细菌的生理生化鉴定方法

方法细菌的生理生化鉴定１、形态学观看承受插片法、埋片法,对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观看。用革兰氏染色进展油镜观看。①革兰氏染色红复染液等。试验步骤：(1)涂片：取活泼生长期菌种按常规方法涂片〔不易过厚〕、枯燥和固定。1～２min，用水冲洗至流出水无色。水洗至流出水无色。液无色时马上用水洗去乙醇。复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，用吸水纸吸去残水晾干。镜检：用油镜观看。②芽孢染色制片：按常规方法涂片、枯燥及固定。5%住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min，加热时应留意补充染液，切勿让涂片枯槁。脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色。复染：用0.5%番红水溶液复染2min。水洗：用缓流自来水冲洗至无色。镜检：晾干载玻片后油镜镜检。③鞭毛染色〔硝酸银染色法〕20min，然后95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能猛烈震荡。用吸水纸吸取多余的菌悬液，自然枯燥。3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴冲洗。自然枯燥后用油镜观看。菌体呈深褐色，鞭毛显褐色。镜检：用油镜镜检观看。、B液需现用现配〔4h内效果最正确，1d内可用：。2ｇ，100mL10mL回滴用，往90mL10mL回滴液回滴至消灭薄雾。２、糖类分解试验1.0ｇ；NaCl0.5ｇ；0.2%1.2mL；葡萄糖1.0ｇ；100mL。〔如乳酸、醋酸、丙酸等〕和气体〔如氨气、甲烷、二氧化碳等。当发酵产酸是，指示剂可有紫色pH6.〕转变为黄色pH5.。气体的产生可由倒置的小管中有无气泡来证明。可留一个空白，作为比照。在接种后要轻摇试管，防止倒置的小试管进入气泡。372～3d中有无气泡。３、V-P试验1.5g；K2HPO41.5g300mL；pH：7.4气中的氧氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基生成红色化合物，称V-P反响。2～7d2%氯化铁溶液。数小时后，培育基外表的下层消灭红色者，为阳性。４、甲基红试验配方：与V-P试验的配方一样可进一步分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培育基pH将至4.5以下，当参加生的酸进一步转化为其它物质〔如醇、酮、醚、气体和水等，则培育基的酸度pH6.2以上，故参加甲基红指示剂呈黄色，为阴性。试验步骤：接种细菌于培育基，在37℃培育2～7d后，于培育物中参加几〔0.1ｇ300mL95%500如呈红色，表示阳性。５、柠檬酸盐利用试验5ｇ；NH4H2PO4 1ｇ；琼脂20ｇ；1％溴麝香草酚蓝酒精溶液10mL；蒸馏水1000mL。pH1%6.06.5～7.07.6时呈蓝色。的细菌不生长，培育基不变色。６、硝酸盐复原试验0.2ｇ；蛋白胨5ｇ；1000mL；pH：7.4。甲液：４-苯胺磺酸〔对氨基苯磺酸〕0.4ｇ；5mol/L50mL。乙液：α-萘胺0.25ｇ；5mol/L冰醋酸50mL。４-苯胺磺酸α-萘胺0.1mL，再加乙试剂数滴，如消灭红色，表示阳性。可再参加锌粉少许，可使硝酸盐复原为亚硝酸盐而呈现红色。可再参加锌粉少许，可使硝酸盐复原为亚硝酸盐而呈现红色。７、淀粉水解试验配方：牛肉膏0.5ｇ；蛋白胨1ｇ；氯化钠0.5ｇ；可溶性淀粉0.2ｇ；蒸馏水100mL蒸馏水100mL；琼脂2ｇ；pH：7.0～7.2。根本原理：有些细菌具有合成淀粉酶的力量，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色。1～2d，生长后取出，会呈深蓝色。８、吲哚〔靛基质〕试验1ｇ；NaCl0.5ｇ；1000mL；pH：7.6。0.5g；乙醇〔95%〕47.5mL；浓10mL。根本原理：有些细菌可以产生色氨酸酶，分解色氨酸，产生吲哚和丙酮酸。氨酸产生吲哚来鉴定菌种。氨酸产生吲哚来鉴定菌种。371～2d。2～3mL，摇匀，静置片刻后，沿管壁参加吲哚试９、接触酶试验配方：牛肉膏蛋白胨培育基而形成分子氧消灭气泡。1ml3%H2O2倾注于生长物〔菌落或菌苔〕上，有气泡〔2〕发生者为阳性。也可于清洁小试管中加少量30，再用清洁无菌的细玻棒〔或火焰封口的毛细管或镍铬做成的接种环〕醮细菌少许，插入H2O2H2O2有气泡者为阳性。确定菌种类型参考《伯杰氏细菌鉴定手册》BuchananGibbons，1984)和《常见细菌系统鉴定手册》(东秀珠和蔡妙英，1999)确定菌种类型。结果菌株的生理生化鉴定菌落的特征分析通过显微镜观看菌落形态特征，结果见表3。3拮抗细菌K1、K2与K3菌株K1K2K3外形椭圆状圆形杆状革兰氏染色阴性阴性阴性芽孢无无无菌落形态椭圆形圆形梅花形菌落颜色乳白浅黄棕黄菌落隆起度凸起凸起凸起菌落边缘外形光滑光滑粗糙菌落外表状态光滑光滑光滑菌落光泽菌落干湿程度菌落透亮程度

有光泽枯燥不透亮

有光泽潮湿不透亮

无光泽枯燥不透亮菌株的生理生化鉴定K1 K2K2 K1 K2 K3糖类分解试验 V-P试验 甲基红试验K1 K2 K3K1 K2 K3硝酸盐复原试验 淀粉水解试验K1 K2 K3 K1 K2 K3吲哚〔靛基质〕试验 柠檬酸盐利用试验K1 K2 K3接触酶试验3拮抗细菌K1、K2K3表４细菌的生理生化鉴定结果菌种K1K2K3糖类分解试验＋－＋V-P试验＋＋＋甲基