免疫学技术-免疫原和抗血清的制备（临床免疫检验课件）

免疫血清的制备免疫血清是一种含有高效价特异性抗体的血清，一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。通过注射抗血清也可以传递被动免疫，治疗许多疾病前言免疫血清将抗原以不同途径免疫动物可从动物血清中分离得到抗体，把这类含有抗体的血清称为免疫血清或抗血清

免疫血清多价抗原多个B细胞克隆（致敏的B细胞）多克隆抗体抗血清制备流程免疫动物选择免疫方案制定动物采血抗血清分离纯化及鉴定抗血清的保存免疫动物选择动物种系抗血清要求动物个体抗原的性质选择适龄、健壮、无感染性疾病，体重符合要求的健康动物，一般多选择雄性动物抗原与免疫动物种属差异越远越好，亲缘关系太近不易产生免疫应答蛋白质类抗原对多数动物皆适合，常选用家兔和山羊R型抗血清适用于诊断试剂H型一般用作免疫治疗免疫方案制定免疫原的剂量免疫途径免疫间隔时间皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、脾脏、淋巴结一般间隔10～20d为佳。两次以后的每次间隔一般为7～10d一定范围内，免疫原的用量越大，免疫反应越强，产生的抗体效价越高伤寒沙门菌O抗原免疫家兔的方案动物采血最常用的方法多用于家兔、绵羊山羊等动物静脉采血时家兔可用耳静脉；山羊可用颈静脉此法多用于豚鼠大鼠等小动物技术要求高010203颈动脉放血法心脏采血法静脉采血法抗血清分离采集的血液多采用在室温自然凝固，然后防置37℃温育1h，之后防置4℃冰箱中待凝块收缩后分离血清抗血清纯化①亲和层析法②吸附剂方法①盐析②凝胶过滤③离子交换和亲和层析法抗血清纯化特异性抗体的纯化IgG类抗体的纯化抗血清鉴定抗体效价的鉴定抗体特异性的鉴定抗体纯度的鉴定抗体亲和力的鉴定一般原则是颗粒性抗原用凝集试验可溶性抗原用双向琼脂扩散试验常用双向免疫扩散法进行鉴定可采用免疫电泳、双向琼脂扩散试验、SDS等方法鉴定常用ELISA、RIA和平衡透析法等进行测定抗血清保存4℃保存3～6个月-70℃～-20℃保存2～3年冷冻真空干燥保存4～5年03010202免疫方案的制定03动物采血04抗血清分离、纯化和鉴定

小结01免疫动物的选择05抗血清的保存思考题ECE1.抗血清的制备流程是什么？2.选择免疫动物的依据是什么?免疫原的制备抗原和抗体是免疫学检测中的两大基本因素，抗原的纯化是制备特异性抗体的先决条件制得的抗体又可用于抗原的纯化和检测前言免疫原免疫原就是抗原是指能够刺激机体产生抗体并能与之发生特异性反应的物质免疫原颗粒性抗原制备如绵羊红细胞抗原细菌抗原的制备可溶性抗原制备如蛋白质、多糖核酸等人工抗原制备包括人工结合抗原人工合成抗原、基因重组抗原颗粒性抗原制备最后配成1×106/ml浓度的细胞悬液，即可应用绵羊红细胞抗原制备采集新鲜绵羊红细胞注入无菌并带有玻璃珠的三角烧瓶内充分摇动15分钟后除去纤维蛋白再以无菌生理盐水洗涤3次颗粒性抗原制备鞭毛抗原需用有动力的菌株，菌液用0.3％～0.5％甲醛处理菌体抗原则需要在100℃加温2～2.5小时后应用细菌抗原的制备可溶性抗原制备蛋白质、酶、核酸、细菌毒素等皆为可溶性抗原制备组织匀浆粉碎细胞蛋白质脂多糖核酸提取可溶性抗原制备组织匀浆的制备细胞破碎的方法反复冻融法超声破碎法溶菌酶处理法表面活性剂处理法高速捣碎法研磨法蛋白质抗原提纯方法亲和层析离子交换层析凝胶过滤选择性沉淀法超速离心法电泳010203040506根据蛋白质分子大小不同进行分离根据蛋白质在不同盐浓度中溶解度不同进行的分离根据蛋白质密度的不同进行分离根据蛋白质分子量和电荷量不同进行分离根据生物大分子生物学特异性进行分离，如抗原抗体结合根据电荷不同进行分离纯化抗原的鉴定含量分子量纯度免疫活性常用的鉴定方法聚丙烯酰胺凝胶电泳法酶联免疫吸附试验免疫电泳法双向琼脂扩散试验等人工抗原用化学合成法或基因重组法制备的抗原人工抗原人工结合抗原人工合成抗原基因重组抗原人工结合抗原半抗原和大分子物质结合后即具有免疫原性，这种经过人工修饰的半抗原称之为人工结合抗原，用于偶联半抗原的大分子物质称为载体半抗原载体蛋白质类多肽聚合物大分子聚合物物理法化学法鉴定：吸收光谱分析法和核素标记半抗原渗入法人工合成抗原可用于研究氨基酸种类、序列或蛋白质抗原性及免疫原性关系等

用化学方法将活化氨基酸聚合，使之成为合成多肽，即人工合成抗原基因工程抗原将编码免疫原性氨基酸序列的基因克隆化并与适当载体DNA分子相结合然后引入受体细胞中使之表达，能获得免疫原性之融合蛋白，经纯化后可作为抗原，即基因工程抗原基因工程抗原佐剂佐剂是先于抗原或与抗原一起注入机体，可增强机体对该抗原的特异性免疫应答或改变免疫应答类型的物质。免疫佐剂简称佐剂为一类非特异性的免疫增强剂弗氏佐剂和抗原比例为1:1混合方法：研磨法、搅拌注射器混合法弗氏完全佐剂弗