残留农药检测方法免疫分析法课件

②抗原性（antigenicity)，指与抗体反应的性质，这种结合反应具有特异性。抗原的这两种特性是不同的，具有免疫原性的物质必然有抗原性，反之则不一定成立。具有上述两种特性的物质称为完全抗原，只具有抗原性的物质称为半抗原，它能与抗体结合但不能诱导机体产生免疫应答.②抗原性（antigenicity)，指与抗体反应的12.抗体（antibody,Ab)机体受抗原刺激后，在体液中出现一种能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，因其具有免疫活性，习惯上称为免疫球蛋白.

2.抗体（antibody,Ab)24.抗原抗体反应抗原与抗体相互作用是免疫学的基础，二者通过大量非共价键连接，包括静电力、氢键、疏水作用和范德华力等。抗原和抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应。4.抗原抗体反应35.免疫分析免疫分析方法是研究免疫学的工具。免疫分析是基于抗原抗体之间的特异性相互作用从而实现对抗原、抗体或相关物质进行分析检测的方法。免疫反应的高选择性、高亲和性和高灵敏性为免疫分析的可靠和准确提供了保证。5.免疫分析4从本质上讲，几乎所有的免疫分析都是基于识别位点的占据率的测定，根据这种反应性质可分为竞争免疫分析和非竞争免疫分析。从本质上讲，几乎所有的免疫分析都是基于识别位点的占据率的测定5二、酶联免疫吸附分析法1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。

ELISA现在已成为目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术(immunoenzymatictechniques)的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。二、酶联免疫吸附分析法1971年瑞典学者Engvail和Pe6酶联免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗体反应的高灵敏性和强特异性于一体，表现出简单、快速、灵敏和选择性高等优势，在20世纪80年代得到了快速发展，尤其在农药残留测定方面表现最为活跃。采用EIJSA法不仅可以定性，而且可以定量，使用多孔滴定板，一次可进行大批量样品的测定。酶联免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗体反应的高灵敏性7用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；②酶标记的抗原或抗体（标记物）酶联免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗体反应的高灵敏性和强特异性于一体，表现出简单、快速、灵敏和选择性高等优势，在20世纪80年代得到了快速发展，尤其在农药残留测定方面表现最为活跃。4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐ELISA方法的建立包括待测农药、滴定板和酶的选择、半抗原合成、人工抗原合成、抗体制备和样品前处理方法及质量控制等。4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐ELISA用于农药残留的检测三、ELISA应用实例ELISA方法的建立包括待测农药、滴定板和酶的选择、半抗原合成、人工抗原合成、抗体制备和样品前处理方法及质量控制等。用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；抗原与抗体相互作用是免疫学的基础，二者通过大量非共价键连接，包括静电力、氢键、疏水作用和范德华力等。甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、③酶作用的底物（显色剂）抗原和抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应。已商品化的筛选农药残留的EIASA试剂盒种类很多，不仅能用于各种食品和多种环境样品中的杀虫剂、杀菌剂、除草剂分析，而且也能检测多种环境污染物，如多氯联苯、多环芳烃，以及黄曲霉素等多种天然毒素。已商品化的筛选农药残留的EIASA试剂盒种类很多，不仅能用于各种食品和多种环境样品中的杀虫剂、杀菌剂、除草剂分析，而且也能检测多种环境污染物，如多氯联苯、多环芳烃，以及黄曲霉素等多种天然毒素。ELISA一次只能检测单一农药或结构近似的少数几种农药，不能解决农药多残留分析问题。而且抗体制备难度较大。用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；已商品化的筛8目前抗体数量还较少；分析会受到特异性或非特异性的干扰；如果在不能肯定试样中农药品种的情况下，检测具有一定的盲目性；此外有可能出现假阳性或假阴性现象等等。随着技术的日趋成熟，ELISA在农药残留速测中的应用会得到新的发展。目前抗体数量还较少；分析会受到特异性或非特异性的干扰；如果在91.基本原理将抗原或抗体固定于合适的载体上，并保持其生物活性．使抗原或抗体与某种酶连接．这种酶标抗原或抗体同时其有免疫活性和酶的活性；待测样品和酶标抗原或抗体与包被的抗原或抗体经过一系列反应；用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；加入酶反应的底物，复合物上的酶催化底物使其水解，氧化或还原成有色产物，一定条件下，产物的色泽与待测物的含量直接相关，根据颜色反应的深浅对待测物进行定性或定量分析。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。1.基本原理10底物显色定性或定量的分析原理包被反应加入待测抗体或抗原和酶标抗原或抗体洗涤使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的分离1234底物显色原理包被反应洗涤123411在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）在这种测定方法中有3种必要的试剂：12

测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活13其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。

其方法简单，方便讯速，特异性强。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。14

酶结合物是酶与抗体或抗原、半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物，将得到不同的颜色反应.酶结合物是酶与抗体或抗原、半抗原在交联剂作用下联结的产15酶底物显色反应

测定波长

辣根过氧化物酶邻苯二胺

四甲替联苯胺

氨基水杨酸

邻联苯甲胺

2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐

橘红色

黄色

棕色

兰色

蓝绿色492460449

425

642

碱性磷酸酯酶

4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐黄色

红色400

500葡萄糖氧化酶

ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰黄色

深蓝色405420β-Ｄ－半乳糖苷酶

甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)荧光

黄色

360,450

420

酶底物显色反应测定波长辣根过氧化物酶邻苯二胺

四甲16残留农药检测方法免疫分析法课件17三、ELISA应用实例测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。西维因（Carbaryl）、已商品化的筛选农药残留的EIASA试剂盒种类很多，不仅能用于各种食品和多种环境样品中的杀虫剂、杀菌剂、除草剂分析，而且也能检测多种环境污染物，如多氯联苯、多环芳烃，以及黄曲霉素等多种天然毒素。1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。②抗原性（antigenicity)，指与抗体反应的性质，这种结合反应具有特异性。在这种测定方法中有3种必要的试剂：ELISA用于农药残留的检测已商品化的筛选农药残留的EIASA试剂盒种类很多，不仅能用于各种食品和多种环境样品中的杀虫剂、杀菌剂、除草剂分析，而且也能检测多种环境污染物，如多氯联苯、多环芳烃，以及黄曲霉素等多种天然毒素。抗原与抗体相互作用是免疫学的基础，二者通过大量非共价键连接，包括静电力、氢键、疏水作用和范德华力等。饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）测定的对象可以是抗体也可以是抗原。抗原和抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应。ELISA用于农药残留的检测三、ELISA应用实例18残留农药检测方法免疫分析法课件19具有上述两种特性的物质称为完全抗原，只具有抗原性的物质称为半抗原，它能与抗体结合但不能诱导机体产生免疫应答.4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、加入酶反应的底物，复合物上的酶催化底物使其水解，氧化或还原成有色产物，一定条件下，产物的色泽与待测物的含量直接相关，根据颜色反应的深浅对待测物进行定性或定量分析。用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)④阴性和阳性对照品（定性测定），参考标准品和控制血清（定量测定）；酶联免疫吸附分析法（ELISA）集抗原抗体反应的高灵敏性和强特异性于一体，表现出简单、快速、灵敏和选择性高等优势，在20世纪80年代得到了快速发展，尤其在农药残留测定方面表现最为活跃。ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）饲料中盐酸克伦特罗的测定分析会受到特异性或非特异性的干扰；ELISA在饲料安全检测中的应用1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。ELISA用于农药残留的检测3.ELISA方法的建立

ELISA方法的建立包括待测农药、滴定板和酶的选择、半抗原合成、人工抗原合成、抗体制备和样品前处理方法及质量控制等。具有上述两种特性的物质称为完全抗原，只具有抗原性的物质称为半20残留农药检测方法免疫分析法课件21三、ELISA应用实例

饲料中盐酸克伦特罗的测定饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）ELISA在饲料安全检测中的应用三、ELISA应用实例饲料中盐酸克伦特罗的测定ELISA22

甲胺磷残留分析甲基对硫磷残留分析呋喃丹残留分析ELISA用于农药残留的检测甲胺磷残留分析ELISA用于农药残留的检测23

主要有除草剂与杀虫剂两大类例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌丹（Captan）等。农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类农药的检测：24三、ELISA应用实例甲基对硫磷残留分析抗原和抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应。⑤结合物及标本的稀释液；免疫分析是基于抗原抗体之间的特异性相互作用从而实现对抗原、抗体或相关物质进行分析检测的方法。测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。具有上述两种特性的物质称为完全抗原，只具有抗原性的物质称为半抗原，它能与抗体结合但不能诱导机体产生免疫应答.如果在不能肯定试样中农药品种的情况下，检测具有一定的盲目性；饲料中盐酸克伦特罗的测定饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰磺胺二甲嘧啶及磺胺二甲氧嘧啶检测试剂盒；饲料中盐酸克伦特罗的测定加入酶反应的底物，复合物上的酶催化底物使其水解，氧化或还原成有色产物，一定条件下，产物的色泽与待测物的含量直接相关，根据颜色反应的深浅对待测物进行定性或定量分析。ELISA用于农药残留的检测快速ELISA试剂盒ELISA试剂盒目前在食品检测、水产品检测、动物检疫检测和农药残留检测等方面已得到了广泛的应用。它具有快速、灵敏度高、测定步骤简便、成本低、操作安全等特点，完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：①包被抗原或抗体的固相载体；②酶标抗原或抗体；③酶的底物；④阴性和阳性对照品（定性测定），参考标准品和控制血清（定量测定）；⑤结合物及标本的稀释液；⑥洗涤液；⑦酶反应终止液。三、ELISA应用实例快速ELISA试剂盒ELISA试剂盒25商品化产品：非典型肺炎冠状病毒抗体酶联免疫试剂盒克伦特罗检测试剂盒；磺胺二甲嘧啶及磺胺二甲氧嘧啶检测试剂盒；氯霉素检测试剂盒；商品化产品：26酶免疫分析仪器酶免疫分析仪器27抗原和抗体在体内进行的反应称为免疫反应，在体外进行的反应称为血清学反应。用洗涤的方法将固相载体上的复合物与其他物质分离；测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐非典型肺炎冠状病毒抗体酶联免疫试剂盒克伦特罗检测试剂盒；这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。例如杀暝松（FN）、ELISA方法的建立它具有快速、灵敏度高、测定步骤简便、成本低、操作安全等特点，完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：①包被抗原或抗体的固相载体；1971年瑞典学者Engvail和Perlmann,荷兰学者VanWeerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法，即酶联免疫吸附测定法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)。主要有除草剂与杀虫剂两大类将抗原或抗体固定于合适的载体上，并保持其生物活性．使抗原或抗体与某种酶连接．这种酶标抗原或抗体同时其有免疫活性和酶的活性；饲料中有害微生物的快速筛检（如沙门氏菌）饲料中毒素的测定（主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素）4.抗原抗体反应抗原与抗体相互作用是免疫学的基础，二者通过大量非共价键连接，包括静电力、氢键、疏水作用和范德华力等。