结核病实验室质量保证手册课件

中国结核病防治规划

痰涂片镜检实验室质量保证点此跳到实验室生物安全

目录

前言术语注释第一章绪论第一节目的和任务第二节实验室网络及职能第二章痰涂片检查第一节痰涂片检查的意义第二节分枝杆菌的形态和结构第三节检查对象第四节痰标本的采集、保存和运输第五节涂片抗酸染色检查方法第六节涂片抗酸染色检查材料管理目录第三章痰涂片实验室质量保证第一节室内质量控制第二节室间质量评估术语注释质量保证（QualityAssuranceQA）是能持续提高实验室服务效率和可信度的体系，包括室内质量控制、室间质量评估和质量提高。质量控制（QualityControlQC）也称室内质量控制。包括结核病痰涂片制作、镜检及实验室质量控制的所有方法，如仪器和染色液的检查等。室间质量评估（ExternalQualityassessmentEQA）是根据与其它网络实验室（中间级实验室和中心实验室）比较批量测试和盲法复检结果，评价基层实验室能力的过程。EQA包括实验室现场评价、操作质量评估和现场对涂片的复读。EQA是国际肺病和防痨联合会（IUATLD）描述的熟练度检测的扩大。质量提高（QualityImprovementQI）是通过分析痰涂片镜检诊断服务的各个组成部分，寻找能永久性清除障碍的成功过程。资料收集、分析、创意思路都是这一过程的重要部分。它涵盖了连续监测、明确缺陷及后续改正措施，如必要时重新培训以杜绝问题再次发生。QI常依赖于有效的现场评估。术语注释现场评价(On-siteevaluation)国家或地区结核病规划下的地区督导员，常规对下级实验室的督导检查和高水平实验室督导员的年度督导检查。批量测试（PanelTesting）把已染色和/或未染色涂片从中心或国家参比实验室送到外围或中间级实验室，以检查读片和报告的过程。批量测试和世界卫生组织定义的熟练度检测是等同的。盲法复检（Blinded-Rechecking）把涂片从某个实验室送到另一个实验室（外围、中间级或中心实验室）再次读片。指南推荐采用盲法复检，确保控制方事先不知道外围实验室的检查结果。其它文件中，这也被称做复读。涂片阳性率（SlidepositiverateSPR）在一定时间内一个实验室所有受检涂片（诊断或监测涂片）中阳性涂片的比例。术语注释高假阳性（HighFalsePositiveHFP）：阴性片被错误地判读为2＋～4＋阳性。高假阴性（HighFalseNegativeHFN）：2＋～4＋阳性涂片被错误地判读为阴性。量化误差（QuantificationErrorQE）：同一张阳性涂片受检方和控制方阳性判断级别的差异。低假阳性（LowFalsePositiveLFP）：阴性涂片被错误地判断为低阳性（1＋以下）。低假阴性（LowFalseNegativeLFN）：低阳性（1＋以下）涂片被错误地判断为阴性。第一章绪论为了进一步加强结核病控制工作，实现全国结核病防治规划目标，加强直接面视下短程化疗的技术策略和结核病细菌学实验室质量控制，提高肺结核病人的发现率。通过实验室细菌学诊断传染性肺结核是实施DOTS策略的一个关键，而且对结核病控制项目的成功起着重要的影响作用。第一章绪论因此，在执行国家结核病防治规划中必须具备有效的结核病实验室网络，一个可信的实验室必须符合成本-效益原则，并能提供准确的实验结果，为此只有通过质量保证(QualityAssurance，QA)才能实现。结核病实验室检查质量保证的一个重要组成部分就是室间质量评估(ExternalQualityAssurance，EQA)，即由上一级参比实验室经过一系列的规范性活动来监督，不断完善实验室的质量保证程序，其质量保证有赖于国家结核病控制规划对各级实验室检查工作的支持、培训和监督，并逐步完善与国际接轨的质量保证管理系统。第一节目的和任务

在结核病控制工作中痰结核菌检查对于发现传染源、确定诊断和化疗方案、考核疗效、评价防治效果具有重要意义。结核病细菌学检查是国家结核病控制规划(NTP)的重要组成部分，在现代结核病控制工作中起着不可缺少的重要作用。第二节实验室网络及职能实验室质量保证依赖于完善的实验室网络（见图1）及职能。在国家参比实验室的管理和监督之下，以省级参比室为中心实验室，采用自上而下质量保证体系与同级实验室室间质控相结合的方式，建立我国实验室质量控制网络。网络中的各级实验室应有效地发挥各自的职能。我国参比实验室网络

SNRL：跨国参比实验室NRL：国家参比实验室PRL：省级参比实验室PLL：地市级参比实验室CLL：县级参比实验室SNRLNRLPRLPLLCLL第二节实验室网络及职能国家参比室省级参比室地（市）实验室

地（市）实验室县（市）实验室

县（市）实验室县（市）实验室县（市）实验室第二节实验室网络及职能

国家参比实验室制定我国各级结核病实验室痰涂片质量保证指南与实施细则。收集、整理、统计、分析国家室间质量控制的数据。组织培训国家级质控督导员。计划、实施对下级实验室的定期督导检查。指导、协调、评估各省（直辖市、自治区）参比实验室室间质量评估工作。开展我国结核病实验室室间质量评估方法的实施性研究。

第二节实验室网络及职能

省级参比室

根据国家参比室和省结核病控制规划的需要，制定本省痰涂片室间质量评估实施计划。收集、整理、统计、分析省内室间质量评估信息、数据，按要求定期上报国家参比实验室。省级参比实验室负责省内质量保证的技术支持与培训；组织、协调、评估本省各市、县实验室室间质量评估工作。负责地（市）级和部分县级结核病实验室的现场评价(on-siteevaluation)、批量测试（PanelTesting）、随机抽样和委托第一复检者盲法复检。承担地（市）级结核病实验室盲法复检的第二复检者复检工作。指导、监督地（市）级实验室实施县级实验室室间质量评估工作。第二节实验室网络及职能

地（市）级结核病实验室

根据国家参比室和省参比室的要求，制定本地区痰涂片室间质量评估实施计划。收集、整理、统计、分析本地区内室间质量评估信息数据，定期上报省参比实验室。负责辖区内结核病实验室质量保证的技术支持与培训；组织、协调、评估各县实验室的室间质量评估工作。做好本实验室痰涂片镜检和室内质控工作，接受省参比室定期室间质量评估督导。承担同级间实验室（地、市）第一复检者盲法复检工作。负责实施县级结核病实验室的现场评价、批量测试、盲法复检和第二复检者的复检工作。第二节实验室网络及职能

县级结核病实验室

做好本实验室痰涂片镜检和室内质控工作，接受上一级参比室定期室间质量评估督导。承担同级间实验室（县级）第一复检者盲法复检工作。第三章痰涂片实验室质量保证

按照世界卫生组织(WorldHealthOrganization)和国家结核病防治规划(Nationaltuberculosisprogramme)的要求，在我国已全面推行DOTS策略或DOTS策略得到良好贯彻执行的地区，为了持续提高结核病实验室痰涂片检查的工作效率和可靠性，必须建立我国结核病实验室质量保证系统网络。在实验室内部质量控制的基础上，应用实验室间质量检查和评估的方法，进行实验室检查系统的评价，并通过采取一系列措施改进和不断提高实验室业务总体水平。第一节室内质量控制

室内质量控制(QualityControl，QC)指实验室内部的操作规程、设备和耗材、痰标本收集、染色剂制备、涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜检、结果登记和报告、以及痰片保存等整个过程的内部检查和监测。第一节室内质量控制

一、痰标本收集（一）容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径4厘米，高度2厘米）。痰容器应标明病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序号1、2、3（1＝当日即时痰，2＝夜间痰，3＝次日晨痰）。（二）痰标本性质：干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。（三）初诊病人应收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰和次日晨痰），治疗中或复诊随访病人按期每次收集2份痰标本（当日即时痰、当日或次日晨痰）。（四）对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。第一节室内质量控制

二、抗酸染色液制备（一）有染色液制备配方和配制纪录。（二）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓度和制备时间。（三）染色液置于棕色瓶内存放，避光保存。第一节室内质量控制

三、载玻片（一）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查无划痕后方可使用。（二）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。（三）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重复使用。（四）载玻片正面左侧1/3处标注实验室序号(如使用的载玻片一端无磨砂面，必须使用玻璃刻刀注明编号；如使用的载玻片一端有磨砂面，可使用2B铅笔在磨砂面上直接书写)。（五）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积为10×20mm的卵圆形痰膜。第一节室内质量控制

四、染色（一）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀亮蓝色，无红色斑块。（二）将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚。（三）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积的10%。第一节室内质量控制

五、镜检要求（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触涂片上的痰膜。（二）仔细观察300视野。（三）每个工作日，一名镜检人员的涂片阅读量不应超过25张。（四）连续阅读10～12张涂片后，应休息20分钟左右。（五）采用自查和互查方式，至少抽查复检当日10%涂片，并填写室内质控登记表（表2）。表2室内质量控制每日涂片抽查复检登记表

单位名称：

200

年1月日期镜检涂片数初检者签名抽查复检涂片数痰涂片符合数复检者签名合计阴性阳性合计第一节室内质量控制

六、登记报告（一）登记前应对检验单、标本盒、涂片上的标注进行反复核对。（二）检查后的每一张涂片结果，应按规定准确记录在“结核病细菌学实验室登记本”上。（三）镜检结果报告应及时发出，以便尽早为临床提供诊断依据。第一节室内质量控制

七、痰涂片保存（一）镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯（分析纯）的擦镜纸揭取数次，彻底祛除涂片上的镜油。（二）涂片脱去镜油后，必须再次核对实验室登记本与每张涂片实验序号。（三）涂片上严禁标记镜检的阴、阳性结果。（四）全部涂片按实验室登记本序号连续排列，存放于玻片盒内。第一节室内质量控制

七、痰涂片保存（五）涂片保存与实验室登记本记录应保持一致。初诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出两个空位置，以备第二张、第三张涂片检查后放入；随访病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出1个空位置，以备第二张涂片检查后放入。（六）按规定数量保存的用于室间质量评估的涂片，未经上级质控单位准许不能自行销毁。（七）装满涂片的玻片盒，需用标签注明涂片实验序号区间和日期区间，以便日后盲法复检或现场评价时抽样。第二节室间质量评估室间质量评估是根据与其它网络实验室（中间级实验室和中心实验室）比较批量测试和盲法复检结果评价基层实验室能力的过程。EQA包括实验室现场评估以评价操作质量并且也包括现场对涂片的复读。EQA是国际肺病和防痨联合会描述的熟练度检测的扩大。第二节室间质量评估

一、现场评价（一）要求：现场评价之前应首先建立下级实验室技术档案，由被督导实验室填写结核病实验室基本情况登记表(见附件3)，每次现场评价时需重新核实登记内容。附件1结核病实验室基本情况登记表单位名称：

实验室名称：

主任姓名：

电话：

手机：

单位地址：

邮编：

传真：

E-mail：

1.结核病实验室技术人员登记姓名性别年龄学历专业职称工作年限专、兼职备注2.上一年实验室工作量统计：涂片总张数阴性涂片数阳性涂片数涂片阳性率

第二节室间质量评估

一、现场评价

（一）要求：2、国家参比室每年对省级参比室至少进行1次现场评价，同时每省至少抽查一个市及县级结核病实验室。3、省级参比室每年对所辖地（市）级实验室至少进行1次现场评价，同时每地（市）抽查1～2个县级实验室；必要时，对批量测试或盲法复检存在问题的市、县实验室，适当增加现场评价频率。4、市（地）级实验室每年对所辖县（区）实验室每年至少进行2次现场评价。一、现场评价

（一）要求：5、对批量测试或盲法复检存在问题的县级实验室必须尽快查找原因，提高涂片镜检质量。6、现场督导员应由经验丰富的实验室技术人员担任，必须经高一级实验室有资格督导员培训后方可上岗。7、现场评价要按本操作细则所列项目顺序进行，评价结果可结合当地结核病控制工作考核评比给分。一、现场评价

（一）要求：8、现场督导员的主要责任是通过现场评价发现问题，提出正确的建议解决问题，提高痰涂片镜检质量。9、上级实验室对下级进行督导的时候，应当核对调查表和被评估实验室实际情况，为此各级调查表应当保存五年以上。

（二）检查步骤：现场评价操作步骤

1.试剂

检查的问题

指标

试剂名称试剂名称试剂名称现有的染色剂是否都可以使用？最近3个月是否试剂短缺？使用的试剂是否在有效期内？石碳酸复红是否是否亚甲蓝是否是否5%乙醇酸是否是否镜油是否是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：（二）检查步骤：现场评价操作步骤

2.供应指标原料可用性质量是否优良充分供应下列原料是否可以得到？痰盒规格是否标准？是否供涂片存放用的涂片盒符合规格标准？是否数量足够？近3个月是否供应短缺？有否有蒸馏水？水是否保存在无菌瓶子里？

玻片是否

是否储片盒是否是否是否标准痰盒是否

是否玻片记号笔是否是否是否竹（木）签是否是否是否漏斗是否是否

滤纸是否

是否染色架是否是否是否灯或燃器是否是否

灯用燃料是否

是否擦镜纸是否

是否红笔是否

供水是否是否是否天平是否是否

（二）检查步骤：现场评价操作步骤

3、实验室安全检查的问题

指标结果痰涂片检查在哪里进行？

在一个与其他实验室隔开的地方进行有保证涂片和镜检独立操作的桌子是否实验室是否通风？如果在打开的窗前涂片，技术员是否知道气流方向和潜在的危险？是否用哪种消毒剂？有充分的安全通风系统是否近3个月有消毒剂短缺吗？使用针对TB的消毒剂是否实验室多长时间消毒一次？消毒剂供应充足是否用过的玻片怎样处理？是否可重复使用？工作的地方应当每天清洁消毒是否用过的痰容器怎样处理？是否可重复使用？已经涂抹过标本的玻片不允许重复使用是否是否有生物危害废物桶？痰容器为一次性使用，用过的痰容器应销毁是否是否有实验室防护服？使用有盖的生物危害废物桶是否离开实验室前是否应该脱掉实验服？在实验室应穿穿好防护服是否实验室是否使用手套？使用是否合适？实验服不能穿出实验室以外是否试验结束后是否洗手？应戴防护手套，手套种类应符合所从事安全工作的要求是否实验室是否有上下水?遵守正确的洗手程序是否实验室是否洁净有序?实验室应当有上下水是/否下班后，是否关闭实验室门窗？是否例行安全检查？干净整洁，物品摆放有序是否实验室有否通风？如果在打开的窗前涂片，技术员是否知道气流方向和潜在的危险？关闭好门窗，巡视检查，确保安全后离去是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：所有痰检室仅一间，且做其它检验项目；操作时未戴防护手套；蔡甸区无上下水（二）检查步骤：现场评价操作步骤

4、显微镜

检查的问题指标结果是否有显微镜？数量是否充分？至少有一台专用于分枝杆菌检查的显微镜，还有另外的显微镜备用。是否显微镜功能是否正常？随机镜检，通过显微镜能观察到清晰的视野，机械调节性能良好。是否显微镜工作场所合适吗？场所能够适当变更。是否是否有充足的光源？具备功能良好的灯泡和电源，或显微镜放置在适当的光源。是否是否常规维护显微镜？有油镜头,且功能完好整机干净清洁，有专人负责常规检查维护

是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：（二）检查步骤：现场评价操作步骤

5、用于室间质量保证的玻片储存检查的问题指标结果所有保存的玻片，是否符合室间质量保证计划的要求？玻片保存符合室间质量保证规定，所有玻片保存与结核病实验室登记本一致。是否所有的玻片是否均保存在涂片盒内？涂片盒上是否有标记？玻片保存在涂片盒内，涂存盒上应按室内质控要求，标记实验序号和时间。是否所有玻片保存之前是否经二甲苯处理过？涂片盒内玻片有无交叉污染？玻片保存之前必须经二甲苯处理，玻片之间无重叠污染。是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：（二）检查步骤：现场评价操作步骤

6、涂片、染色和镜检检查的问题指标结果痰盒上是否有病人标记？痰盒上标记有病人姓名及痰盒序号是否是否使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片？所有的玻片，使用前是否清洁？使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片，玻片使用前要清洁处理是否涂片上是否有标记？涂片按要求标记实验序号是否石碳酸复红多长时间过滤一次？石碳酸复红至少每周过滤一次。是否亚甲基蓝多长时间过滤一次？亚甲基蓝至少每月过滤一次，如果涂片上见到沉积物及时过滤。是否涂抹一张涂片是否使用一个新木签？每张涂片使用一个新木签。是否固定以前，涂片是否在空气中干燥？固定以前，涂片在空气中要干燥完全。是否涂片是否经过加热固定？经过火焰3~5次加热固定。是否通常一批染色多少张涂片？一批最多10~12张涂片。是否染色过程是如何进行的？用石碳酸复红和亚甲基蓝染色要多久？怎么脱色？石碳酸复红热染5分钟，染色剂不许在玻片上干燥，盐酸酒精脱色3分钟，仅必要时重复脱色，不要脱色过度，亚甲基蓝复染30秒钟是否染色试剂做质量检测吗？试剂必须用已知阳性玻片进行检验，至少每月一次是否显微镜多久用擦镜纸清理一次?检查完每张涂片之后，均擦干物镜是否报告一个阴性结果要观察多少个视野？300视野。是否报告一个阳性结果要观察多少个视野？应当检查足够多的视野以提供精确的数量等级。菌量少时至少100个视野。是否涂片镜检结果如何报告？结果要按国家结核病防治规划统一标准分级和报告。是否（二）检查步骤：现场评价操作步骤

7、现场复检

7A.现场评价时督导员至少要随机抽查3张阳性涂片

实验序号自检结果督导结果抗酸杆菌染色背景颜色痰或唾液涂片厚度和大小＋＋＋－－－

（二）检查步骤：现场评价操作步骤

7.现场复检

7B.痰片复检评价

复检评价督导结果与实验室的结果一致吗？是否抗酸杆菌染色和背景染色可以接受吗？是否背景材料显示，是痰吗？是否涂片厚度适当吗？是否涂片范围大小合格吗？是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：

（二）检查步骤：现场评价操作步骤

8.督导小组检查和/或复检印象（1）现场督导和复检结果按国家结核病防治规划要求是可以接受的吗？是否（2）如果不是，通过现场督导发现的问题需要纠正吗？是否请解释纠正措施的必要性：9.盲法复检痰片抽样（详见“盲法复检”）

（二）检查步骤：现场评价操作步骤

10.现场评估概述

列出现场检查中的主要问题,并提出解决的办法：

A．操作问题：B.技术问题：

C.设备及供应问题：

现场评估人签名：

实验室负责人签名：

评估单位:

现场评估日期：二、盲法复检

（一）盲法复检原则：1、从各个实验室抽取的涂片样品必须是随机选出，并能代表整个实验室的操作水平。2、负责抽样的督导员（第二复检者），必须保证复检技术人员（第一复检者）不知道初检结果，以确保盲法复检真实性。3、严格按照随机原则抽取涂片，以保证抽取的样本在统计学上真正代表被评估实验室的整体水平。4、涂片初检结果与第一复检者盲法复检结果之间的分歧，由第二复检者复检后最终确定。5、督导者应及时将复检结果反馈给被督导实验室，以利于涂片技术与质量的不断提高。

二、盲法复检

（二）各级实验室盲法复检分工盲法复检需要一个有效的结核病实验室质控网络支持，网络中的各个实验室承担的工作如下：1、省参比室为第二复检者。负责实施地（市）和部分县级实验室涂片现场抽样，安排第一复检者之间的盲法复检；对涂片初检结果和盲法复检结果的分歧进行再次复检。2、地（市）实验室承担第一复检者和第二复检者双重责任。作为第一复检者需完成省参比室下发涂片样本的盲法复检；作为第二复检者要负责实施县级实验室涂片样本现场抽样，安排第一复检者之间的盲法复检，对涂片初检结果和盲检结果的分歧进行复检，并将质控结果及时回馈给被督导实验室和第一复检者。二、盲法复检

（二）各级实验室盲法复检分工3、县级实验室为第一复检者，负责完成地（市）级实验室下发涂片样本的盲法复检，复检完成后，结果和涂片样本需及时上交。4、省参比室对地（市）级实验室的盲法复检，每半年进行1次；地（市）级实验室对县级实验室的盲法复检，每季度进行1次。5、抽样由上一级实验室督导员现场评价时完成，或在国家规划人员进行常规督导时，完成痰涂片抽样的任务。二、盲法复检

（三）涂片样本量1.样本量估算：盲法复检的关键是复检结果能否真正代表被督导实验室的实际水平。世界卫生组织推荐80%灵敏度、100%特异性（针对阴性涂片）、误差为0的可接受数量以及95%可信限样本量表，可以极大地减少样本量，保证了盲法复检在统计学意义上可以代表被评估实验室的总体水平（见表3）。表3样本量计算表上一年阴性涂片的总数

涂片阳性率2.5%5.0%7.5%10.0%13.0%15.0%18.0%30018512910180675950400217143108867061515002431541148971625270028116712192756554100031818012896766655200037619713510079685650004232081411038069571000044121314210480695720000450215143104826957样本量计算表(表3)说明：

a、涂片阳性率：指所有检测的涂片中阳性涂片的比例（平均阳性率）。b、上一年阴性涂片总数：每年涂片的总数减去全年阳性涂片数。c、抽样时，当上一年阴性涂片数量和涂片阳性率不在选择点，阴性涂片数值采用区间上限，涂片阳性率采用区间下限。二、盲法复检

（三）涂片样本量2.

保存样本量的要求：根据结核病实验室登记本记录，按照弃前留后的原则，保存近期3个月的全部痰涂片待检(如果年涂片量不足500张，必须全部保存待检)。二、盲法复检

（四）抽样量与抽样方法1.根据样本量表，核实被督导实验室“上一年阴性涂片数”和“涂片阳性率”，确定一年应复检的痰片量。如：该实验室前一年阴性涂片总数为3000张、涂片阳性率为9%，一年抽样复检涂片量为141张。2.确定现场涂片抽样量，如：按每季度计算应抽样36张。3.根据实验室登记本核实保存涂片数量并确定如何抽样，如：经核实上一季度留存涂片790张，用790/36=21.9，确定每隔22张选取一张涂片（不按实验室登记本序号抽取，按序号内实际检测涂片量计数选取）。二、盲法复检

（四）抽样量与抽样方法4.根据以上计算，按实验室登记本选取涂片，如果抽样片丢失或损坏，选择下一张，如：实验序号93－3丢失，选择94－1；再从94－2开始计算间隔抽取下一张涂片。5.取出涂片按顺序摆放在玻片盒内。6.填写表4“第二复检质控记录”中实验室序号和自检结果，表5“第一复检质控记录”实验室序号。二、盲法复检

（五）复检步骤1.表4由第二复检者留存。在到达另一个实验室现场抽样时，将表5与抽样涂片同时交给该实验室（第一复检者），及时完成盲法复检。如果抽检涂片是荧光染色，应先使用5％盐酸乙醇脱去荧光剂，再用萋尼氏染色法染色后，进行复检。2.第二复检者收到第一复检者交回的复检结果和抽样涂片后，核对第一复检结果和表4中的自检结果，首先对两者间存在分歧的涂片进行复检(假阳性涂片应重新复染后复检），然后再复检10%涂片样品；肉眼观察部分以第一复检者结果为参考，全部重新复检，复检结果以第二复检者结果为准，填写表6“痰涂片盲法复检结果登记表”。3.第二复检者完成复检后，按国家参比室要求填写并上报表7“痰涂片室间质控汇总表”二、盲法复检

表4第二复检质控记录实验序号初检结果镜检复验结果肉眼观结果痰细胞（>10个/视）大小厚薄染色脱落合计

二、盲法复检

表5第一复检质控记录实验序号镜检复验结果肉眼观结果痰细胞（>10个/视）大小厚薄染色脱落合计二、盲法复检

表6痰涂片盲法复检结果登记表质控次数登记日期初检结果

第一复检单位复检结果(+)(-)第二复检单位复检结果(+)(-)痰细胞合格数涂抹大小合格数厚薄合格数染色合格数痰膜脱落合格数定性错误假阴假阳

(+)(-)计1234合计二、盲法复检

（六）复检结果评价盲法复检的目的不是为了验证某个病人诊断正确与否,而是评价整个实验室操作水平。评价的内容除了涂片镜检结果存在的误差之外，还包括检查标本的质量（合格标本与不合格标本的比例）、涂抹的大小和厚度、染色质量如何等,以便采取纠正措施，提高实验室的工作质量。二、盲法复检

（六）复检结果评价1.误差分类分为定性误差和定量误差（1）定性误差包括高假阳性和高假阴性高假阳性（HighFalsePositiveHFP）：阴性片被错误地判读为2＋以上的阳性。高假阴性（HighFalseNegativeHFN）：2＋以上的阳性涂片被错误地判读为阴性。二、盲法复检

（六）复检结果评价1.误差分类（2）定量误差包括量化误差、低假阳性和低假阴性量化误差（QuantificationErrorQE）：同一张阳性涂片初检者和复检者阳性判断级别的差异。低假阳性（LowFalsePositiveLFP）：阴性涂片被错误地判断为1＋及以下的阳性。低假阴性（LowFalseNegativeLFN）：1＋及以下涂片被错误地判断为阴性。二、盲法复检

2.常见“误差”原因误差类型可能原因建议假阳性（FP）

1、载玻片上的刻痕保留了红色的染迹；2、很偶然的机会导致抗酸杆菌从阳性载玻片转移到了阴性载玻片上；3、载玻片或涂片被外界的分枝杆菌污染；4、各种各样的抗酸微粒（如食物颗粒、沉淀物以及其他微生物）。1）对技术人员复训。2）对假阳性涂片重新染色并复检。假阴性（FN）

1）观察涂片的视野数量不足2）镜检技术能力差3）染色操作不规范（抗酸杆菌颜色暗淡、背景对比不足或过高）4）显微镜存在问题5）染液质量差1.2、3）对技术人员复训4）现场检查显微镜工作状态5）重新购置质量合格的染料并重新配制染液

量化误差（QE）1）观察涂片视野数量不足2）阳性涂片的分级报告标准掌握差3）镜检技术能力差4）显微镜存在问题

1.2.3）对技术人员复训4）现场检查显微镜工作状态

二、盲法复检

（七）复检结果回馈1.盲法复检的最终目的是提高实验室涂片镜检的质量，必须按规定、持续和及时地向下级实验室反馈复检结果。2.复检最终确认的假阳性或假阴性涂片，由第二复检单位保存，以便最初的检验人员了解自己的失误，查找原因并提高检测质量。3.第一复检者对最初的涂片结果并不清楚,应当将第二复检者的结果反馈给第一复检者。4.反馈内容应包括造成失误可能存在的原因，和技术改进建议。5.对存在严重误差(定性错误和频繁的定量错误)的实验室，第二复检者应及时反馈信息，并进行现场调查，协助查找原因解决问题。6.

按统一要求填写反馈报告。盲法复检结果反馈报告

表8复检记录（按表4统计下列结果）初检结果涂片数复检结果阴性1~2条1＋2＋3＋4＋阴性1~2条1＋2＋3＋4＋盲法复检结果反馈报告

表9误差统计：按表8统计评价与建议：

质控者签名：

复检单位:

日期：

高假阳性低假阳性高假阴性低假阴性量化误差合计盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第一步:根据上一年结核病痰检情况，需了解：上一年镜检的所有涂片数、阴性涂片数、阳性涂片数实验室涂片数/年阳性片数/年阴性片数/年A法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第二步:计算每个实验室涂片的阳性率（SPR）并精确至0.1%。SPR=（每年的阳性涂片数/每年涂片总数）*100，最好根据上一年的实验室记录来计算应包括初诊和随访的所有涂片。实验室涂片数/年阳性数/年SPRA县153422414.6％盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第三步：根据表3《样本量计算表》在表的左边，从第一行往下找到上一年阴性涂片的总数，在表的顶端，找到本县相应的SPR。在表中相应位置查出需抽检样本量的大小。本例中全年阴性涂片数为1310张样本量表中选取阴性涂片2000张一栏本例中全年SPR为14.6％样本量表中选取SPR13.0%一栏抽检样本量=79张注：抽样时，当上一年阴性涂片数量和涂片阳性率不在选择点，阴性涂片数值采用区间上限，涂片阳性率采用区间下限。表3样本量计算表上一年阴性涂片的总数

涂片阳性率2.5%5.0%7.5%10.0%13.0%15.0%18.0%30018512910180675950400217143108867061515002431541148971625270028116712192756554100031818012896766655200037619713510079685650004232081411038069571000044121314210480695720000450215143104826957盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第四步：确定抽取涂片的适宜的时间间隔，如果按每年四次，则一季度一次。确定每次需抽检的涂片数。79/4=19.75即每个季度所要的涂片数为20张盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第五步：按上一季度实际保存的涂片数，确定抽样间距。根据实验室记录抽取样本，若应保存的涂片丢失，则选用下一张保存的涂片（不论结果如何）。如上一个季度保存的涂片数为384张。抽样间距的计算：384/20=19.2则每隔19张涂片抽取1个样本。盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第六步：采用随机方法，确定抽样的第一张涂片。抽样人员随机取出一张钱币，以钱币号码的最后两位数，作为抽取第一张涂片的序号。假定钱币尾号为21，即确定抽取的第一张涂片为第21张。盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第七步：抽取涂片以第21号涂片为第一张涂片，以后每间隔19张涂片抽一张涂片。（登记本中，以下标虚线红圈的涂片，为第一张涂片，其它红圈为按间隔抽取的涂片）盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例第八步：抽取完涂片后，将涂片交于同级实验室盲法复检，上级实验室对两者间存在分歧的涂片进行复检，然后再复检10%涂片样品；并根据误差分类表，统计复检结果，如下表：盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例盲法复检结果反馈A表.复检结果记录初检结果涂片数复检结果阴性1－2条1＋2＋3＋4＋阴性

1513111－2条111＋2112＋113＋4＋11盲法复检举例：

以某市结防机构，对县级结防机构现场抽样为例B表误差统计（按A表统计下列结果）

高假阳性高假阴性量化误差低假阳性低假阴性合计111115三、批量测试

批量测试是指定期地由国家或省级参比室向外周实验室发送已经染色和/或未染色的涂片，由外周实验室人员来读片并对读片结果进行评估。这种方法是检查实验室技术人员的染色能力和/或读片能力，主要检测个人的操作技术，而不是检测实验室的整体操作水平，也不是检测实验室的常规操作。当没有其它质量评价方法存在时，批量测试可以作为一个评价当前操作技术的有价值的测量方法。三、批量测试

（一）、测试涂片准备和要求1、测试涂片由国家参比室和省级参比室负责制备。2、测试涂片包括染色和未染色涂片，低阳性的涂片，太厚或太薄的涂片，染色不好的涂片。3、每张阳性涂片的抗酸杆菌数量都已确定，阴性涂片都具有一致的背景。4、为提高制作的效率，参比实验室应按50～100张涂片为一批进行制备。5、已染色的涂片主要用于评估痰检人员的镜检能力，不能表明技术人员的准备染色剂和染色能力。6、未染色的涂片可检测技术人员的综合技术水准，包括染色剂的制备、染色、镜检和结果报告。三、批量测试

（一）、测试涂片准备和要求7、当参比实验室条件有限，不能准备批量测试涂片时，可利用已染色的病人涂片（如盲法复检后的涂片）用于批量测试