿瘤酶。4：核酸及其衍生物类药物----DNA、RNA、单核苷酸、碱基。5：糖类药物----以粘多糖为主6：脂类药物---脂肪酸类、磷脂类、胆酸类、固醇类、卟啉类。5生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例国内主要的生化药品种类和厂家一览表

药物类别主要常用品种主要生产厂家氨基酸类赖氨酸冲剂、组氨酸、半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸及其盐类；L－半胱氨酸；水解蛋白；思美泰；阿波莫斯以及氨基酸大输液湖北省八峰药业、上海味之素氨基酸有限公司、武汉久安药业（武汉第二制药厂）、广州侨光药厂、深圳万和制药、华瑞制药酶类链激酶、尿激酶、凝血酶、降纤酶、抑肽酶、胰激肽释放酶、弹性酶、立止血、糜蛋白酶、菠萝酶、沙雷肽酶、门冬酰胺酶、透明质酸酶、细胞色素C、达吉、得每通上海生物化学制药厂、广东天普药业公司、南京大学制药厂

核酸类聚肌胞、阿昔洛韦、病毒唑、万乃洛韦、泛昔洛韦、更昔洛韦、胞二磷胆碱、硫唑嘌呤、甲基硫氧嘧啶、阿糖胞苷、ATP、CTP、CAMP、转移因子丽珠医药集团股份有限公司、岳阳生化制药厂、金花企业（集团）股份有限公司6生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例药物类别主要常用品种主要生产厂家糖类甘露醇、葡萄糖、肌醇、右旋糖酐、猪苓多糖、透明质酸、肝素、低分子肝素、果糖、乳果糖、甘油果糖等珠海生化、杭州赛诺菲民生制药有限公司、苏威制药有限公司脂质类角鲨烯、胆固醇类激素、辅酶Q10、脉适宝、熊去氧胆酸、前列腺素、神经节苷脂等广州明兴制药厂、广州星群药业（股份）有限公司、佛山康宝顺药业有限公司多肽及蛋白质类加压素及其衍生物、催产素及其衍生物、促皮质素及其衍生物、下丘脑垂体肽激素、消化道激素、胸腺素、降钙素、谷胱甘肽、施他宁、蛋白质激素

7生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（二）：按药物的来源来分类1：人体来源的生物药物----人血液制品、胎盘制品、尿制品。

2：动物来源的生物药物----蛇毒、蜂毒。

3：植物来源的生物药物----是中草药的主要成份。

4：微生物来源的生物药物------氨基酸、维生素、酶。

5：海洋生物来源的生物药物------种类繁多、成份复杂。8生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人体来源的药物人体来源药物的特点人体来源药物的种类人体来源药物的前景和问题

9生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人体来源药物的特点1：安全性好，药物与人体具有同源性，不会发生排斥反应2：效价高、疗效可靠。纯化的血浆因子制剂，要比原血浆高出10-1000倍。3：稳定性好，提纯产品均可制成冻干制剂，有利于贮存、运输、使用。10生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人体来源药物的种类人血液制品人细胞因子人体来源的其它原料物质人体激素

11生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例血液成份制品又可为：（1）红细胞(RBC)

（2）白细胞(WBC)

（3）血小板

（4）血浆在使有输入全血的治疗措施中，有50%以上的患者只要输入红细胞就已经足够了，另30%则只须输入血液中的其它成份就能达到满意的疗效，因此，利用血液的单一成份进行治疗，已经成为目前的一个趋势。分离血液成份的技术有--离心法、过滤法。12生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人血液制品全血制品血细胞制品血浆制品13生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例红细胞制剂用红细胞代替全血，在国内已经逐渐推广应用。是心脏病、慢性肾病、肝病患者补充血红蛋白的首选品种。全血和红细胞保存于4±2℃内可保存35天冰冻贮藏红细胞，是长期保存红细胞的有效方法，是指地-80℃到-196℃之间的低温进行保存，其优点是可以贮备多年，重融之后性能很好。缺点是贮藏费用太高。14生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例白细胞浓缩液白细胞是生产干扰素（INFa）的重要原料。所采集到的人体白细胞具有组织相容的HLA位点。不同人体之间的白细胞存在着抗原—抗体凝聚反应、和细胞毒性作用。这是制约白细胞制剂应用的原因之一。另外，目前白细胞的体外保存技术尚未解决，这是制约白细胞制剂应用的原因之二。15生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例100,000-300,000/mm34-6million/mm316生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞Neutrophil嗜中性粒细胞Neutrophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜酸性粒细胞Eosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil单核细胞Monocyte嗜碱性粒细胞Eosinophil嗜碱性粒细胞Eosinophil淋巴细胞Lymphocyte17生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例血小板制剂血小板制剂的分离和使用在国外已经比较普遍，而在国内尚未推广应用。血小板制剂的适应症为白血病、淋巴瘤、再生障碍性贫血等等疾病。血小板保存于特制的袋内，在22±2℃内并不断振荡，可保存5天血小板制剂输入人体之后，常常很快会产生抗体，从而使输入的血小板制剂遭到破坏。因此，最好输入那种HLA相容的血小板制剂。18生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例新鲜冰冻血浆（FFP）新鲜冰冻血浆是指刚采集到的新鲜血液，在-30℃的温度下，保存时间不超过1年的血浆。新鲜冰冻血浆能够有效地保存血浆中各种生物活性成份的功能。可在许多临床疾病的治疗中使用。19生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例组成人体血浆的成份血浆占人体体重的量=8%

血浆占全血的量=50%

血浆中的水分占血浆的量=92%

血浆中的蛋白质占血浆的量=6--7%白蛋白（Alb）+免疫球蛋白（IgG）=65%免疫球蛋白（IgG+IgM）+纤维蛋白原（Fg）+补体（C3）+转铁蛋白（Tr）+巨球蛋白（a2M）+触珠蛋白（Hp）+a1抗胰蛋白酶（a1AT）+血色素结合蛋白（Hpx）+a1-酸性糖蛋白G（a1AG）=25%其它百作种微量蛋白质和多肽成份=10%20生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例血浆成分制品转输蛋白类免疫球蛋白凝血系统蛋白补体系统蛋白蛋白酶抑制物类21生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例转输蛋白类转输蛋白是指能够对机体的营养物质、代谢产物、激素、药物进行转输的血浆蛋白。具体有：（1）白蛋白-----转输脂肪酸、色素、阳离子、药物、VC（2）前白蛋白---转输甲状腺素结合蛋白、视黄醇结合蛋白（3）α-类脂蛋白-----转输脂质、胆固醇、激素（4）β-类脂蛋白-----转输脂质、胆固醇、激素（5）触珠蛋白------转输游离血红蛋白（6）血红蛋白结合蛋白------转输游离血红蛋白（7）转铁蛋白------将铁转输给网织红细胞和其它组织（8）铜蓝蛋白-----转输铜，调节铜吸收形成酶（9）转钴胺蛋白-----转输VB12（10）GC球蛋白------转输维生素B族22生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例免疫球蛋白免疫球蛋白构成机体防御感染的体液免疫系统。免疫球蛋白种类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。23生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例凝血系统蛋白凝血系统蛋白维持机体的正常凝血机制。分为：（1）凝血因子。凝血系统共有13种凝血因子（2）抗凝血因子。抗凝血因子有纤溶酶原（Pg），当它被尿激酶激活之后，就具有溶解血栓的作用。

24生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例内源性凝血外源性凝血接触异面组织损伤ⅫⅫaⅪⅪaⅨⅨaⅧCa2+血小板磷脂

ⅩⅩaⅤCa2+血小板磷脂凝血酶原激活物

ⅩaⅩⅤCa2+血小板磷脂Ⅲ凝血酶原(Ⅱ)凝血酶(Ⅱa)

纤维蛋白原(Ⅰ)

纤维蛋白单体纤维蛋白多聚体ⅩⅢaⅩⅢCa2+(接触因子)ⅦCa2+血小板磷脂凝血酶原激活物

Ca2+在凝血过程中的作用血小板磷脂的作用血凝过程的正反馈纤维蛋白对血小板的聚集凝血酶对血小板聚集的促进作用凝血酶对自身形成的促进作用25生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例13种凝血因子因子1-----纤维蛋白原（Fg）

因子2-----凝血酶原（FII）

因子3-----组织因子（FIII）

因子4-----钙离子

因子5-----前加速素，易变因子（FV）

因子6-----

因子7-----前转化素，稳定因子（FVII）

因子8-----抗血友病因子（AHF）

因子9-----血浆凝血激酶成份（PTC）

因子10----Stuart因子（FX）

因子11----血浆凝血激酶前质

因子12----接触因子（FXII）

因子13----纤维蛋白稳定因子（FSF）、激肽酶原（pK）、高分子量激肽酶原（HMW）、纤溶酶原（Pg）、蛋白C（PC）。26生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例纤溶酶原纤溶酶血管内皮纤维溶酶原激活物组织纤维溶酶原激活物血浆纤维溶酶原激活物血浆纤维溶酶原激活物原Ⅻa纤维蛋白降解物血浆中的抗纤溶酶(-)27生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例补体系统蛋白补体系统是机体的主要防御系统之一。（1）补体系统在细胞吞噬、调理、趋化性、细胞凋亡过程中起重要作用。（2）补体系统在自身性免疫疾病中，起着损伤机体的作用。28生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例补体的作用方式分为三种途径（1）补体传统活化途径------9种补体成份（C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9）。其中C1q、C1r、C1s为识别单位，C2、C3、C4为活性单位，C5、C6、C7、C8、C9为膜攻击单位。（2）补体旁路活化途径------B因子、D因子、P因子。（3）补体旁路活化过程中的调节因子-----C36-INA、βIH。29生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例蛋白酶抑制物类a1-抗胰蛋白酶（a1-AT）-----能够保护机体的正常细胞不受蛋白酶的破坏和损伤，能协助控制感染和炎症。a1抗糜蛋白酶（a1X）-----能够保护机体的正常细胞不受蛋白酶的破坏和损伤，维持机体内环境恒定。a间胰酶抑制剂（IaI）----具有制约、中和、清除某些蛋白酶的作用，能防止凝血系统蛋白酶的自身消化。抗凝血酶III（ATIII）------在肝素的促进下，与凝血酶形成复合物，使得凝血酶失活，防止血栓形成。Ci脂酶抑制剂（Ci-INH）------a2巨球蛋白（a2M）----具有制约、中和、清除某些蛋白酶的作用，能防止凝血系统蛋白酶的自身消化。a2抗纤溶酶（a2AP）--------30生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人细胞因子（1）骨骼生长因子（BGF）-------来源于人骨。

（2）骨形成蛋白（BMP）-------来源于人骨

（3）干扰素（IFN）

IFN-α---来源于白细胞----调节免疫活性

IFN-β---来源于成纤维细胞----调节免疫活性

IFN-γ---来源于淋巴细胞----调节免疫活性。

（4）血小板衍化生长因子（PDGF）----来源于血小板

（5）结缔组织活性肽-III（CATP-III）----来源于血小板

（6）白细胞介素-1（IL-1）-------来源于人血、巨噬细胞

（7）白细胞介素-2（IL-2）-------来源于人T淋巴细胞

（8）B细胞生长因子（BCGF）----来源于人末梢血管淋巴细胞（9）骨肉瘤衍化生长因子（ODGF）------来源于人骨肉瘤细胞株

（10）红细胞生长因子（EPO）-------来源于胎儿肾（11）集落刺激因子（CSF）-------来源于人组织、血、尿

（12）促生长因子，生长调节素（SM）-------来源于人血浆

（13）巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）-------来源于人巨噬细胞人细胞因子由于数量十分稀少，目前已经被基因工程产品所代替，如干扰素a、白细胞介素-2（IL-2）的生产31生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人体来源的其它原料物质1、人胎盘2、人尿底蜕膜丛密绒毛膜绒毛膜32生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人胎盘从人的胎盘中提取的蛋白主要有：

（1）人胎盘丙种球蛋白，

（2）人胎盘白蛋白，

（3）人胎盘RNA抑制剂。从人的胎盘中提取的激素有：

（1）绒毛膜促性腺激素（HCG），

（2）绒毛膜促乳激素（HCS）。33生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人尿从健康的男性人尿可以制备：

（1）尿激酶

（2）激肽释放酶

（3）尿抑胃素

（4）蛋白酶抑制剂

（5）睡眠因子

（6）集落刺激因子（CSF）

（7）表皮生长因子（EGF）从妊娠妇女和绝经期妇女尿液中可以提取：

（1）绒毛膜促性腺激素（HCG）34生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例人体激素人体激素主要有：

（1）蛋白质类激素

（2）多肽类激素

（3）氨基酸衍生物类激素

（4）脂类激素人体激素很少是大分子蛋白质，因此很少出现免疫反应。35生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、血液的进一步开发血浆蛋白质总共可以分为五个组分。目前仅仅利用了其中的第1组分（纤维蛋白原）、第2组分（免疫球蛋白）、第5组分（白蛋白），而对于第3组分和第4组分中所含有的大量血浆蛋白成份，基本上没有加以利用。其原因是由于这些物质含量较低，提纯难度较大。第3组分中含有IgA、IgM，凝血因子II、VII、IX、X，蛋白C，纤溶酶原、α2-巨球蛋白，β-微球蛋白，补体成份C3、C4、C5、C8，α-球蛋白，β-球蛋白。第4组分中含有抗凝血酶III，α1抗胰蛋白酶、铜蓝蛋白，转铁蛋白，触珠蛋白，补体Ci脂酶抑制物，前白蛋白。人体来源药物的前景和问题36生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：其它原料的进一步开发----对于胎盘、尿液的提取技术也在不断发展之中。3：现代生物技术的进一步应用----基因工程，蛋白质工程，细胞工程，酶工程在血液制品的生产中有了较大的发展和应用。4：人体组织器管制药的法律问题和伦理问题----国际上禁止利用人的器官和组织来生产药物。37生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例动物来源的药物利用动物的组织器官生产药物。在我国于1950年代开始生产，当时被称为“脏器制药”。1980年之后被称为“生化药物”。目前我国国内已经能够生产200多种来源于动物机体的生化药物动物来源药物的种类和用途动物来源药物的前景和问题38生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例动物来源药物的种类和用途1：动物多肽类药物

2：动物蛋白质类药物

3：动物酶与辅酶类药物

4：动物核苷酸类药物

5：动物糖类药物

6：动物脂类药物

7：动物细胞因子乳汁中分泌人凝血因子IX的转基因山羊39生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：动物多肽类药物（1）多肽激素（2）多肽类细胞因子40生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（1）多肽激素下丘脑激素----促甲状腺激素释放激素（TRH）、生长激素抑制激素（GRIF）、促性腺激素释放激素（LHRH）。垂体多肽激素----促肾上腺皮质激素（ACTH）、促黑激素（MSH）、脂肪水解激素（LPH）、催产素（OT）、加压素（AVP）。甲状腺所分泌的激素----甲状腺素（T4）、甲状旁腺素（PTH）、降钙素（CT）。胰腺所分泌的激素----胰岛素、胰高血糖素、胰解痉多肽。胃肠道激素----胃泌素、胆囊收缩—促胰酶素（CCK--PZ）、肠泌素、肠血管活性肽（VIP）、抑胃肽（GIP）、缓激肽、P物质。胸腺所分泌的激素----胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子。41生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（2）多肽类细胞因子脑氨肽蛇毒胎盘提取物脾水解物肝水解物心脏激素转移因子抗癌肽42生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：动物蛋白质类药物（1）蛋白质类激素-------生长素（GH）、催乳激素（PRL）、促甲状腺素（TSH）、促黄体生成素（LH）、促卵泡激素（FSH）。人绒毛膜促性腺激素（HCG）、绝经尿促性腺激素（HMG）、血清性促性腺激素（SGH）。胰岛素、胰抗脂肝素、松驰素、尿抑胃素。（2）血浆蛋白质-------动物血浆蛋白质与人体的血浆蛋白质有差异，动物血浆蛋白质制品不能直接应用于人体。（3）蛋白质类细胞因子--------（4）粘蛋白-------胃膜素、硫酸糖肽、内在因子、血型物质A、血型物质B。（5）胶原蛋白-------明胶、阿胶、氧化聚合明胶。（6）其它蛋白-------硫酸鱼精蛋白、胰蛋白酶抑制剂43生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例3：动物酶与辅酶类药物（1）促消化酶类-------胰酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶、纤维素酶、木瓜蛋白酶、黑曲霉的酶、胃蛋白酶。（2）消炎酶类-------蛋白酶、溶菌酶、菠萝蛋白酶、a-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、明胶肽酶、酶RNA酶。（3）治疗心血管疾病的相关酶------纤溶酶、尿激酶、蚓激酶、链激酶、凝血酶。激肽释放酶、弹性蛋白酶。（4）抗肿瘤的酶-----L-门冬氨酸酶、谷氨酰胺酶、蛋氨酸酶、组氨酸酶、酪氨酸氧化酶。（5）与生物氧化过程电子传递有关的治疗酶-------细胞色素C、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶。（6）其它药用酶----有机磷解毒酶、青霉素酶。透明质酸酶。（7）动物辅酶类药物-------辅酶Q10、辅酶A。44生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例4：动物核苷酸类药物（1）核糖核酸（RNA）----用于治疗精神迟缓、记忆衰退、动脉硬化性疾呆。静注治疗慢性肝炎、肝硬化、初期肝癌。（2）脱氧核糖核酸（DNA）----具有抗放射性作用，能够改善机体虚弱疲劳。（3）免疫核糖核酸（iRNA）----可用于治疗乙肝、肺癌。（4）转移因子（TF）----治疗恶性肿瘤。（5）聚肌胞苷酸（聚肌胞、poly：C）----是干扰素的诱导物，具有广谱抗病毒作用。45生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（6）核酸-氨基酸混合物---用于气管炎、神经衰弱。（7）辅酶A（CoA）---用于动脉硬化、白细胞减少、血小板减少、肝病、肾病。（8）脱氧核苷酸钠---用于放疗化疗引起的急性白细胞减少症。（9）一磷酸腺苷（AMP）---对外周血管具有扩张作用，治疗静脉曲张性溃疡。（10）三磷酸鸟苷（GTP）---用于慢性肝炎、进行性肌肉萎缩。（11）辅酶I（NAD）---用于白细胞减少、冠状动脉硬化。（12）辅酶II（NADP）---促进体内物质生物氧化。46生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例5：动物糖类药物动物糖类药物以粘多糖为主。（1）粘多糖的种类（2）粘多糖的药用价值（3）粘多糖的制备方法

47生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（1）粘多糖的种类广义的粘多糖包括----（1）粘多糖、（2）粘蛋白、（3）糖蛋白、（4）糖脂。

粘多糖主要分布于动物的骨、软骨、皮、角、血管、肠、滑膜液、脑、角膜、肺、肝、心、尿等等原料之中。48生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（2）粘多糖的药用价值甲壳质（几丁质）----用作人造皮肤、人造血管、手术线。具有消炎、止酸作用。硫酸软骨素（CS）----治疗关节炎、神经痛、腰痛、眼病。具有抗血栓作用，用于治疗多种心脏疾病。肝素----抗凝血药物，治疗血栓疾病。透明质酸（HA）----用于眼科手术、烧伤、化妆品49生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（3）粘多糖的制备方法（1）原料处理（2）提取（3）去除非粘多糖（4）脱色（5）脱蛋白（6）纯化（7）乙醇分级沉淀（8）季铵盐络合沉淀（9）离子交换柱层析分离（10）分子筛分离（11）亲和层析50生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例6：动物脂类药物动物脂类药物主要包括----（1）脂肪酸及其衍生物，（2）磷脂类，（3）胆酸类，（4）固醇类，（5）卟啉及其衍生物类。动物脂类药物主要分布在脂肪组织、肝脏，磷脂类物质主要分布在脑、脊髓之中。（1）动物脂类药物的种类和分布（2）动物脂类药物的制备方法51生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（1）动物脂类药物的种类和分布脑磷脂----分布在脑、酵母之中----用于止血，防止动脉硬化以及神经衰弱。磷脂酰胆碱（卵磷脂）----分布于脑、大豆、卵黄之中----防止动脉硬化以及神经衰弱、肝病。花生四烯酸----分布于动物的肾上腺----降血脂，用于合成前列腺素E2。鱼肝油脂肪酸钠----分布在鱼肝油中----止血、治疗静脉曲张。前列腺素E1、E2----分布于羊精囊之中----降血压、中期引产、催产。52生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例原卟啉----分布于动物血红蛋白之中----治疗急、慢性肝炎。血卟啉衍生物----肿瘤放疗辅助剂。胆红素----从胆汁中来----消炎、抗氧化胆酸钠----从胆汁中来----治疗胆酸缺乏症。胆酸----从胆汁中来----合成人工牛黄的原料。猪去氧胆酸--从胆汁中---降胆固醇、治疗气管炎。人工牛黄----配制----消炎、解毒。胆固醇----于脑、脊髓----合成人工牛黄的原料。辅酶Q10---分布心肌----治疗高血压、急性肝坏死。53生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（2）动物脂类药物的制备方法提取法（索氏提取法）----可用于提取脑磷脂、）磷脂酰胆碱（卵磷脂）、脂肪酸。水解法----通过水解血红素，可以制得原卟啉。生物转化法----花生四烯酸通过生物转化，可变成前列腺素E1、E2。化学合成和半合成法-----不常用。54生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例7：动物细胞因子（1）骨髓生长因子（BGF）（2）骨髓衍化生长因子（BDGF）（3）软骨衍化生长因子（CDGF）（4）软骨衍化因子（CDF）（5）骨形成蛋白（BMP）（6）细胞分裂因子（CDF）（7）内皮细胞衍化生长因子（ECDGF）（8）内皮细胞生长因子（ECGF）55生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（9）表皮生长因子（EGF）（10）成纤维细胞生长因子（FGF）（11）酸性成纤维细胞生长因子（AFGF）（12）脑成纤维细胞生长因子（BFGF）（13）胰岛素样生长因子（IGF）（14）神经生长因子（NGF）（15）多功能集落刺激因子（Multi-CSF）（16）乳腺刺激因子（MSF）（17）睾丸衍化生长因子56生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例动物来源药物的前景和所要注意的问题1：发展前景2：问题

57生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：发展前景（1）动物来源药物的原料十分丰富，可以从中制备出人体所需要的各种生物活性物质。（2）动物来源药物的活性成份的深入研究，尤其是动物毒素的研究。（3）利用生物技术+化学技术进行合成和半合成。（4）现代生物技术在动物来源药物制造上的应用。58生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：所应该注意的问题组织相容性问题----是动物来源药物的核心难题，动物来源药物的蛋白质注射到人体内，会产生抗原反应，严重者会危及生命。59生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例植物来源的药物植物来源的药物的种类和用途植物来源的药物的研究前景

60生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例植物来源的药物的种类和用途植物来源的药物是我国中草药的主要来源，经过详细记载的就有5000种。分类1：根据药用价值来分类2：根据化学结构来分类种类1：植物蛋白质、多肽、酶类以及药理作用2：植物糖类生物活性物质以及药理作用3：植物脂类生物活性物质以及药理作用

61生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：根据药用价值来分（1）抗肿瘤药物----喜树碱、秋水仙碱、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、靛玉红。

（2）强心药----铃兰毒苷、去乙酰毛花洋地黄苷、洋地黄毒苷、地高辛。

（3）抗菌消炎药----鱼腥草素、秦皮乙素、黄苓苷、穿心莲内脂，盐酸小檗碱。

（4）抗凝血药----双豆香素。

（5）镇痛药----盐酸吗啡、颅痛定、延胡索已素、桉油。

（6）作用于神经系统的药物----咖啡因、盐酸可卡因，刺乌头碱、天麻素。

（7）搞疟药物----盐酯奎宁、青蒿素。

（8）止咳平喘药物----磷酸可待因、茶碱、艾叶油、牡荆油、芸香草油，满山红油。62生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：根据化学结构来分（1）：糖和糖苷类（2）：苯丙素类----苯丙烯、苯丙酸、香豆素（3）：醌类----辅酶Q10、紫草素。（4）：黄酮类----黄酮醇、花色素、黄苓苷（5）：鞣质----奎宁酸、槲皮素（6）：萜类物质----青蒿素、齐墩果酸（7）：甾体类物质----乌沙苷原、毛地黄毒苷（8）：生物碱----咖啡因、喜树碱63生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：植物蛋白质、多肽、酶类以及药理作用（1）天花粉蛋白----用于引产，能够水解糖苷键。

（2）蓖麻毒蛋白----抗癌。

（3）植物凝集素（PHA）----凝集红细胞、白细胞。

（4）胰蛋白酶抑制剂---抑制胰蛋白酶、治疗胰腺炎、烧伤。

（5）相思豆毒蛋白----抗癌。

（6）苦瓜胰蛋白----降血糖。

（7）菠萝蛋白酶----消炎、水解蛋白质、促消化。

（8）木瓜蛋白酶----促消化、消炎。

（9）无花果蛋白酶----驱虫剂。

（10）木瓜凝乳蛋白酶----促消肿、消炎。

（11）辣根过氧化物酶（HRP）----诊断试剂。

（12）麦芽淀粉酶----助消化。

（13）脲酶----分解尿素。（14）植物SOD酶----抗氧化。（15）辣根过氧化物酶的提取64生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：植物糖类生物活性物质以及药理作用（1）单糖类----葡萄糖、果糖、核糖、脱氧核糖、木糖、（2）单糖酸类----维生素C。（3）单糖醇类----木糖醇、山梨醇、肌醇、甘露醇。（4）低聚糖类----蔗糖、麦芽糖、棉籽糖。（5）多聚糖类----淀粉、纤维素、人参多糖、黄芪多糖、海藻酸。（6）糖的衍生物类----葡萄糖—6—磷酸、果糖—1，6—二磷酸，磷酸肌醇，氨基葡萄糖。65生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例植物糖类药用成份举例植酸钙----是营养剂，具有促进生长发育的作用。肌醇----治疗肝硬化、血管硬化、降血脂。葡萄糖----大输液，补充营养。葡萄糖醛酸内酯----治疗肝炎、肝中毒、风湿性关节炎。葡萄糖酸钙----补钙剂。甘露醇----抗脑水肿、降颅压。山梨醇----抗脑水肿、降颅压。海藻酸----增加血容量，抗休克。人参多糖----增强免疫机能。66生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例5：植物脂类生物活性物质以及药理作用天然药物化学中的（1）醌类，（2）黄酮类，（3）萜类，（4）甾体类，（5）苯丙酸类，（6）鞣质，等等均属于植物脂类药物。（1）脂肪和脂肪酸类----亚油酸、亚麻酸、花生四烯酸等不饱和脂肪酸。（2）磷脂类----大豆磷脂（含卵磷脂）。（3）固醇类----β-谷甾醇，大豆固醇。（4）黄酮类----茶叶中提取茶多酚67生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例植物来源的药物的研究前景1：植物细胞培养技术

由于植物细胞体型大、接种量大、培养周期长、易污染杂菌等等缺陷，目前仍存在着较大的困难。尤其是没有理想的培养设备和装置。2：植物组织培养技术

通过组织培养生产植物药有效成份，有利于解决生药资源断缺的难题，如从红豆杉中提取紫杉醇，已经给红豆杉这一珍稀树种带来了灭顶之灾。3：天然植物来源药物分离纯化、功能结构测定68生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例微生物来源的药物1：细菌----抗生素、氨基酸、维生素、酶制剂2：真菌类

（1）冬虫夏草 （2）灵芝多糖

（3）藻类多糖 （4）香菇多糖69生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例海洋生物技术海洋生物技术是指以海洋生物为对象，综合应用基因工程、细胞操作技术和细胞培养技术等手段，提取海洋生物中的天然药物由于海洋药物中的天然活性成份含量低、分离提纯的生产成本较高。因此，人们研究了海洋微生物的培养和发酵技术，以期提高产量。近10年中，已经有5000种新的海洋天然药物被发现。70生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例海洋生物来源的药物海洋生物药物的种类和用途

海洋生物药物的研究前景

71生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例海洋生物药物的种类和用途1：海藻类------分为绿藻门、褐藻门、蓝藻门、红藻门等10个门类。目前已经生产出褐藻酸钠、烟酸甘露醇脂，用于抗肿瘤和治疗心血管疾病。2：腔肠动物类------从柳珊瑚中提取出前裂腺素A2、萜类药物用于抗菌。从海葵中已经分离出具有抗癌作用的Polytoxin。3：软体动物类-------软体动物有8万种，如螺类、蛤类、乌贼。从软体动物中分离出的物质有多糖、多肽、毒素、酶、凝聚素等等物质，具有抗病毒、抗菌、抗肿瘤、降血压、止血、平喘等作用。4：节肢动物类-------从虾、蟹壳中提取出甲壳素，可以用作丸片赋形剂、缓释药物载体、医用膜材料、此外，甲壳素还具有抗血栓的功能。72生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例5：棘皮动物类------有6000多种，包括海星、海胆、海参等。海胆的毒至少具有溶血作用，海胆中还含有二十碳五烯酸（EPA），用于防治冠心病。海参素具有抗癌作用。6：鱼类--------有20000多种，用于制造药物的有：鱼肝油、鱼软骨素、鱼细胞色素C、卵磷脂、脑磷脂。鱼类中的抗癌药物有：（1）鲨鱼抗问号蛋白、（2）河豚鱼肝油等。7：海洋爬行动物类------主要有蛇毒，蛇毒中含有蛋白酶、透明质酸酶、转氨酶、胆碱脂酶、RNA酶、DNA酶、磷脂酰胆碱酶等等，具有镇痛作用。8：海洋哺乳动物类-------海洋哺乳动物的脏器和腺体已经制成了多种药物，如鲸鱼肝脏抗贫血剂、海狗骨骼肌17肽具有扩张血管、降低血压等作用。9：其它海洋动物-------有海绵动物、环节动物、两栖动物等等。73生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例具有药用价值的海洋药物（1）鲨鱼抗癌蛋白-----抗Lewis肺癌（2）棘皮动物抗癌肽------抗白血病（3）软体动物抗癌肽（蛤素）------抑制非病毒性肿瘤（4）海扇抗癌糖蛋白-------抑制肉瘤P180结节性肿瘤（5）海兔卵抗癌肽------抑制P180淋巴白血病细胞（6）沙群海葵素-------抑制P388淋巴白血病细胞和K细胞、B细胞生长（7）降钙素-------降低血钙、血磷、抑制骨钙流失（8）海蛇毒素-------镇痛（9）海葵毒素-------强心作用74生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（10）海绵抗生肽------抗真菌、抗细菌（11）软体动物抗生肽-------抗病毒、抗细菌（12）抗炎肽-------风湿性关节炎（13）硫酸软骨素-------降血脂、抗动脉硬化、抗凝血、治疗冠心病（14）刺参酸性粘多糖-------广谱抗肿瘤、抗凝血（15）甲壳质------药用赋形剂（16）海参苷--------抗肿瘤、抗真菌、抗辐射（17）海星皂苷-------抗肿瘤、抗真菌、抗辐射（18）海绵毒素-------溶血活性75生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（19）肽类药物-------具有免疫、抗肿瘤、抗病毒作用（20）鲍鱼多糖-------具有抗肿瘤生长作用。（21）紫菜多糖-------具有抗肿瘤、防止心血管疾病的作用。（22）芋螺毒素-------是理想的不会成瘾的麻醉镇痛剂。（23）由海绵中分离出的多环胍生物碱--------具有抗病毒、抗癌、抗真菌作用。（24）膜海鞘素--------具有抗病毒、抗癌、免疫抑制作用。（25）从红海海绵中分离的AvaroneAvarol--------对艾滋病病毒有抑制作用。（26）从海洋细菌中分离出的大环内酯化合物------具有抗病毒、抗癌、抗菌作用。76生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例海洋生物药物的研究前景1：目前已经取得进展的相关领域2：海洋药物研究的主攻方向77生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：目前已经取得进展的相关领域（1）具有抗癌活性的海洋药物----目前进入临床的有：从群体海葵中取处的didemnin，从截尾海兔中提取的dolastatin10，从多室草苔虫中提取的bryostatin1，bryostatin4，从海洋细菌中提取的marinactan，从海绵中提取的manoalide。（2）具有抗菌活性的海洋药物----日本从海洋细菌中提取出广谱抗菌素----伊他霉素。（3）具有抗心血管疾病活性的海洋药物----从海洋药物中提取的喹啉酮类具有增强心肌收缩力、抗心率失常的作用。78生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（4）具有抗放射性活性的海洋药物----日本已经从海洋藻类中提取出SOD。（5）海洋前列腺素----从珊瑚中提取前列腺素。（6）从海洋生物中提取的保健品----这类产品有螺旋藻、蓝藻、二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）。（7）从海洋生物中提取的医用生物材料----鲎试剂、河豚毒素试剂、甲壳素、珊瑚骨科材料。79生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：海洋药物研究的主攻方向（1）海洋生物活性物质的研究（2）促进生物技术在海洋药物研究上的应用（3）开发海洋中成药制剂和新的剂型（4）开发海洋生物，生产营养保健品（5）从海洋生物中开发新的医用生物材料----如利用甲壳质生产创可贴、手术缝合线。利用海洋生物多糖类产品生产胶囊辅料。利用海洋藻类生产SOD。80生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例二：生化药物的制备技术（一）：原料的选择、预处理、保存（二）：提取（三）：分离纯化81生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（一）：原料的选择、预处理、保存1：原料选择2：原料预处理3：原料保存82生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：原料选择（1）有效成份含量高，

（2）原料丰富易得，

（3）杂质含量少，

（4）原料成本低。植物原料应注意采收的时期，以免有效成份积累不足。

动物原料要注意动物的年龄和性别。

微生物原料应注意其对数生长期。

83生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：原料预处理动物原料采集后应立即去除结缔组织、脂肪组织，并就地冷冻。植物原料采集后就地除去不用的部分。微生物材料采集后应将细菌细胞和培养液分开，并进行保鲜处理。84生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例3：原料保存方法（1）冷冻法----常用-40℃进行速冻。（2）有机溶剂脱水法----常用的有机溶剂是丙酮，因为它对于没有破坏作用，如用它来保存脑垂体。（3）防腐剂保鲜----如用乙醇、苯酚，该方法适用于液体原料，如发酵液、提取液。85生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（二）：生物药物的提取1：生物组织破碎2：有效成份的提取86生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：生物组织破碎（1）磨切法----组织捣碎机、胶体磨、匀浆器、匀质机、球磨机、乳钵。（2）压力法----加压破碎、减压破碎（3）反复冻融法----（4）超声波震荡破碎法（5）自溶法----（6）酶解法----87生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：有效成份的提取（1）提取试剂-------水、缓冲溶液、盐溶液、乙醇、氯仿、丙酮。（2）提取方法-------盐析、萃取、渗透、过滤。88生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（三）：生物药物的分离纯化方法1：蛋白质药物2：核酸类药物3：糖类药物4：脂类药物5：氨基酸药物89生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1：蛋白质药物的分离纯化方法（1）沉淀法（2）按分子大小分离（3）按分子所带电荷进行分离（4）层析法分离90生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（1）沉淀法盐析法有机溶剂沉淀法等电点沉淀法与靶物质特异性结合沉淀法91生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（2）按分子大小分离超滤法透析法凝胶层析法超速离心法92生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（3）按分子所带电荷进行分离离子交换术层析法电泳法等电点聚焦法93生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（4）层析法亲和层析法----与靶物质特异性结合，再进行层析的方法。疏水层析法----用于分离非极性药物。

94生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2：核酸类药物的分离纯化方法（1）提取法生产方法----先得取核酸与蛋白质的复合物，再解离核酸与蛋白质，然后分离RNA与DNA。95生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例3：糖类药物的分离纯化方法（1）提取方法（2）分离方法96生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（1）提取方法非降解法----主要用于提取动物组织中的粘多糖，提取所采用的溶剂是水、盐溶液。降解法----主要用于提取结合牢固的粘多糖，如从软骨中提取硫酸软骨素就是采用碱降解法，提取与蛋白质结合的多糖则常常采用酶解法。97生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（2）分离方法沉淀法----乙醇沉淀是最常用的方法，4-5倍量的乙醇能使任何组织中的粘多糖完全沉淀。离子交换层析法----采用阴离子交换剂，如Dowex-I-X2离子交换树脂、DEAE-离子交换纤维素等。洗脱液用氯化钠溶液进行梯度洗脱。98生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例4：脂类药物的分离纯化方法提取方法----常用的溶剂有氯仿、甲醇。纯化方法（1）沉淀法，利用脂质在丙酮中溶解度不同而将其沉淀。（2）吸附层析法，常用的吸附剂有硅胶、氧化铝。洗脱常常采用逐渐增大极性的洗脱液来进行洗脱，非极性的脂肪先流出，极性的脂肪后流出。（3）离子交换层析法，如TEAE-纤维素对于分离脂肪酸和胆汁酸特别有效。99生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例5：氨基酸药物的分离纯化方法（1）氨基酸的生产方法（2）氨基酸的分离方法100生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（1）氨基酸的生产方法蛋白质水解法----有酸水解、碱水解、酶水解三种方法，其中以盐酸水解最为常用。盐酸水解的优点是水解迅速、完全、产物全部是L-型氨基酸、盐酸水解的缺点是色氨酸全部被破坏、丝氨酸部份被破坏。碱水解易产生消旋作用，故较少使用。酶水解常常不够完全彻底。101生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（2）氨基酸的分离方法沉淀法----依据不同氨基酸的溶解度差异进行沉淀分离。吸附法----利用活性炭对其进行吸附。离子交换法----常用离子交换剂为强酸性阳离子交换树脂，洗脱方法主要采用PH梯度洗脱。102生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例生物化学制药实例一：人体来源的生物药物

二：动物来源的生物药物三：植物来源的生物药物

四：海洋生物来源的生物药物103生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例一、人体来源药物的制备实例（一）人血白蛋白（Alb）制剂的制备（二）尿激酶（URK）的制备（三）绒毛膜促性腺激素（HCG）的制备（四）白细胞介素-2（IL-2）的制备104生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（一）人血白蛋白（Alb）制剂的制备白蛋白又称清蛋白，约占血浆总蛋白的65%。同种白蛋白制品无抗原性。白蛋白为单链分子，由548个氨基酸组成。白蛋白的制备方法有二种：

（1）从健康人体的血浆中分离制取

（2）从健康产妇的胎盘中分离制取白蛋白的制备工艺分为6步（1）络合 （2）解离 （3）浓缩（4）热处理 （5）除菌 （6）干燥。105生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺人血浆在搅拌下用NaHCO3调节PH=6.8，加入等体积的2%利凡诺溶液。

↓

充分搅拌后，静置2-4小时，分离出上清液+络合物沉淀。

↓

在络合物沉淀中加入灭菌蒸馏水，用0.5mol/L的HCl调节PH值至弱酸性，加入NaCl量为0.15%--0.2%，充分搅拌。

↓

65℃恒温加热1小时，离心除去杂蛋白，分离出上清液。

↓

上清液进行超滤浓缩。

↓

60℃恒温热处理10小时，灭活病毒。

↓

除菌过滤

↓

白蛋白溶液，进行冷冻干燥

↓

白蛋白产品106生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2、人血白蛋白产品的检验方法（1）外观为白色疏松物体。

（2）白蛋白的含量>95%以上。

（3）水分<1%

（4）水溶后PH=6.6--7.2

（5）硫酸铵残留量<0.01%

（6）细菌学检验合格

（7）热原检测合格

107生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（二）尿激酶（URK）的制备尿激酶有多种分子形式，主要有分子量为31.3KD、54.7KD二种。属丝氨酸蛋白酶。底物：血纤溶酶原，作用其Arg-Val键，使纤溶酶原转为纤溶酶。尿激酶用于治疗各种血栓和血栓性梗塞。108生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺尿激酶的生产工艺分为10步：（1）沉淀 （2）酸化（3）吸附 （4）洗涤（5）洗脱 （6）除去热原和色素（7）浓缩 （8）洗脱（9）透析 （10）冻干109生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例⑵工艺路线110生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例工艺流程框图所收集到的男性应该在8小时之间进行处理收集流出的活性部分，用1mol/L的Hac调节PH=4.2，用蒸馏水调节电导率至16--17M/欧姆。装入羧甲基纤维素柱（CM-C），用10倍体积的、PH=4.2的Hac-NaAc缓冲液洗涤柱床，促进吸附。酸化以后的尿加入1%的硅藻土，在5℃下搅拌1小时。在温度10℃以下操作，尿液的原始PH=8.5透析液进行冷冻干燥，得尿激酶产品。上述收集液用饱和的NaH2PO4调节PH=8.0，加入NaCl，调节电导率为22M/欧姆。通过DEAE-Sephadex-A-50层析柱，除去热原和色素。用0.1%氨水+0.1mol/L的NaCl（PH=11.5-11.8）的洗脱液进行洗脱。用0.02%氨水+0.1mol/L的NaCl的洗脱液进行洗脱，当流出的洗脱液从澄清开始变混浊时，加以收集。将硅藻土的吸附物用5℃的冷水洗涤，装入层析柱。用盐酸调节尿液的PH=6.5以下，电导率为20—30M/欧姆，细菌数量在1000个/毫升以下收集洗脱液中的活性成份（杂质被吸附在层析柱中），在4℃的蒸馏水中进行透析。111生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2、尿激酶产品的质量标准（1）外观为白色冻干粉末。（2）酶活力≥15000IU/mg蛋白质。112生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（三）绒毛膜促性腺激素（HCG）的制备绒毛膜促性腺激素是一种糖蛋白，由α、β两个亚基组成。绒毛膜促性腺激素由胎盘滋养层合体细胞分泌，妇女妊娠45—70天，尿中HCG的含量达30000-50000IU/24小时。绒毛膜促性腺激素主要用于治疗女性不育症、由于黄体功能不全引起的子宫出血、习惯性流产。113生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺绒毛膜促性腺激素的生产工艺包括12步：（1）粗制 （2）提取（3）透析 （4）吸附（5）洗涤 （6）洗脱（7）干燥 （8）精制溶解（9）精制透析 （10）精制吸附（11）精制解吸 （12）精制干燥114生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例孕妇尿，用HCl调节PH=4-5，加入苯甲酸-乙醇饱和液（孕妇尿：苯甲酸乙醇饱和液：乙醇=1：0.075：5），搅拌1小时，静置2-3小时。上清液1+上清液2合并，在5℃以下，用蒸馏水进行透析。取透析内液进行离子交换层析。先将CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸盐缓冲液进行平衡，将样品加到层析柱上。HCG粗品中加入10倍量的4℃、0.067mol/L、PH=4.8的醋酸盐缓冲液，搅拌提取4小时，离心，取上清液1。离心后的沉淀物再用10倍量的4℃、0.067mol/L、PH=4.8的醋酸盐缓冲液提取，取上清液2。过滤，弃滤液，得沉淀吸附物。搅拌下加入95%乙醇，直到苯甲酸全部溶解为止，即有絮状沉淀物产生。静置过夜，离心，沉淀物用95%的乙醇和丙酮洗涤，干燥，得HCG粗品。先用0.01mol/L、PH=4.8的醋酸盐缓冲液洗出洗脱峰-1再用0.01mol/L、PH=5.9的磷酸盐缓冲液冲出洗脱峰-2再用0.2mol/L、PH=8.5的醋酸盐缓冲液冲出洗脱峰-3从洗脱峰-3上得到的就是HCG。-30℃以下冷冻干燥，得HCG精品HCG精品在10℃以下的蒸馏水中溶解，溶解液用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液进行透析。透析内液进行羟基磷灰石柱层析。步骤：（1）安装羟基磷灰石柱层析柱。

（2）用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液平衡。

（3）样品上柱先用0.5mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液洗脱，得峰-1再用1.0mol/L、PH=6.8的磷酸盐缓冲液洗脱，得峰-2从洗脱峰-2上得到的就是HCG纯品。-30℃以下冷冻干燥，得HCG产品。115生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（四）白细胞介素-2（IL-2）的制备白细胞介素-2是由活化的淋巴细胞所产生的，含有133个氨基酸的糖蛋白。116生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺白细胞介素-2的生产工艺分为10步：（1）诱生 （2）病毒灭活（3）硫酸铵分级 （4）硫酸铵沉淀（5）除盐 （6）亲和层析（7）洗涤 （8）解吸（9）凝胶层析 （10）洗脱117生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例工艺流程图示取上清液，加入饱和硫酸铵溶液至0.35饱和度，4℃静置24小时，离心，弃去沉淀。用鸡瘟病毒和丝裂原培养液联合刺激人外周血白细胞，37℃，CO2培养箱培养，形成诱生白细胞培养液。得到白细胞介素-2（IL-2）组分透析内液装入Sepharose-4B层析柱，用200ml、PH=6.5的平衡柱缓冲液洗去不吸附的蛋白质。用含有0.4mol/L的NaCl的、PH=6.5的磷酸钠缓冲液（PBS）洗涤亲和柱。用含有1.0mol/L的NaCl的、PH=6.5的磷酸钠缓冲液（PBS）进行解析。将沉淀物溶解于10mol/L、PH=6.5的磷酸钠缓冲液（PBS），缓冲液含2%（g/ml）的正丁醇+0.15mol/L的NaCl。然后装入透析袋中，用10mol/L、PH=6.5的磷酸钠缓冲液透析24小时，期间更换5次透析外液取上清液，补充加入饱和硫酸铵溶液至0.85饱和度4℃静置24小时，离心，收集沉淀。进行病毒灭活和固-液分离：

（1）用6mol/L的HCl溶液调节PH=2.0-2.5。

（2）用6mol/L的NaOH溶液调节PH=7.2-7.4。

（3）离心除去变性沉淀的杂蛋白。对组分进行超滤浓缩，装入到UltrogelACA44层析柱进行凝胶层析，要求PH=7.6。用0.2mol/L的Tris-HCl+0.5mol/L的甘氨酸+0.1%的聚乙二醇（PEG、Mr=6000）+2%的正丁醇所构成的洗脱剂进行洗脱。得白细胞介素-2（IL-2）纯品。118生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例二、动物来源药物的制备实例（一）胰岛素的制备（二）超氧化物歧化酶（SOD）的制备（三）核糖核酸（RNA）的制备（四）透明质酸的制备（五）肝素的制备（六）冠心舒的制备（七）硫酸软骨素的制备119生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（一）胰岛素的制备胰岛素由二条链组成，A链21个氨基酸、B链30个氨基酸。胰岛素是所有蛋白质中研究得最清楚的一个蛋白。120生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺胰岛素的生产工艺分为10步：（1）提取 （2）碱化（3）酸化 （4）浓缩（5）去脂 （6）盐析（7）除去酸性蛋白 （8）锌沉淀（9）结晶除去碱性蛋白 （10）洗涤（11）干燥121生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例工艺流程图示取上清液进行锌沉淀上清液用氨水调节PH=6.2-6.4加入3.6%的醋酸锌溶液，加入量为溶液量的20%再用氨水调节PH=6.04℃下，放置过夜收集沉淀，用冷丙酮洗涤洗涤后的沉淀物进行干燥，得胰岛素粗品。盐析物除酸性蛋白操作盐析物加入7倍量的蒸馏水进行溶解再加入3倍量的冷丙酮，用氨水调节PH=4.2-4.3补加丙酮。使得丙酮：水=3：7搅拌后过夜，离心，除去酸性蛋白质沉淀浓缩液迅速升温，然后迅速降温，除去脂肪。去脂液用NaCl溶液进行盐析，盐析外液PH控制在PH=2.0-2.5之间。提取液用PH=8.0-8.4的氨水碱化4小时，除去沉淀。碱化液用PH=3.6-3.8的硫酸，在5℃时酸化4小时，除去沉淀。酸化液，在30℃下进行减压浓缩至比重为1.04-1.06。猪胰脏绞成碎末，加入2.3-2.6倍的86%-88%的乙醇+5%的草酸，10℃-15℃之间提取3小时。胰岛素粗品除碱性蛋白质，每克粗品加入2%的柠檬酸溶液50ml+6.5%的醋酸锌溶液2ml+丙酮16ml然后再用冰水稀释至100ml，使样品充分溶解。冷却至5℃以下，用氨水调节PH=8.0，过滤，除去碱性蛋白质沉淀。滤液进行结晶操作滤液用10%的柠檬酸溶液调节PH=6.0补加丙酮，使得溶液中的丙酮含量达到16%慢速搅拌3-5小时，使结晶析出再在5℃左右放置3—4天，使结晶完全析出收集结晶，用丙酮、乙醚反复脱水，真空干燥，得结晶胰岛素纯品。122生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（二）超氧化物歧化酶（SOD）的制备超氧化物歧化酶存在于动物、植物、微生物之中，有Gu-Zn-SOD，Mn-SOD，Fe-SOD等等类别，目前，美国、德国、澳大利亚等国都有产品生产。超氧化物歧化酶在抗衰老、抗辐射、消炎方面具有显著的疗效，主要用于炎症、类风湿性关节炎、慢性多发性关节炎、放射治疗之后的炎症。123生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺超氧化物歧化酶的生产工艺分为12步：（1）收集 （2）浮洗（3）溶血 （4）去血红蛋白（5）沉淀 （6）热处理（7）沉淀 （8）透析（9）层析 （10）超滤（11）浓缩 （12）干燥124生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例工艺流程图示超滤浓缩，冷冻干燥，得超氧化物歧化酶（SOD）纯品透析液进行层析操作（1）采用DEAE-Sephadex-A50层析柱，（2）层析柱先用2.5mmol/L、PH=7.6的磷酸缓冲液进行平衡，（3）样品上柱，用缓冲液进行吸附，（4）用2.5-5.0mmol/L、PH=7.6的磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱，（5）收集SOD的活力洗脱峰。上清液放入透析袋中，在0℃的条件下透析6-8小时。沉淀物加入适量的去离子水进行溶解，然后离心，除去水不溶性蛋白，收集上清液在0℃的条件下，澄清液中加入适量丙酮，使其产生大量絮状沉淀，离心除去上清液，收集沉淀物。上清液于55℃-65℃热处理10-15分钟，然后离心，除去热变性蛋白，收集黄绿色澄清液。沉淀物加入适量的去离子水进行溶解，然后离心，除去水不溶性蛋白，收集上清液。在0℃的条件下，上清液中加入1.2-1.5倍体积的丙酮，产生絮状沉淀，离心除去上清液，收集沉淀物。加入0.25倍体积的95%乙醇+0.15倍体积的氯仿，搅拌15分钟，离心除去血红蛋白沉淀，收集上清液。洁净的红细胞在5℃左右，加入去离子水，搅拌30分钟。进行溶血。新鲜猪血离心去除血浆红细胞用0.9%的NaCl溶液清洗3次125生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例2、超氧化物歧化酶（SOD）电泳鉴定方法0.5%琼脂糖凝胶平板电泳法（或者采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法）：（1）缓冲液为PH=8.4的Tris-Gly，

（2）电压梯度22V/cm、

（3）电流3MA/cm、

（4）电泳时间35分钟、

（5）染色液用0.5%氨基黑10B、

（6）7%的Hac进行褪色处理。126生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（三）核糖核酸（RNA）的制备采用动物的肝脏生产RNA，具有其它生物来源的RNA所不具备的药物功能，缺点是肝脏组织中成份复杂，因此RNA的提纯难度相当大。127生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例1、工艺用动物的肝脏生产RNA分为10步：（1）匀浆制备 （2）提取（3）除去杂蛋白 （4）沉淀（5）除去糖原 （6）精制（7）洗涤 （8）溶解（9）分装 （10）冻干128生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例在0℃的条件下，搅拌加入等体积的0.2mol/L的醋酸钠溶液，再加入1/4体积的1%的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）。0℃的条件下放置30分钟，离心得沉淀物。沉淀物除糖原操作（1）沉淀物溶解在含0.001mol/L的EDTA+0.01mol/L的醋酸钠溶液中，加入等体积的2.5mol/L的K2HPO4，（2）不断搅拌下再加入等体积的乙二醇甲醚，（3）在0℃的条件下，放置30分钟，离心，得上清液。离心清液除蛋白质操作（1）离心清液中加入等量氯仿，反复振荡2—3次，直到中间界面无明显蛋白质层为止。

（2）向清液中加入1/10体积的20%的醋酸钾、再加入2倍体积的-20℃的乙醇，（3）在0℃的条件下，放置1小时，离心，得白色沉淀物。离心清液进行提取---离心清液中，加入等体积的0.2mol/L的三乙醇胺，1%的十二烷基磺酸钠（SDS）0.002mol/L的乙二胺四乙酸二钠（EDTA、PH=9.0），搅拌均匀。再加入等体积的90%的苯酚（苯酚中含0.2%的8-羟基喹啉）、再加入等体积的氯仿，室温振荡30分钟，3500r/min离心20分钟，除去沉淀物。健康的猪、牛肝脏用生理盐水洗干净，切成小块，加入1-2倍量的0.1mol/L的NaCl-0.05mol/L的柠檬酸溶液，再加入0.001%聚乙烯硫酸脂（PVS）和0.1%的、PH=7.0的Triton溶液。用组织捣碎机捣成匀浆，3500r/min，然后离心20分钟，除去沉淀物。沉淀物进行反复洗涤操作（1）沉淀物用0.1mol/L的醋酸钠溶液（内含0.001mol/L的EDTA）洗涤。（2）再用70%的乙醇溶液洗涤（3）重复3-5次洗涤，直到没有泡沫。沉淀物进行过滤式除菌操作---沉淀物用（0.001mol/L的EDTA+0.14mol/L的醋酸钠溶液）溶解，

过滤式除菌操作。得无菌RNA溶液。灌装，冻干，得无菌RNA纯品。129生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例（四）、透明质酸（HA）的制备130生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例以雄鸡冠为原料HA的生产工艺工艺路线131生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例工艺过程1．提取冻鸡冠解冻后，用绞肉机绞碎，加适量水用胶体磨磨成糊状，按每1kg鸡冠加水8L，加氯化钠80g，搅拌加热至90℃，保温10min，冷却至50℃，用1mol/L氢氧化钠液调pH8.5~9.0,加入适量胰酶,45~50℃保温酶解5~7h，酶解过程中维持pH8.5~9.0。2．过滤将酶解提取液用滤布加硅藻土加压过滤，得澄清滤液。3.乙醇沉淀和粗品干燥取滤液,调pH6.0~6.5,将滤液加到3倍体积的95%乙醇中,反复倾倒3次,待纤维状沉淀充分上浮后,取出沉淀,用适量乙醇脱水3~5次,放入有五氧化二磷的真空干燥器内干燥,得透明质酸中间品。4．氯仿处理将透明质酸中间品溶于0.1mol/L氯化钠溶液中,溶解浓度为0.3%,溶解过程中加少量氯仿防腐。溶解后，调pH4.5~5.0,加入等体积的氯仿搅拌处理2次,静置分出水相。132生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例5．酶解将水相用稀氢氧化钠溶液调pH7.5,加入适量链霉蛋白酶,37℃酶解24h。6．络合沉淀酶解结束后，向酶解液中加入同体积的1%氯化十六烷基吡啶（CPC）溶液，静置，收集HA-CPC络合沉淀。7．解离将HA-CPC络合沉淀加入0.4mol/L氯化钠溶液中,搅拌解离5~10h。8．过滤解离液先用硅藻土过滤至清,再用0.2μm微孔滤膜精滤。9．纯沉淀、真空干燥将滤液加至3倍体积的95%乙醇中，反复倾倒3次，取出纤维状HA沉淀，脱水，五氧化二磷真空干燥，得HA精品。133生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例工艺说明与讨论1．对原料的预处理，鸡冠应洗净后冷冻储藏。也可用丙酮脱水处理或储存，这样可除去大部分脂肪等杂质，以利于后面的分离纯化，但成本加大。2．鸡冠绞碎后用胶体磨处理时，注意不要磨得太细，以减少机械剪切力对透明质酸的降解。磨成糊状后，可先用水提取，过滤除去鸡冠残渣得提取液，然后进行酶解除蛋白质；也可将水提取和蛋白酶水解同时进行。后者的提取效率高，几乎达到完全提取，但提取液中的杂质含量也较高。提取时，可在水中加入1%的氯化钠。加热至90℃可对原料有一定灭菌作用，并使蛋白质热变性，易被蛋白酶水解。所用的蛋白水解酶为胰酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶等，不可用胃蛋白酶，因胃蛋白酶的最适pH值太低，易导致透明质酸的酸水解。公鸡冠中的透明质酸以与蛋白质结合状态存在，酶解的另一重要作用是切断透明质酸与蛋白质分子的结合。提取和酶解时，应注意防腐。3.透明质酸的提取液粘度较大，过滤速度较慢，可采用先粗滤后精滤，并加纸浆、硅藻土或活性炭助滤。134生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例4．醇沉淀是分离提纯透明质酸、肝素、硫酸软骨素等粘多糖最常用的方法之一，在制备过程中，可多次重复使用，类似于重结晶的作用，每次醇沉淀操作，都使透明质酸的纯度有所提高。不同最终浓度的乙醇沉淀操作还可对不同Ｍr的透明质酸进行分级分离，在较低乙醇浓度下，低Ｍr的透明质酸不易被沉淀出来，Ｍr越高，越容易被沉淀。在从水溶液中用甲醇或乙醇沉淀透明质酸或其它粘多糖时，必须有盐的存在，一般为1%左右的氯化钠。沉淀形态有纤维状和无定型粉末状两种形态,纤维状透明质酸容易制备,形态疏松,易于脱水和真空干燥,缺点是使用时，溶解速度慢，若在常温下溶解成1%的水溶液，需要3~7d。制备无定型粉末状沉淀，需控制料液的盐浓度、料液和乙醇的混合速度及搅拌速度等诸多因素，工艺较复杂，但粉末状透明质酸溶解速度快，使用方便。5．第一次乙醇沉淀、脱水、真空干燥所得透明质酸产品，可作为化妆品用保湿剂。135生物化学制药概述生化药物制备技术生化药物制备实例6．上述产品透明质酸进行进一步精制时，可以使用干燥的产品，也可使用乙醇沉淀后未干燥的产品，这样可以缩短生产周期。7．氯仿可使蛋白变性沉淀，利用此作用可除去一部分蛋白质杂质。氯仿处理的另一个重要的作用，是除去致炎物质。如细菌内毒素是一种脂多糖（lipopolysaccharide），其分子兼具脂溶性和水溶性，在进行氯仿处理时，聚集在氯仿和水的界面，利用这一性质可除去细菌内毒素。