临床常规检验-血型鉴定（临床检验技术课件）

血型鉴定血型的概念

血型是各种血液成份的遗传多态性标记，是产生抗原抗体的遗传性状。遗传多态性：是指一个系统中至少有两个等位基因，并且其中一个基因频率大于1%的遗传学现象。兰德斯坦纳 第一节红细胞血型系统一、ABO血型系统二、Rh血型第一节红细胞血型系统

到目前为止，共发现400多种抗原，被分为28个血型系统以及2个频率组。其中最具有临床意义的是ABO血型系统，其次是Rh血型系统。本章重点介绍ABO及Rh两个血型系统。一、ABO血型系统ABO血型是最早发现的一个血型系统，也是应用最广、与临床输血最密切、最重要、研究和认识较深入的一个血型系统。(一)ABO血型分型

分型原则：ABO血型是根据红细胞表面是否含有A、B抗原来分型的。可以将血型分为A、B、AB、O四型。后来发现ABO血型系统中还存在H抗原,血清中存在抗A、抗B、两种抗体。ABO血型抗原抗体分布型别

红细胞抗原

血清抗体

AA、H抗BBB、H抗AOH抗A抗BABA及B、H(二)ABO血型抗原和血型物质 ABO血型系统的抗原有A、B、H三种，人红细胞表面含有什么样的血型抗原是由第9号染色体上携带的遗传基因决定的。ABO抗原的生物合成 A、B、H抗原决定簇的前身物质（oh）是含4个3种不同糖基的寡糖链，依其连接的顺序分别为：N-乙酰氨基半乳糖、D-半乳糖、N-乙酰氨基葡萄糖、D-半乳糖。ABO抗原的生物合成

首先由H基因控制形成H物质。然后在A基因控制下，在H物质的D基础上，形成A抗原。或在B基因控制在H物质的基础上形成B抗原。仅有H活性，没有A、B活性，则为O型。H、A、B血型抗原的形成示意图半乳糖基础前身物质A基因转移酶B基因转移酶H抗原半乳糖-D岩藻糖-L乙酰半乳糖胺-N乙酰葡萄糖胺-NA抗原B抗原岩藻糖转移酶-L基因控制-H半乳糖-DN-乙酰半乳糖胺ABO血型抗原 O基因是无效基因，不能引导转移酶的产生，因此，不能在H物质上连接糖基，其结果是O型RBC的H抗原浓度最高，而A、B型仍还有一定数量未转变的H抗原，其H抗原活力强度的顺序为:O>A2>A2B>B>A1>A1B。ABO血型抗原 ABO血型抗原属完全抗原，是由多肽链和多糖组成的糖蛋白，多肽链决定着抗原的抗原性，多糖决定着抗原的特异性。ABO血型抗原结合在红细胞和其他组织细胞（神经细胞除外）表面，它与脂质和蛋白质结合在一起，不溶于水，可溶于乙醇。ABO血型抗原 ABH抗原在5～6周胎儿RBC已可测出，出生时抗原性只达成人的25%～50%，在生后18个月时才能充分表现出抗原性，20岁左右达到高峰，抗原性终身不变。血型物质

是每个个体所专有的血型抗原物质，以水溶性的形式存在于大多数体液和组织液中，如血清、精液、胃液、卵巢肿液、羊水、汗液、尿液、泪液、胆汁、乳汁和腹水中，但脑脊液中没有。这些可溶性抗原被称为“血型物质”，以唾液中含量最丰富。血型物质

凡体液中血型物质者为分泌型，约占人群总数的80%，无血型物质者为非分泌型，占20%。血型物质的意义①测定唾液中血型物质辅助鉴定血型。②血型物质可中和ABO血型系统中的“天然抗体”，有助于检查免疫性抗体。血型物质的意义③检查羊水，预测胎儿ABO血型。④制备混合血浆。⑤利用RBC凝集抑制试验，可检查脏器和组织血型（主要用于法医学鉴定）（三）ABO血型抗体天然抗体免疫性抗体天然抗体与免疫抗体的鉴别单克隆抗体天然抗体机体没有经过可查觉的抗原刺激，就在体内存在的抗体称为天然抗体。免疫抗体

是经A或B抗原特异性免疫刺激产生的抗A或抗B抗体。

这种免疫来自母胎ABO血型不合的妊娠；输入了ABO血型不合的RBC；

或注射了纯化的血型物质及含有血型活性物质的病毒或细菌产物等。ABO血型抗体

天然抗体主要是IgM，免疫抗体主要是IgG，但这种区分的界限也不十分明确，事实上人的IgG、IgM血型抗体往往同时存在。ABO血型抗体抗A、抗B:

可以完全是IgM；也可以是IgM与IgG；甚至是IgM、G、A的混合物。总体而言，抗A、抗B主要是IgM，而O型血清中是以IgG为主。ABO血型系统亚型

是指属同一血型抗原，但抗原结构和性能或抗原位点数有一定差异的引起的变化。亚型的重要性①由于其抗原性较弱，易造成定型错误；

②有不规则抗体（如抗A1）者常使同型间的配血困难；

③误输入不相合的亚型抗原，造成溶血的潜在威胁。A亚型A抗原的两个主要的亚型是A1和A2。在AB型中应有A1B和A2B亚型。A亚型在我国汉族人中：

A1型占99.23%，A2型0.77%，

A1B型

占99.13%A2B型0.87%。

也就是说，我国人中A2和A2B型在A、AB型人中都不到1%。A亚型A1亚型红细胞上含有A1和A抗原，血清中含有抗B抗体；

A2亚型的红细胞上只有A抗原，血清中除抗B抗体外，还含有抗A1抗体。

B型人的血清中含抗A及抗A1两种抗体，可以与A1、A2亚型红细胞发生凝集反应。A亚型

所以A2型的人接受A1型人的血，也可发生输血反应，但只有在37℃时发生反应的抗A1抗体才有临床意义。B亚型B亚型较A亚型少见，具有与抗B血清凝集弱的特点，有的显混合外观,有的甚至不凝集，所以将其称为弱B，当被鉴定为O型时可造成输血的错误。(四)ABO血型的遗传ABO血型的遗传现在接受三复位等位基因学说，认为：在决定ABO血型遗传的基因位点上存在A、B、O、三个等位基因，现在已知ABO遗传位点在第九号染色体上。(四)ABO血型的遗传ABO三个基因组成六种基因型：AA、AO、BB、BO、AB、OO；

A、B为显性基因，O为隐性基因，所以只有四种表现型：A、B、O、AB。(五)ABO血型异常

一般来说，人类ABO血型是符合一定的遗传规律，且终身不变的，在极少数遗传异常情况下，可见到一些特殊血型，如孟买血型。孟买血型

孟买血型因首先在印度孟买一妇女中发现而得名。其表现型为oh，无H基因，h基因为无效基因。没有H、A、B抗原，定型时易被误定为O型。孟买血型

孟买血型血清中含有抗H、抗A、抗B抗体，不管输血给O型人还是接受O型人的血，均会与含H抗原的O型红细胞发生溶血性输血反应。

此类患者如需要输血时，只能输oh同型血。二、Rh血型系统Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。Rh血型

所以当时认为这些人的RBC上含有一种与恒河猴RBC相似的抗原，取Rhesus的英文字头，称为Rh血型。恒河猴RBC（抗原）

家兔豚鼠

抗血清（抗体）

85%白种人RBC

凝集

免疫

获得

能与

发生

Rh血型

几乎同时，有人发现：一产妇生下死胎后，发生产后大出血，输入爱人的ABO型的同型血，引起产妇溶血，然后把产妇的血取出与其他人的RBC交叉后，部分人RBC发生凝集，提示产妇的血清存在一种ABO以外的抗体。Rh血型

后经研究发现，这两种抗体确定的抗原并不完全相同，用动物血清鉴别的抗原几乎存在于所有人的红细胞上，仅反应强弱不同，为纪念发现者，命名为LW抗原，其抗体为一种自身抗体。Rh血型

因为Rh这个术语已普遍采用，以及对原发现者的敬意，故仍定名为Rh血型。所以将利用来源于人体抗体鉴定的红细胞抗原，命名为Rh血型。Rh血型

凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，称为Rh阳性。使已发现的红细胞A、B、O及AB四种主要血型的人，又都分别一分为二地被划分为Rh阳性和Rh阴性两种。Rh血型

根据有关资料介绍，Rh阳性血型在我国汉族及大多数民族人中约99.7%，个别少数民族约为90%。

在国外的一些民族中，Rh阳性血型的人约为85%，其中在欧美白种人钟，Rh阴性血型人约占15%。(一)Rh血型抗原Rh血型的抗原已发现了40多种，与临床关系最为密切的有5种：

D、C、E、c、e。

5种抗原的抗原性强弱次序为：

D>E>C>c>e(一)Rh血型抗原

五种抗原中，因D的抗原性最强，对临床更为重要，所以临床上习惯将含D抗原的红细胞称为Rh阳性，不含D抗原的红细胞称为Rh阴性。(二)Rh血型抗体Rh血型血清不含天然抗体当输血时供血者(Rh阳性)↓第一次输血无明显凝集反应受血者(Rh阴性)

通过体液免疫产生抗Rh抗体当再次输血时出现明显凝集反应(二)Rh血型抗体Rh血型血清不含天然抗体当输血时供血者(Rh阳性)↓第一次输血无明显凝集反应受血者(Rh阴性)

通过体液免疫产生抗Rh抗体当再次输血时出现明显凝集反应(二)Rh血型抗体

当Rh阴性妇女第一次怀孕（胎儿为Rh阳性）→分娩时胎儿RBC诱导孕妇产生抗D抗体→第二次怀孕

↓

胎儿—(Rh阳性)↓抗D抗体胎儿红细胞发生凝集和溶血(新生儿溶血)(三)Rh血型遗传和命名Rh遗传基因定位于1号染色体上，其遗传方式及命名方法，目前主要用Fisher_Race命名法又称CDE命名法；

这种学说认为Rh血型有三个相连的基因位点，顺序是CDE。(三)Rh血型遗传和命名CcDdEeCcDdEeFisher的Rh血型基因位点示意图(三)Rh血型遗传和命名3个连锁基因可以有8种基因组合，即CDe、Cde、cDe、CDE、Cde、cdE、cde、CdE；子代就可能有由两条染色体上的8种基因型组合成的36种遗传型。用现有的5种抗血清，即抗D、抗C、抗E、抗c、抗e可以检出18种不同的Rh血型。(三)Rh血型遗传和命名Rh血型的命名法：被检红细胞与某种抗体凝集就用与抗体相同的符号标记；

若不凝集则用其大小写相反的符号标记。(三)Rh血型遗传和命名目前有两种说法：

1.凡是红细胞上有D抗原的为Rh阳性，标记为Rh+

；红细胞上没有D抗原为阴性，标记为Rh-

。（这是口头上习惯这种说法）(三)Rh血型遗传和命名2.真正的Rh+和Rh-是：

CDE为Rh+cde为Rh-在学术上（或血清学）用这种说法Rh血型的发现、遗传和命名甲例（DD纯合子）乙例（Dd杂合子）亲代表现型亲代遗传型子代遗传型子代表现型CDe/cdecDE/cdecDEcDeCDecdecDEcdeCcDee父CcDee父ccDEe母母ccDEecDE/cDeCDe/cDeCDe/cdecde/cdeCDe/cDecDe/cDeCDe/cDEcDe/cDECDe/cDEcde/cDE图Rh血型遗传举例CcDeeccDeeCcDEeccDEeCcDeeccDEeCcDEeccdeeCDecDe生殖细胞(四)Rh血型的亚型 Rh亚型，以弱D最有临床意义。弱D是D抗原的变异体，其免疫原性较弱。但弱D仍是Rh阳性的红细胞，如果将弱D血输给Rh阴性受血者时，仍有产生抗D抗体的可能性，因此不能将弱D输给Rh阴性的受血者。同时由于其免疫原性较弱，不能与所有的抗D血清发生反应，易被误定为Rh阴性，当弱D型人接受输血时应是Rh阴性血，否则可能产生抗D。Rh亚型

献血者

弱D血液d阴性（人）

输给

抗D抗体

弱D（人）接受

溶血性输血反应

可产生

受血者

D型血液第二节ABO血型鉴定一、标本的采集静脉采血3ml,取下针头后，将其中的0.4ml注入已加有106mmol/L枸橼酸钠抗凝剂0.1ml的试管中（血液与抗凝剂的体积比为4∶1），混匀，以备配制红细胞悬液用。剩余血液加入另一支试管，待其自然凝固后分离出血清，将血清置于第三支试管中备用。第二节ABO血型鉴定二、红细胞悬液的配制应先将被检者红细胞用生理盐水洗涤1～3次，再配成2%～5%的红细胞悬液三、ABO标准血清要求标准1.高度特异性2．高效价抗A血清效价：＞1︰128抗B血清效价：＞1︰64抗A+B血清效价：＞1︰64三、标准血清的要求3．亲和力在15秒钟内出现凝集，3分钟时凝集块不小于1mm²。4．不含冷凝集素或其效价在1:4以下。5.不含补体，无任何污染。四、标准红细胞悬液的制备

三种血型的红细胞，经生理盐水洗涤后得到比容红细胞，再配成不同浓度的红细胞悬液。五、ABO血型鉴定方法用已知抗体（抗A、抗B）鉴定RBC抗原（A、B抗原）—称“正定型”试验。用已知RBC抗原鉴定血清中抗体—