第一章蛋白质的结构与功能课件1

第一章蛋白质的结构与功能当前1页，共125页，星期日。第一节蛋白质的分子组成（熟悉）第二节蛋白质的分子结构（熟悉）第三节蛋白质结构与功能的关系（了解）第四节蛋白质的理化性质（掌握）学习目标当前2页，共125页，星期日。当前3页，共125页，星期日。蛋白质蛋白质是（protein）是由许多氨基酸通过肽键相连形成的高分子含氮化合物是生命活动的主要体现者。生物体的组成及生长、发育、繁殖、遗传等一切生命活动都与蛋白质有关。当前4页，共125页，星期日。

蛋白质的生物学重要性1.蛋白质是生物体重要组成成分

分布广:所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。

含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45%。某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80%。当前5页，共125页，星期日。2.蛋白质具有重要的生物学功能1)酶的催化作用，已知酶有2000多种；2)运输和储藏作用；3)运动功能，肌肉收缩；4)结构成分和机械支持物，胶原蛋白和弹性蛋白；5）免疫功能，抗体（免疫球蛋白）；6）凝血功能；7）构成生物膜，体现膜功能，膜蛋白、载体、受体；8）激素的调节作用，肽类和氨基酸类、蛋白类；3.氧化供能当前6页，共125页，星期日。第一节

蛋白质的分子组成当前7页，共125页，星期日。一、蛋白质的元素组成

主要有C、H、O、N、S大多数蛋白质含有少量磷、铁、铜、锌、锰、钴、钼个别蛋白质还含有碘。

掌握当前8页，共125页，星期日。蛋白质元素组成的特点各种蛋白质的平均含N量为16％。由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量100g样品中蛋白质的含量（g／100g蛋白质）＝每克样品中含氮克数×6.25×100

1/16%掌握当前9页，共125页，星期日。二、蛋白质的基本组成单位

——

氨基酸（aminoacid)蛋白质是高分子化合物，可以受酸、碱或蛋白酶作用水解为小分子物质。蛋白质彻底水解后，其基本组成单位为氨基酸。在自然界中存在的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的编码氨基酸仅有20种。当前10页，共125页，星期日。（一）氨基酸的结构与分类1.氨基酸的氨基（－NH2）或亚氨基（==NH）都与邻接羧基（－COOH）的a-碳原子相连接，故它们都属于a-氨基酸（脯氨酸为a-亚氨基酸）。2.不同氨基酸在于R不同。除了R为H的甘氨酸外，其他氨基酸（包括脯氨酸）的a-碳原子都是手性碳原子（碳原子所连的4个原子或基团互不相同）因而每种氨基酸都有两种构型：D型和L型均属L-a-氨基酸（甘氨酸除外）掌握当前11页，共125页，星期日。氨基酸结构通式αα当前12页，共125页，星期日。H甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式R当前13页，共125页，星期日。非极性脂肪族氨基酸极性中性侧链氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸（三）氨基酸的分类*20种氨基酸的英文名称、缩写符号及分类如下:当前14页，共125页，星期日。1.非极性脂肪族氨基酸当前15页，共125页，星期日。2.极性中性氨基酸当前16页，共125页，星期日。3.芳香族氨基酸当前17页，共125页，星期日。4.酸性氨基酸R基有COOH(COO-)

带负电荷18当前18页，共125页，星期日。5.碱性氨基酸R基有NH2(NH3+)

带正电荷19当前19页，共125页，星期日。不常见的蛋白质氨基酸

当前20页，共125页，星期日。

半胱氨酸+胱氨酸二硫键-HH当前21页，共125页，星期日。（二）氨基酸的理化性质1.两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度取决于所处溶液的酸碱度。

等电点(isoelectricpoint,pI)在某一pH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点。当前22页，共125页，星期日。NH3+HCRHCRCOO-

NH3+NH2COOHCOO-+OH-+H++OH-+H+氨基酸阳离子氨基酸兼性离子氨基酸阴离子(pH＜pI)(pH=pI)(pH＞pI)HCRNH2COOH氨基酸的两性电离与等电点HCR当前23页，共125页，星期日。2.氨基酸的紫外吸收性质和呈色反应色氨酸、酪氨酸（含共轭双键）具有吸收紫外光的特性。在280nm附近有最大吸收峰。多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值是分析溶液中蛋白质含量的快速简便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收当前24页，共125页，星期日。2.氨基酸与茚三酮反应生成蓝紫色化合物氨基酸与茚三酮水合物共热，可生成蓝紫色化合物，其最大吸收峰在570nm处。由于此吸收峰值与氨基酸的含量存在正比关系，因此可作为氨基酸定量分析方法。当前25页，共125页，星期日。二、氨基酸与多肽一分子氨基酸的a-羧基与另一分子氨基酸的a-氨基脱水缩合形成的酰胺键称为肽键。掌握当前26页，共125页，星期日。+-HOHNH2-CH-C-N-CH-COOHCH3HHONH2-CH-CHOOH甘氨酸

NH-CH-CCH3OOHH丙氨酸甘氨酰丙氨酸肽键当前27页，共125页，星期日。*2个氨基酸缩合形成二肽，3个氨基酸缩合则形成三肽……*

肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基。*由10个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽。*氨基酸通过肽键连接形成的化合物称为肽当前28页，共125页，星期日。N-端：多肽链中有自由氨基的一端C-端：多肽链中有自由羧基的一端多肽链有两端:*多肽链(polypeptidechain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。当前29页，共125页，星期日。N-端C-端牛核糖核酸酶当前30页，共125页，星期日。医学上重要的生物活性肽

1.γ-谷胱甘肽(glutathione,GSH)γ链接当前31页，共125页，星期日。GSH过氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSG

GSH还原酶NADPH+H+NADP+通过功能基团巯基参与：细胞的氧化还原作用，清除氧化剂，具有保护某些蛋白质的活性巯基不被氧化的作用。当前32页，共125页，星期日。

SSNH2NH2NH2

半胱—酪—异亮—谷—天—半胱—脯—亮—甘

SSNH2NH2NH2

半胱—酪—苯丙—谷—天—半胱—精—亮—甘催产素抗利尿素当前33页，共125页，星期日。缩宫素和加压素均为9肽，第3位和第7位氨基酸不同。缩宫素使子宫和乳腺平滑肌收缩，具有催产和促使乳腺排乳作用。加压素促进血管平滑肌收缩，升高血压，减少排尿。当前34页，共125页，星期日。

体内许多激素属寡肽或多肽2.多肽类激素促肾上腺皮质激素（ACTH）39肽，活性部位为第4~10位的7肽片段：

Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly。当前35页，共125页，星期日。

脑肽脑啡肽（5肽）具有强烈的镇痛作用（强于吗啡），不上瘾。Met-脑啡肽Tyr-Gly-Gly-Phe-MetLeu-脑啡肽Tyr-Gly-Gly-Phe-Leuβ-内啡肽（31肽）具有较强的吗啡样活性与镇痛作用。3.神经肽(neuropeptide)当前36页，共125页，星期日。三、蛋白质的分类1.按化学组成分类单纯蛋白质结合蛋白质=蛋白质部分+非蛋白部分

2.按分子形状分类球状蛋白质纤维状蛋白质3.按功能分类活性蛋白质非活性蛋白质了解当前37页，共125页，星期日。1.按组成分类

单纯蛋白（按溶解度）

结合蛋白（按辅基）清蛋白球蛋白谷蛋白醇溶蛋白精蛋白组蛋白硬蛋白核蛋白糖蛋白与蛋白聚糖脂蛋白色蛋白磷蛋白当前38页，共125页，星期日。2.按分子形状分类

球状蛋白质纤维状蛋白质当前39页，共125页，星期日。活性蛋白质非活性蛋白质3.按功能分类酶、蛋白质激素、运输和储存的蛋白质、运动蛋白质和受体蛋白质等角蛋白、胶原蛋白等当前40页，共125页，星期日。相互学习，加强合作！当前41页，共125页，星期日。蛋白质的分子结构

第二节当前42页，共125页，星期日。当前43页，共125页，星期日。蛋白质的分子结构包括

一级结构(primarystructure)二级结构(secondarystructure)三级结构(tertiarystructure)四级结构(quaternarystructure)高级结构蛋白质的空间结构涵盖了蛋白质分子中的每一原子在三维空间的相对位置，它们的蛋白质特有性质和功能的结构基础。当前44页，共125页，星期日。定义：在蛋白质分子中，从N-端至C-端氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构主要的化学键：肽键，有的蛋白质还包括二硫键。当前45页，共125页，星期日。一级结构是蛋白质的基本结构，它决定蛋白质空间结构，但不是决定蛋白质空间结构的唯一因素。目录当前46页，共125页，星期日。胰岛素的一级结构各种蛋白质的根本差异在于一级结构的不同当前47页，共125页，星期日。

二、蛋白质的空间结构定义：指蛋白质分子在一级结构的基础上盘曲和折叠构成特定的空间三维结构，称为蛋白质的空间构象。蛋白质构象决定蛋白质的分子形状、理化性质和生物学功能。当前48页，共125页，星期日。（一）蛋白质的二级结构是指多肽链中主链原子的局部空间排布，并不涉及氨基酸残基侧链的构象。定义

主要的化学键：

氢键

1.形成二级结构的基础——肽键平面当前49页，共125页，星期日。肽键平面结构示意图在多肽链中，肽键的C---N健具有部分的双键性质,不能自由旋转，于是肽键上的4个原子和相邻的2个α－碳原子处在一个平面，称肽键平面。当前50页，共125页，星期日。肽键平面两端的a-碳原子的单键可以旋转。因此整个主链骨架的折叠、盘曲都是由此单键旋转形成的。

当前51页，共125页，星期日。当前52页，共125页，星期日。2.蛋白质二级结构的基本形式（1）α-螺旋（2）β-折叠（3）β-转角（4）无规则卷曲当前53页，共125页，星期日。（1）α-螺旋：其特点如下：①多肽链以肽键平面为单位，以α一碳原子为转折，形成右手螺旋样结构；②每3.6个氨基酸残基旋转一周，相当于0.54nm。③上下两层螺旋之间形成CO…HN氢键，起稳定螺旋作用；④氨基酸残基的R基团均伸向螺旋外侧,其形状、大小及电荷影响螺旋的形成。当前54页，共125页，星期日。（1）-螺旋123456789当前55页，共125页，星期日。R侧链基团伸向螺旋的外侧。RRRRRRRRR螺旋的横截面Pro的N上缺少H，不能形成氢键，经常出现在α-螺旋的端头，它改变多肽链的方向并终止螺旋。当前56页，共125页，星期日。2.-折叠当前57页，共125页，星期日。β-折叠层结构其特点是：①肽键平面之间折叠成锯齿状，两平面间夹角为110°。②R基因交错伸向锯齿状结构上下方。③2条肽链或1条肽链内2个肽段间的C==O与N－H形成氢键，使结构稳定；④若两段肽链走向相同，即N-末端都在同一端，称为顺向平行，反之为反向平行。反向平行更为稳定。β-折叠的形式十分多样，正逆平行能相互交替。当前58页，共125页，星期日。β-折叠当前59页，共125页，星期日。（3）β-转角（β-turn）

为了紧紧折叠成紧密的球蛋白，多肽链常常反转方向，成发夹形状。一个氨基酸的羰基氧以氢键结合到相距的第四个氨基酸的氨基氢上。N—1CH—CC2CHN—HO=C3CHNC—4CH—NRRHOHRROHO

β-转角经常出现在连接反平行β-折叠片的端头。当前60页，共125页，星期日。-转角（4）无规则卷曲：指没有确定规律性的松散肽链结构。当前61页，共125页，星期日。无规则卷曲示意图无规则卷曲细胞色素C的三级结构当前62页，共125页，星期日。模体（超二级结构）1.超二级结构指多肽内顺序上相邻的二级结构单位（-螺旋或-折叠或-转角）组合在一起，形成有规则的、在空间上能够辨认的二级结构组合体。2.超二级结构的基本类型：

、X、链接当前63页，共125页，星期日。当前64页，共125页，星期日。当前65页，共125页，星期日。锌指结构：结合锌离子

调控的基因转录当前66页，共125页，星期日。(二）蛋白质的三级结构整条多肽链所有原子（包括主链原子和侧链原子）的空间排布。即多肽链中所有原子在三维空间的排布位置。1.蛋白质的三级结构

由一条多肽链构成的蛋白质，具有三级结构才具有生物学活性。当前67页，共125页，星期日。维持蛋白质构象的作用力：

氢键：

x—H…y

疏水作用力：是指非极性基团即疏水基团为了避开水相而群集在一起的集合力。

范德华力：在物质的聚集状态中，分子与分子之间存在着一种较弱的作用力。

盐键：它是由带相反电荷的两个基团间的静电吸引所形成的。

二硫键：是两个硫原子之间所形成的共价键。当前68页，共125页，星期日。目录当前69页，共125页，星期日。

肌红蛋白(Mb)N端

C端当前70页，共125页，星期日。

是1957年由JohnKendrew用X射线晶体分析法测定的有三维结构的第一个蛋白质。它是典型的球形蛋白质，高度折叠成紧密结构，疏水氨基酸残基大部分埋藏在分子内部，极性残基在表面。肌红蛋白中有8条α-螺旋。由多肽的折叠形成的疏水空隙内是血红素辅基，通过肽链上的His残基与肌红蛋白分子内部相连，它对肌红蛋白的生物活性是必需的（与O2结合）。肌红蛋白当前71页，共125页，星期日。维持蛋白质四级结构稳定的化学键是非共价键，包括氢键、盐键、疏水键等。（三）蛋白质的四级结构2条或2条以上具有独立三级结构的多肽链，通过非共价键结合而形成的空间结构称为蛋白质的四级结构。四级结构中每一条有独立三级结构的多肽链称为亚基。亚基单独存在时一般没有生物学活性。当前72页，共125页，星期日。血红蛋白的四级结构

当前73页，共125页，星期日。Hb是2个a-亚基和2个β-亚基聚合而成的四级结构蛋白质。在一定条件下，这种蛋白质分子可解离成单个亚基，亚基的聚合或解聚对蛋白质的活性具有调节作用。

Hb的每个亚基均结合一个亚铁血红素，每个亚铁血红素上的Fe2+能结合一分子的氧。Hb属结合蛋白质当前74页，共125页，星期日。第三节蛋白质结构与功能的关系

DNA的碱基排列顺序蛋白质多肽链上的氨基酸排列顺序蛋白质的空间构象蛋白质的生物学功能一级结构是基础，空间结构是关键熟悉当前75页，共125页，星期日。一、蛋白质一级结构与功能的关系一级结构不同的蛋白质，尽管它们有着相同的多肽链骨架，但由骨架向外投射的R基团的性质和顺序是不同的，因此，多肽键折叠盘曲形成的空间构象不同，功能也自然不同。相反，一级结构相似的蛋白质，其基本构象及功能也相似。当前76页，共125页，星期日。核糖核酸酶空间构象与功能的关系8M尿素或β-巯基乙醇透析当前77页，共125页，星期日。如不同哺乳类动物来源的胰岛素，都具有A、B两条多肽链，且空间构象、功能相似。研究发现，A链有10个氨基酸残基和B链有12个氨基酸残基为不同胰岛素共有，它们对维持胰岛素空间构象非常重要。其他易变残基一般处于胰岛素“活性部位”以外，对维持活性并不重要。胰岛素一级结构与功能的关系举例说明当前78页，共125页，星期日。一级结构中大多数氨基酸残基及其顺序是维持构象和体现功能所必需。这些氨基酸残基部分直接参与构成蛋白质的活性区，部分处在蛋白质构象的关键位置，只有少数氨基酸残基与功能构象关系不大。当前79页，共125页，星期日。胰岛素当前80页，共125页，星期日。目录无活性原活性100%2%~10%活性当前81页，共125页，星期日。血红蛋白一级结构与功能的关系例：镰刀形红细胞贫血N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSβ肽链HbAβ肽链N-val·his·leu·thr·pro·val

·glu·····C(146)

这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。链接当前82页，共125页，星期日。当前83页，共125页，星期日。二、蛋白质的空间构象与功能的关系（一）肌红蛋白和血红蛋白的结构—血红素当前84页，共125页，星期日。肌红蛋白（Mb）与血红蛋白（Hb）的氧解离曲线（二）血红蛋白的构象变化与运氧功能当前85页，共125页，星期日。（二）血红蛋白的构象变化与运氧功能当前86页，共125页，星期日。未结合O2时，Hb的α1/β1和α2/β2呈对角排列，结构较为紧密，称为紧张态(tensestate,T态)，T态Hb与O2

的亲和力小。随着O2

的结合，4个亚基羧基末端之间的盐键断裂，其二级、三级和四级结构也发生变化，使α1/β1和α2/β2的长轴形成15°的夹角，结构显得相对松弛，称为松弛态(relaxedstate,R态)。

血红蛋白空间结构与功能的关系当前87页，共125页，星期日。当前88页，共125页，星期日。第四节蛋白质的理化性质掌握当前89页，共125页，星期日。蛋白质的理化性质一、蛋白质的两性解离性质二、蛋白质的胶体性质

三、蛋白质的变性与复性四、蛋白质的紫外吸收性质五、蛋白质的呈色反应当前90页，共125页，星期日。一、蛋白质的两性解离性质蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的等电点(pI)当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。当前91页，共125页，星期日。NH3+PPPCOO-

NH3+COO-COOHOH-H+OH-H+蛋白质正离子蛋白质兼性离子蛋白质负离子(pH＜pI)(pH=pI)(pH＞pI)PNH2COOHNH2当前92页，共125页，星期日。蛋白质在其等电点偏酸溶液中(pH＜pI)带正电荷，

在偏碱溶液中(pH＞pI)带负电荷，

在等电点pH时(pH=pI)为两性离子。当前93页，共125页，星期日。各种蛋白质具有特定的pI，这与其分子中所含酸性和碱性基团的数目及解离程度有关。含酸性氨基酸残基多的蛋白质其PI偏酸，（如：酪蛋白、胃蛋白酶）含碱性氨基酸残基多的蛋白质其pI偏碱。（如：组蛋白、鱼精蛋白）人体大多数蛋白质pI在5.0左右，所以在生理条件下（pH7.4）它们以负离子形式存在。当前94页，共125页，星期日。电泳:带电粒子在电场中向相反电极移动的现象称电泳。电泳的方向取决于带电粒子带电荷的性质。电泳的速度取决于带电粒子电荷的多少，分子质量的大小等。带电荷量大，分子质量小者，泳动快，反之泳动慢。当前95页，共125页，星期日。思考题：在以下混合蛋白质溶液中，各种蛋白质的PI分别为4.3、5.0、5.4、6.5、7.4，电泳时欲使其都泳向正极，缓冲液体的pH应该是：ApH4.1BpH5.2CpH6.0DpH7.4EpH8.1E当前96页，共125页，星期日。醋酸纤维薄膜电泳可将血清蛋白质分为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等5种成分临床用以帮助疾病的诊断和观察病程。当前97页，共125页，星期日。染色漂洗样本结果当前98页，共125页，星期日。二、蛋白质的胶体性质

蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面的同种电荷颗粒表面的水化膜当前99页，共125页，星期日。+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉当前100页，共125页，星期日。透析：用半透膜来分离纯化蛋白质的方法。当前101页，共125页，星期日。三、蛋白质的变性与复性

*蛋白质的变性(denaturation)蛋白质在某些理化因素的作用下空间构象受到破坏，从而改变其理化性质，并失去其生物活性，称为蛋白质的变性。当前102页，共125页，星期日。变性的实质——

次级键断裂，空间结构被破坏，但一级结构并未被破坏。蛋白质变性的主要特征：生物学活性丧失；溶解度降低；黏度增加；易被蛋白酶水解。变性的因素：如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等。

当前103页，共125页，星期日。蛋白质变性在临床上应用消毒灭菌：高温、高压、酒精、紫外线抢救误服重金属盐患者：可口服牛奶或生蛋清以减缓重金属离子的吸收保存生物制品：活性蛋白质制剂如酶、疫苗等放在适宜的低温下（4℃）保存，以防止其变性失活。当前104页，共125页，星期日。若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation)。当前105页，共125页，星期日。

天然状态，有催化活性

尿素、β-巯基乙醇

去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态，无活性当前106页，共125页，星期日。蛋白质的沉淀蛋白质分子相互聚集从溶液中析出的现象称为蛋白质的沉淀。方法：（一）盐析法（二）有机溶剂沉淀法（三）重金属盐沉淀法（四）生物碱试剂沉淀法补充：当前107页，共125页，星期日。（一）

盐析

在蛋白质的水溶液中，加入大量高浓度的强电解质盐如硫酸铵、氯化钠、硫酸钠等，可破坏蛋质分子表面的水化层，中和它们的电荷，因而使蛋白质沉淀析出，这种现象称为盐析。盐析的机理：

破坏蛋白质的水化膜，中和表面的净电荷。盐析法是分离、纯化蛋白质最常用的方法，该方法不会使蛋白质产生变性。当前108页，共125页，星期日。

各种蛋白质的亲水性及荷电性均有差别，因此不同蛋白质所需中性盐浓度也有不同，只要调节中性盐浓度，就可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分散沉淀析出，这种方法称为分段盐析。

血浆清蛋白在（）硫酸铵溶液中沉淀。

球蛋白在（）硫酸铵溶液中沉淀。

饱和

半饱和当前109页，共125页，星期日。（二）

有机溶剂沉淀法：在蛋白质溶液中，加入能与水互溶的有机溶剂如乙醇、丙酮等，蛋白质产生沉淀。有机溶剂沉淀法的机理：

破坏蛋白质的水化膜。注意：有机溶液沉淀蛋白质通常在低温条件下进行，否则有机溶剂与水互溶产生的溶解热会使蛋白质产生变性。当前110页，共125页，星期日。（三）重金属盐沉淀(条件：pH稍大于pI为宜)

当pH稍大于pI时，蛋白质颗粒带负电荷这样就容易与重金属离子（Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+)结合成不溶性盐而沉淀。此法蛋白质常变性。

重金属沉淀法的机理：重金属盐加入之后，与带负电的羧基结合。当前111页，共125页，星期日。（四）生物碱试剂沉淀法（条件：pH稍小于pI）生物碱试剂一般为弱酸性物质，如单宁酸、苦味酸、三氯乙酸等。

生物碱试剂沉淀蛋白质的机理：在酸性条件下，蛋白质带正电荷，可以与生物碱试剂的酸根离子结合而产生沉淀。此法蛋白质常变性。当前112页，共125页，星期日。四、蛋白质的紫外吸收性质由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈关系，因此可作蛋白质定量测定。当前113页，共125页，星期日。五、蛋白质的呈色反应

2.茚三酮反应

1.双缩脲反应

3.Folin-酚试剂反应

当前114页，共125页，星期日。六、蛋白质的呈色反应1.双缩脲反应(biuretreaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应。双缩脲反应可用来检测：1.蛋白质和多肽的定性、定量测定。2.蛋白质水解程度。当前115页，共125页，星期日。

双缩尿在碱性溶液中能与硫酸铜发生反应，产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。(碱性溶液)Cu2+红紫色络合物180°C双缩脲反应-蛋白质的定性和定量当前116页，共125页，星期日。六、蛋白质的呈色反应2.茚三酮反应

蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。3.Folin-酚试剂反应

当前117页，共125页，星期日。N