第二讲-石蜡切片技术1：动物麻醉与取材教学课件

石蜡切片的一般过程一、动物麻醉、处死、取材二、组织固定

三、组织冲洗、脱水四、组织透明

五、组织浸蜡、包埋

六、组织切片、贴片、烤片

七、组织片染色、封固、观察

石蜡切片的一般过程

一、动物麻醉1．小动物

如小白鼠、大白鼠、豚鼠等，可将浸有乙醚或氯仿（三氯甲烷）的棉球，与动物一同密闭于玻璃容器内，进行麻醉。2．较大的动物

如兔、猫、狗、猴等3%~4%戊巴比妥（钠），1ml/kgw静脉注射或腹腔注射；20%氨基甲酸乙酯，5ml/kgw腹腔注射。二、处死动物1．空气栓塞法

兔等动物可用大空针从耳静脉注入空气，从而在血管中形成气体栓塞，导致动物立即死亡。2．颈椎脱臼、断头法

适应于小动物。3．直接放血处死

将动物麻醉或不麻醉后，切开股动脉或颈动脉放血致死。三、动物取材根据教学或科研的目的和要求，选取适当的组织或部分器官。（一）动物的选择1．猴神经、循环、免疫、内分泌、感觉器官、泌尿、生殖系统的材料较好。2．狗神经、免疫、内分泌、消化、呼吸、泌尿、生殖系统的材料较好。3．猫神经、内分泌、消化、泌尿系统、肌肉等材料较好。4．兔皮下组织、肠系膜、卵巢、肺、耳壳等材料较好。（一）动物的选择5．羊心脏、膀胱、雌性生殖系统的材料较好。6．猪肝、骨髓、脑垂体等材料较好。7．豚鼠胰、内耳、肾上腺等材料较好。8．大、小白鼠皮下组织、小肠、嘴唇等材料较好。

（二）取材的方法组织取材是制片的一个重要的技术问题，必须根据教学或科研的具体要求，确定取材的部位和方法。否则，对所观察的组织结构，不是看不到，就是看不全。因此，在取材之前，必须弄清所取组织器官的解剖位置、组织结构特点等，同时，还要掌握实际的操作技术，不能随意剖取组织器官材料。1．取材的顺序先取腹腔的脏器；然后取胸腔、骨盆腔内的脏器；最后开颅取神经系统及其他材料。2．部分组织器官的取材（1）肌组织骨骼肌：以舌肌、肋间肌、缝匠肌为好。心肌：以左心室乳头肌为好，因为此处蒲肯野氏纤维较多。平滑肌：膀胱、子宫、胃、肠均可。骨骼肌：心肌：左心室室中隔右心室右心房左心房左房室口左房室口乳头肌主动脉瓣膜肉柱主动脉口平滑肌：（2）肝动物：以猪为好。部位：猪肝分为左外、左内、右内、右外四叶，一般左右外叶较大，可在其中部作纵切或横切取材。大小：2~3mm厚。因肝为实质性器官，细胞排列密集，固定液难以渗入，故组织块不能过大。（2）肝猪肝脏（3）胰动物：以豚鼠为好。部位：以胰尾较好，因为此处胰岛较多。马肝、胰（4）食管动物：以较小者为好。部位：一般取其下1/3段，因为此处食管腺较多，分层也较典型。方法：一般做整体横切，长约0.5~1.0cm。注意：为防止收缩变形，可在其内插入一条小的圆形玻棒，再进行固定；或取一段稍长的食管，两端结扎，将适量的固定液注入腔内，并置于固定液中，4~6h后取材继续固定。（4）食管（5）胃部位：一般取胃体或胃底部，因此处胃底腺丰富。当然，也可根据需要，取其贲门部或幽门部。方法：纵切。注意：用生理盐水洗去胃内容物，并将组织块（外层）铺展于滤纸上以防卷曲，而后投入固定液中固定。猪胃（5）胃（6）肠动物：一般以小动物为好。部位：一般取各段肠管的中部。方法：横切、纵切均可。横切：可先取一段稍长的肠管，用生理盐水冲去内容物，然后两端结扎，再注入适量固定液后，投入固定液中4~6h后再取材，长约0.5~1.0cm。纵切：组织块经生理盐水洗涤后，贴于滤纸上，然后投入固定液中固定。

十二指肠、空肠、回肠肠绒毛大肠：肠腺、淋巴组织（7）肾动物：较小者为好。方法：最好先进行灌注固定，而后取材，即从肾动脉注入固定液，同时切开肾静脉，当血液流尽后，将全肾投入固定液中固定2~4h后，再沿正中矢面剖开，然后在任一半面上，从皮质向髓质的方向切一扇形组织块，以确保皮质、髓质完全，再投入固定液继续固定。注意：皮质、髓质一定要完整。（7）肾（8）肺部位：肺中部。方法：横切。注意：先从肺支气管或肺动脉注射适量的固定液，然后将全肺投入固定液中固定6~12h后，再取材。支气管的各级分支：支气管树（bronchialtree）：支气管由肺门进入肺后反复分支，呈树枝状，故称支气管树。（8）肺（9）心脏部位：左心室乳头肌处。方法：沿乳头肌长轴作纵切。（9）心脏（10）胸腺动物：幼年

（11）脾部位：取中部。方法：横切。注意：先用生理盐水从脾动脉注入冲洗，同时切开脾静脉，将血液冲出，至脾呈灰白色，然后取材。（11）脾（12）淋巴结部位：肠系膜淋巴结较好，髂内淋巴结、颈淋巴结也可。方法：沿门部作正中纵切面，分为两半。门部（12）淋巴结（13）睾丸动物：猴、兔、大小白鼠较好，因大小适中。方法：从睾丸外侧缘切至附睾，将其分为两半。（13）睾丸（14）子宫动物：兔、大小白鼠等小动物，因大小适中。方法：自宫颈至宫体正中切开，作矢状切面。注意：包括内膜、肌膜和外膜。牛子宫、卵巢（15）脊髓动物：较小者。部位：颈膨大、腰膨大处。方法：横切。（16）神经部位：坐骨神经、股神经。方法：横切。注意：两端结扎固定，然后投入固定液中。

（17）大脑部位：中央前回或后回。方法：垂直切入。注意：皮质、髓质均切到。回（18）小脑部位：蚓部。方法：纵切。注意：皮质、髓质均要切到。

（19）眼球

动物：较小者。方法：整体取材。注意：将固定液从后房或颈静脉注入，并投入固定液。此外，需用火棉胶包埋切片。（20）内耳

动物：豚鼠等较小的动物。方法：整体取材。注意：先用注射法固定，然后将内耳整体取下并投入固定液中继续固定。此外，需用火棉胶包埋切片。

3．取材注意事项（1）动作轻柔，避免挤压组织。一般用刀片，少用或不用剪刀，切取时要一刀下去，不要来回