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文档简介

5分子生物学研究方法(上)—DNA、RNA及蛋白质操作技术从20世纪中叶开始,分子生物学研究得到高速发展,主要原因之一是研究方法,特别是基因操作和基因工程技术的进步。基因操作主要包括DNA分子的切割与连接、核酸分子杂交、凝胶电泳、细胞转化、核酸序列分析以及基因人工合成、定点突变和PCR扩增等,是分子生物学研究的核心技术基因工程是指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子,构成遗传物质的新组合,使之进入原先没有这类分子的寄主细胞内并进行持续稳定的繁殖和表达·基因工程技术是核酸操作技术的一部分,只不过它强调了外源核酸分子在另一种不同的寄主细胞中的繁衍与性状表达·事实上,这种跨越物种屏障、把来自其它生物的基因置于新的寄主生物细胞之中的能力,是基因工程技术区别于其它技术的根本特征。5.1重组DNA技术回顾三大成就40年代确定了遗传信息的携带者,即基因的分子载体是DNA而不是蛋白质,解决了遗传的物质基础问题50年代提示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机制,解决了基因的自我复制和世代交替问题-50年代末至60年代,相继提出了“中心法则和操纵子学说,成功地破译了遗传密码,充分认识了遗传信息的流动和表达。重组DNA技术历史上的主要事件年份事件1869FMiescher首次从莱茵河鲑鱼精子中分离DNA19440TAvery.证实DNA是遗传物质1952A,D.Hershey和M.Chase再次证实和噬菌体的遗传物质是DNA。1953JD.Watson和F.H.C.Crick提出DNA分子结构的双螺旋模型M.Wilkins用Ⅹ-射线衍射法证实了这一结构。1957AKornberg从大肠杆菌中发现了DNA聚合酶I1958M.Meselson和Ew.Shl提出了DNA的半保留复制模型1959-s.Ochoa发现RNA聚合酶和信使RNA,并证明mRNA决定了蛋1960白质分子中的氨基酸序列196lnberg破译了第一个遗传密码;F.Jacob和.Monod提出了

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