培养基的灵敏度检测SOP

ThisSOPisstrictlyconfidential.AnyuseandcopyunauthorizedbySLPharmaisforbidden.仅限北京世桥生物制药有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。起草人起草日期颁发部门质量管理部审核人审核日期批准人批准日期生效日期分发清单研发部[]质量管理部[]综合管理部[]生产管理部[]市场销售部[]财务部[]1.目的为保证无菌试验更加准确可靠。2.范围车间环境检测和血清原料、成品无菌检测用培养基的灵敏度测定。3.职责3.1.质量管理部：负责本规程的起草。3.2.质量管理部检验人员：负责本规程的操作。3.3.总经理：负责本规程的审批。4.定义无5.引用标准《中华人民共和国药典》四部2015版。6.材料6.1.材料准备：6.1.1.标准阳性菌种：购置药品检定所菌种保藏中心冷冻干燥菌株，传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为0代）包括：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽胞杆菌[CMCC（B）63501]、生胞梭菌[CMCC（B）64941]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉菌[CMCC（F）98003]。6.1.2硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基。6.1.3pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9﹪氯化钠溶液6.2仪器设备20～25℃培养箱，30～35℃培养箱6.3.器械、用具6.3.1.灭菌2ml移液管6.3.2灭菌中试管7.流程图无8.内容8.1.菌液制备：8.1.1接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中。8.1.2接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；8.1.3接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时8.1.4上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9﹪氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100CFU（菌落形成单位）的菌悬液。8.1.5接种黑曲霉菌新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上20～25℃培养5～7天。加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子悬液。8.1.6菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存于2～8℃可在24小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期使用。8.2.培养基接种：8.2.1取每管装量12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100CFU的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种，作为空白对照，置30～35℃培养3天；8.2.2取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100CFU的枯草芽胞杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另一支不接种，作为空白对照，置20～25℃培养5天。逐日观察结果。8.3.结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。9.注意事项9.1．各类培养基必须在效期内。9.2每次制备的无菌检查用培