病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件

第一节病毒感染的检查方法第一节病毒感染的检查方法1病毒感染的检查

一般原则：特异、敏感、快速、简便方法1．根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。2．根据可疑病毒的生物学性状，机体免疫应答和临床过程以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。

病毒感染的检查一般原则：特异、敏感、快速、简便2病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒病毒抗原病毒核酸病毒酶类：如逆转录酶电镜直接观察光镜检查包含体分离培养病毒感染的检查检测内容查病毒查特异性抗体病毒颗粒电镜3一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：

1.标本用“双抗”或两性霉素B处理

2.低温保存，尽快送检

3.血清学诊断采双份血清一、标本的采集与送检原则基本与细菌相似，但应注意：4二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种鸡胚培养细胞培养指标阳性指标阴性

病毒鉴定

盲传2～3代指标阴性病毒阴性二、病毒的分离与鉴定一般程序：标本无菌处理动物接种指标阳性5（一）病毒的分离培养

1.细胞培养

单层细胞培养

分类悬浮细胞培养原代细胞细胞种类二倍体细胞传代细胞系（一）病毒的分离培养6病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞病毒的细胞培养细胞培养瓶单层细胞7微生物及其代谢产物抗原变异病毒基因的鉴定微生物及其代谢产物干扰素和干扰素诱生剂动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等（三）病毒感染的血清学诊断核酸杂交技术血清丙种球蛋白基因产物（如乙肝疫苗）免疫细胞羊膜腔（amnioticcavity）可激发HI，安全、方便；(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）第三节病毒感染的治疗除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。(3)凝胶免疫扩散试验细胞种类二倍体细胞优点：易管理，不带微生物，成本较低优点：易管理，不带微生物，成本较低病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）微生物及其代谢产物8病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件9对一般病毒检测意义不大病毒性感染的快速诊断方法有哪些？二、人工被动免疫常用生物制品③为证实所分离的病毒的临床意义治疗性疫苗动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等④进行血清流行病学调查等IFN-α、β、γEBV早期抗原抗体②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。1．根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。卵黄囊（yolksac）病毒＋中和抗体病毒失去感染性EBV早期抗原抗体接种部位流感病毒、腮腺炎病毒微生物及其代谢产物2.鸡胚培养

采用孵化9～14天的鸡胚

绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）

嗜神经病毒

对一般病毒检测意义不大2.鸡胚培养10病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件112、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低12病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件133.动物接种

应用：尚无敏感细胞的病毒培养

动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

优点：结果易观察，可建立动物模型缺点：有饲养条件要求，费用高，动物体内常带有潜伏病毒3.动物接种141．病毒增殖鉴定

(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,

CPE）

①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；

②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鉴定

1．病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定15病原微生物病毒感染的检查方法与防治原则课件162.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒），对一般病毒检测意义不大2.病毒形态学鉴定电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限173.病毒血清学鉴定

鉴定病毒种、型、亚型

(1)血凝抑制试验—正粘病毒型与亚型鉴定

病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）

病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集

（血凝抑制试验）

3.病毒血清学鉴定鉴定病毒种、型、亚型18(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）——多种病毒鉴定(3)凝胶免疫扩散试验

——多种病毒鉴定(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）194.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定核酸扩增核酸杂交基因芯片基因测序4.病毒分子生物学鉴定抗原变异病毒基因的鉴定20（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）2.蚀斑形成试验

3.50％组织细胞感染量

感染性病毒量（三）病毒数量与感染性测定1.血凝试验：病毒总量（活病毒＋死21卵黄囊（yolksac）(3)凝胶免疫扩散试验如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。接种部位流感病毒、腮腺炎病毒生物制品动物免疫血清可诊断急性感染如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。嗜神经病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒可诊断急性感染将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。四、病毒感染的快速诊断缺点是免疫原性弱、只激发B细胞引起HI，因为抗病毒依赖CMI）。采用孵化9～14天的鸡胚除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。羊膜腔（amnioticcavity）优点：易管理，不带微生物，成本较低采用孵化9～14天的鸡胚③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。特点：特异性低，抗体出现早，消失快(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定理化性状的检测形态学鉴定血清学鉴定基因测序和生物对比卵黄囊（yolksac）(四)新病毒的鉴定核酸类型的测定22四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果病毒颗粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗体检测（IgM）四、病毒感染的快速诊断数小时内出结果23（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查普通光学显微镜检查

包涵体（一）形态学检查电镜和免疫电镜检查24（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测免疫标记技术2.病毒核酸检测核酸扩增技术核酸杂交技术基因芯片技术

基因测序（二）病毒成分检测1.病毒蛋白抗原检测25（三）病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等（三）病毒感染的血清学诊断应用：261.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和抗体

病毒失去感染性

特点：特异性高，抗体维持时间长应用：人群免疫情况的调查临床诊断少用1.中和试验（neutralizingtest）病毒＋中和272.补体结合试验

用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血清中相应的补体抗体

特点：特异性低，抗体出现早，消失快

应用：近期感染指标。3.血凝抑制试验

流感疫苗接种后效果观察及流感流行病学调查2.补体结合试验用已知病毒可溶性补体抗原检测病人28早期抗体检测（IgM）特点：特异性高，抗体维持时间长可激发HI，安全、方便；二、人工被动免疫常用生物制品对一般病毒检测意义不大可激发HI，安全、方便；①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；分离培养病毒的方法有那些?除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；基因芯片技术二、人工被动免疫常用生物制品基因整合基因产物疫苗中草药血凝试验：病毒总量（活病毒＋死病毒）四、病毒感染的快速诊断病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）嗜神经病毒4、早期抗体检测可诊断急性感染

特异性IgM抗体：孕妇感染风疹病毒

EBV早期抗原抗体

EAV核心抗原抗体

早期抗原的抗体

EAV衣壳抗原抗体早期抗体检测（IgM）4、早期抗体检测可诊断急29(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）细胞因子IL-2、IL-6、IL-12葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。临床诊断少用尿囊腔（allantoiccavity）流感病毒的初次分离①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；特点：特异性低，抗体出现早，消失快基因产物（如乙肝疫苗）除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。多由减毒病原菌制成；基因芯片技术如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。二、人工被动免疫常用生物制品蛋白质抗原基因减毒的病毒或细菌第一节病毒感染的检查方法悬浮细胞培养1．根据流行病学和临床特点初步判定可能感染的病毒。②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒第二节病毒感染的特异性预防微生物及其代谢产物生物制品动物免疫血清

免疫细胞细胞因子

防治和诊断感染性疾病(2)免疫标记法（FIA、EIA、RIA）第二节病毒感染的30疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破、伤寒、流脑、乙脑、流感、钩端螺旋体等。可激发HI，安全、方便；但抗原性改变，效果差，需多次注射；反应重）。

活疫苗（livingvaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰质炎和麻疹疫苗等。可激发HI、CMI；多由减毒病原菌制成；偶可发生回复突变，毒力回升，接种后发病。联合疫苗在试用中。

基因工程疫苗：目的基因原核或真核细胞

基因产物（如乙肝疫苗）

导入

人工培养一、人工主动免疫常用生物制品疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破31重组载体疫苗：蛋白质抗原基因减毒的病毒或细菌基因整合基因产物疫苗合成疫苗：

根据病原体抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作为疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。

缺点是免疫原性弱、只激发B细胞引起HI，因为抗病毒依赖CMI）。转入

培养

表达重组载体疫苗：转入培养表达32亚单位疫苗：

除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。如脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。DNA疫苗：

即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原，诱导产生细胞毒杀伤功能的T细胞，有效预防病毒、胞内寄生菌及寄生虫引起的传染。亚单位疫苗：33转基因植物疫苗：

将编码某一病原体保护性抗原的基因转入植物并在植物中表达，人们食用植物时，就完成了预防接种。如食用西红柿，获得乙肝疫苗的接种。治疗疫苗：

葡萄球菌的自身疫苗治疗葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治疗乙肝带毒者。可能的机制是前者是脱敏作用，后者是打破免疫耐受。

类毒素：

细菌外毒素+0.3%~0.4%甲醛类毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗.转基因植物疫苗：34绒毛尿囊膜（allantocherion）病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集如脑膜炎球菌和流感杆菌表面的特异性多糖+吸附剂制成疫苗（不含类脂、无毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，这种疫苗防止减毒活疫苗回复突变和肿瘤病毒潜在的致癌作用。核酶（ribozyme）对一般病毒检测意义不大①采取标本分离病毒为时已晚绒毛尿囊膜（allantocherion）EAV核心抗原抗体(1)血凝抑制试验—正粘病毒型与亚型鉴定多由减毒病原菌制成；绒毛尿囊膜（allantocherion）临床诊断少用嗜神经病毒卵黄囊（yolksac）②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；优点：结果易观察，可建立动物模型痘苗病毒、人类疱疹病毒接种部位流感病毒、腮腺炎病毒②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒二、人工被动免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙种球蛋白

细胞免疫制剂

IFN-α、β、γ细胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的杀伤细胞

——LAK细胞

绒毛尿囊膜（allantocherion）二、人工被动免疫常35第三节病毒感染的治疗

核苷类药物

非核苷类反转录酶抑制剂蛋白酶抑制剂其他抗病毒药物

干扰素和干扰素诱生剂

中草药

基因治疗剂

治疗性疫苗

抗病化学制剂反义寡核苷酸干扰RNA核酶（ribozyme）

第三节病毒感染的治疗36思考题1.分离培养病毒的方法有那些?2.病毒性感染的快速诊断方法有哪些？3.预防病毒性感染有哪些人工自动免疫制剂？4.诊断病毒的核酸技术有哪些？思考题1.分离培养病毒的方法有那些?37Bye~Bye~382.鸡胚培养

采用孵化9～14天的鸡胚

绒毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人类疱疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接种部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分离卵黄囊（yolksac）

嗜神经病毒

2.鸡胚培养392、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低缺点：操作程序复杂2、鸡胚培养优点：易管理，不带微生物，成本较低401．病毒增殖鉴定

(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,

CPE）

①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）；

②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鉴定

1．病毒增殖鉴定（二）病毒的鉴定413.病毒血清学鉴定

鉴定病毒种、型、亚型

(1)血凝抑制试验—正粘病毒型与亚型鉴定

病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验）

病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集

（血凝抑制试验）

3.病毒血清学鉴定鉴定病毒种、型、亚型42（三）病毒感染的血清学诊断应用：①采取标本分离病毒为时已晚②目前尚无分离此病毒的方法或难以分离的病毒③为证实所分离的病毒的临床意义④进行血清流行病学调查等（三）病毒感染的血清学诊断应用：43缺点：有饲养条件要求，费用高，动物接种部位流感病毒、腮腺炎病毒早期抗体检测（IgM）四、病毒感染的快速诊断(1)血凝抑制试验—正粘病毒型与亚型鉴定除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。第一节病毒感染的检查方法悬浮细胞培养除去病原体的核酸，提取其表面抗原制备的疫苗。细胞因子IL-2、IL-6、IL-12EAV衣壳抗原抗体(1)血凝抑制试验—正粘病毒型与亚型鉴定二、人工被动免疫常用生物制品（三）病毒数量与感染性测定绒毛尿囊膜（allantocherion）一般原则：特异、敏感、快速、简便(1)细胞病变效应（cytopathiceffect,CPE）③为证实所分离的病毒的临床意义应用：近期感染指标。绒毛尿囊膜（allant