免疫学检测技术基本原理课件

2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院1免疫诊断抗原或抗体的检测免疫细胞的检测免疫检测方法的应用2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院1免疫诊断2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院2抗原抗体反应的特点特异性可见性可逆性2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院2抗原抗体2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院3影响抗原抗体反应的其它因素电解质酸碱度温度2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院3影响抗原2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院4抗原-抗体反应的基本检测方法根据抗原的性质、结合反应的现象、参与反应的成分因素，可将抗原抗体反应分为凝集反应(agglutination)沉淀反应(precipitation)

补体参与的反应采用标记物的抗原抗体反应等2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院4抗原-抗2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院5凝集反应2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院5凝集反应2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院6沉淀反应可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，此类反应称为沉淀反应；多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散。即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇时形成可见的白色沉淀2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院6沉淀反应2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院7单向免疫扩散

(singleimmunodiffusion)2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院7单向免疫2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院8双向免疫扩散

(doubleimmunodiffusion)2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院8双向免疫2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院9免疫电泳(immunoelectrophoresis)2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院9免疫电泳2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院10对流免疫电泳2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院10对流免2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院11免疫比浊(immunonephelometry)在一定量抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间形成免疫复合物，液体混浊。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多则浊度越高，可绘制标准曲线并依据反应液体的浊度推算样品中抗原含量。2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院11免疫比2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院12补体参与的反应应用抗体与红细胞表面的抗原结合，激活反应体系中的补体成份，能导致红细胞溶解，则可根据溶血现象判定试验结果。如溶血空斑试验、HLA的血清学分型等2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院12补体参2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院13采用标记物的抗原抗体反应免疫标记技术指用荧光素、酶或放射性核素、胶体金等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变后者的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院13采用标2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院14

免疫荧光法(immunofluorescence,IF)2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院14免疫2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院15酶免疫测定(enzymeimmunoassay,EIA)将抗原-抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后的显色反应判定结果。可用目测定性，也可用酶标测定仪测定光密度（OD）值以反映抗原含量，灵敏度可达每毫升ng甚至pg水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)、碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)等。2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院15酶免疫2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院16酶联免疫吸附试验

(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院16酶联免2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院17其它常用标记方法放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA)

化学发光免疫分析：将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体进行反应，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子，用自动发光分析仪接收光信号，测定光子产量，以反映待检样品中抗体或抗原含量。免疫胶体金法2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院17其它常A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧贴其上为硝酸纤维素膜条A\B分别粘贴吸水材料，免疫金复合物干片粘贴在近下端C处，紧2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院19免疫印迹法(Westernblot)将凝胶电泳与固相免疫结合，将通过电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再借助酶免疫、放射免疫等技术进行测定。第一步，SDS第二步，将通过电泳而分离的蛋白质转印至硝酸纤维膜上（电转印法）第三步，类似ELISA2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院19免疫印CEMSDSAdditionofSDSEMCProteinbecomesrod-shapedwithuniformchargedistributionCEMSDS-PA2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院21免疫细胞的检测免疫细胞的鉴定分离免疫细胞功能的测定2023/7/29电子科技大学生命科学与技术学院21免疫细流式细胞术流式细胞术(flowcytometry，FCM)是借助荧光活化细胞分类仪(fluorescence-activatedcellsorter,FACS)对细胞进行快速、准确鉴定和分类的技术。流式细胞仪集光学、流体力学、电子学和计算机技术于一体，可对细胞作多参数定量测定和综合分析。样品经多种荧光素标记的抗体染色，因荧光素发射光谱的波长不同，信号能同时被接收，故能同时分析细胞表面多个分子的表达及其水平。该法可检测T细胞、B细胞、NK细胞、单核/巨噬细胞、树突状细胞等及其比率，以及CD4/CD8阳性T细胞比值等。此外，借助光电效应，微滴通过电场时出现不同偏向，从而可分类收集所需细胞。流式细胞术流式细胞术(flowcytometry，FCM)2023/7/30电子科技大学生命科学与技术学院23免疫磁珠分离技术将特异性抗体与磁性微粒交联，称为免疫磁珠（immunemagneticbead,IMB）。IMB可与表达相应膜抗原的细胞结合，应用强磁场分离IMB及其所吸附的细胞，从而对特定的细胞进行分选，此为直接分离法。亦可用二抗包被磁性微珠，与任何已结合鼠源性一